遼寧地區奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌的血清型及耐藥性調查

楊彩霞,張　冰,寧鵬飛,黃程程,孫　磊,高　雁,姜維勝,劉明春

(1.沈陽農業大學畜牧獸醫學院,遼寧沈陽110866;2.遼寧農牧業機械研究所有限公司,遼寧沈陽110036;3.沈陽禾豐反芻動物飼料有限公司,遼寧沈陽110164)

遼寧地區奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌的血清型及耐藥性調查

楊彩霞1,張冰1,寧鵬飛1,黃程程1,孫磊1,高雁2,姜維勝3,劉明春1

(1.沈陽農業大學畜牧獸醫學院,遼寧沈陽110866;2.遼寧農牧業機械研究所有限公司,遼寧沈陽110036;3.沈陽禾豐反芻動物飼料有限公司,遼寧沈陽110164)

對遼寧地區16家規模化奶牛場總計1 609頭泌乳期奶牛臨床型乳房炎進行了調查,并對患病奶牛乳樣進行大腸桿菌的分離、鑒定及藥物敏感性試驗.結果奶牛臨床型乳房炎頭發生率為6.96%,乳區發生率為2.35%;共分離鑒定出84株大腸桿菌,分離率為55.63%;血清型鑒定結果表明O51、O148、O60、O21、O77、O17、O6、O158、O101、O12510個血清型為優勢血清型.采用肉湯微量稀釋法測定21種臨床常用抗菌藥物對84株大腸桿菌分離株的最小抑菌濃度(MICs),表明分離菌對磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲基異噁唑、甲砜霉素高度耐藥;對氧氟沙星、環丙沙星、慶大霉素較敏感.

奶牛乳房炎;大腸桿菌;血清型;耐藥性

乳房炎是由乳腺感染、外傷或化學刺激而引起的乳房炎性反應,乳腺感染在生產上比較常見,即由某些病原微生物感染乳腺組織而導致的乳房炎癥.乳房炎分為臨床型和隱性型,是致使全世界牛場經濟損失最嚴重的疾病.已發現約有150多種病原菌能夠引起奶牛乳房炎[1],其中主要是鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、隱秘桿菌和綠膿桿菌等.現階段國內外仍主要采用抗菌藥物治療奶牛乳房炎.但是隨著抗菌藥物的廣泛及長期的不合理應用,使得病原菌產生了很強的耐藥性,耐藥菌株逐年增多,多藥耐藥現象越來越嚴重.本試驗對遼寧地區奶牛進行了臨床型大腸桿菌的分離、鑒定和藥物敏感性試驗,以期為遼寧地區奶牛乳房炎的有效防治提供理論依據.

1　材料與方法

1.1材料營養肉湯(NB)、營養瓊脂、麥康凱瓊脂,均購自北京奧博星生物技術責任有限公司;大腸桿菌ATCC25922,購自中國獸醫藥品監察所菌種保藏中心;腸桿菌科生化常規鑒定管,購自杭州天和微生物試劑有限公司;藥敏試驗用藥標準品和大腸桿菌"O"抗原定型血清,均購自中國獸醫藥品監察所.

1.2方法

1.2.1乳樣的采集分別采集遼寧省不同地區的16家奶牛場臨床型乳房炎奶牛的乳樣.牛只按常規擠奶消毒后,每個乳頭擠去頭2～3把乳后無菌采集乳樣3 mL左右于滅菌的塑料離心管中,做好標記,放于含冰袋的保溫箱中,盡快運至實驗室待檢.

1.2.2大腸桿菌分離與鑒定將乳樣涂抹于麥康凱培養基中,置37℃恒溫箱培養24 h后觀察,根據菌落形態初步判定細菌類屬.將初步分離的病原菌接種于腸桿菌科生化常規鑒定管中,孵育18 h～24 h后觀察結果,根據鑒定結果編碼鑒定手冊判定細菌種類.

1.2.3血清型鑒定采用玻板凝集反應和試管凝集反應,具體操作和判定按照大腸桿菌"O"抗原定型血清使用說明書進行.

