生孢梭菌半固體培養基菌落計數方法的研究

劉曉菲（華北制藥河北華民藥業有限責任公司，河北藁城 052165）

生孢梭菌半固體培養基菌落計數方法的研究

劉曉菲
（華北制藥河北華民藥業有限責任公司，河北藁城 052165）

目的：建立使用半固體培養基進行生孢梭菌菌落計數的方法，使菌落計數結果能夠接近最大活菌數。方法：接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽培養基中，30～35℃培養18～24小時，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋生孢梭菌菌液至與標準比濁管相同的濃度，用10倍稀釋法分別稀釋至1×10-6、1×10-7、1×10-8三個稀釋級備用。分別配制瓊脂濃度為0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%的6種硫乙醇酸鹽培養基，分別取三個稀釋級的菌液1mL接種至配制好的上述6種硫乙醇酸鹽培養基中，同時在胰酪大豆胨瓊脂培養基上接種等量菌液，并放入厭氧袋中，將接種好的上述培養基至35℃培養18～24小時，進行菌落計數并比較結果。結果：半固體培養基計數法比厭氧袋計數法效果好，使用瓊脂濃度為0.5%的硫乙醇酸鹽培養基，30～35℃培養18小時，菌落計數最多，最接近最大活菌數。結論：生孢梭菌半固體培養基計數法適用于生孢梭菌計數。

生孢梭菌；半固體培養基；菌落計數

藥品無菌檢查所用的培養基質量是影響其試驗結果的一個重要因素，因此應嚴格控制無菌試驗所用培養基質量[1]。我國現行《中華人民共和國藥典》（2015年版）[2]規定無菌檢查所用培養基需進行靈敏度試驗，采用接種小于100CFU（菌落形成單位）靈敏度檢查用菌的方法。生孢梭菌是無菌試驗培養基靈敏度檢查的質控菌之一，但是其計數方法缺乏可操作性。……