1.2.4藥敏試驗采用肉湯微量稀釋法測定21種藥物對大腸桿菌分離株的MICs,測定方法及判斷標準參照2013年美國臨床和實驗室標準化研究所的標準[2].

2　結果與分析

2.1遼寧地區奶牛臨床型乳房炎調查結果對遼寧地區16家規模化奶牛場的1 609頭泌乳期奶牛進行臨床型乳房炎流行病調查.共檢測出112個臨床型乳房炎病例,采集了臨床型乳房炎樣品151份進行大腸桿菌病原分離鑒定,臨床型乳房炎頭發生率為6.96%,乳區發生率為2.35%.

2.2遼寧地區奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌分離鑒定結果挑取在麥康凱鑒別培養基上呈粉紅色帶金屬光澤的菌落,經過染色鏡檢、生化鑒定,共鑒定出84株大腸桿菌,分離率為55.63%.

用大腸桿菌"O"抗原定型血清對大腸桿菌分離株進行"O"型鑒定,共鑒定出59株分離菌的血清型,占分離菌的70.2%.其中大部分菌株具有1～2種血清型,少數具有多種血清型,共鑒定出24種血清型.其中以O51、O148、O60、O21、O77、O17、O6、O158、O101、O12510個血清型為主,共35株,占已定型血清的59.3%.

2.3大腸桿菌分離株藥物敏感性試驗結果21種抗菌藥物對84株奶牛乳房炎大腸桿菌的MIC值見表1.大腸桿菌分離株對磺胺類藥物耐藥率最高,其中對磺胺間甲氧嘧啶100.0%耐藥,對磺胺甲基異噁唑的耐藥率達98.8%;對甲砜霉素、土霉素的耐藥率也高達94.0%和80.9%;對阿莫西林、氨芐西林、乙酰甲喹、多西環素相對敏感;對喹諾酮類藥物敏感率最高,尤其對氧氟沙星的敏感率高達97.6%.

表1　奶牛乳房炎大腸桿菌分離株對21種抗菌藥物的耐藥情況

2.4遼寧地區奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌耐藥譜分析進行藥敏試驗的21種抗菌藥物分屬10類,其中青霉素類2種,頭孢菌素類2種,四環素類3種,氨基糖苷類3種,酰胺醇類3種,喹諾酮類3種,磺胺類2種,大環內酯類、多肽類和喹噁啉各1種.藥敏試驗表明,同類藥物之間存在著不同程度的交叉耐藥現象.因此從每類藥物中選出一個代表,即氨芐西林(a)、頭孢噻呋(c)、四環素(t)、慶大霉素(g)、氟苯尼考(f)、恩諾沙星(e)、磺胺間甲氧嘧啶(s)、阿奇霉素(z)、多黏菌素(p)、乙酰甲喹(m),共計10類,分析統計遼寧地區奶牛臨床型乳房炎大腸桿菌對這10類抗菌藥物的耐藥情況(詳見表2).遼寧地區奶牛乳房炎大腸桿菌有46種耐藥譜,以s耐藥譜菌株最多,達16.7%.多藥耐藥情況嚴重,最多耐受8類抗菌藥物.

表2　遼寧地區奶牛乳房炎大腸桿菌對10類抗菌藥物的耐藥譜

3　討論

據報道,呼和浩特[3]、江蘇[4]、西安[5]地區奶牛臨床型乳房炎頭發生率分別為50.4%、7.2%、4.37%.從本試驗調查結果得知,遼寧地區奶牛臨床型乳房炎頭發生率相對較低.本研究發現,大腸桿菌為遼寧地區奶牛臨床型乳房炎的主要致病菌,其分離率(55.63%)與寧夏[6]地區大腸桿菌的分離率(65.3%)相近,高于長春[7]、山東泰安[8]等地區大腸桿菌的分離率,也高于Su等[9]人的報道.本試驗中分離鑒定的大腸桿菌以O51、O148及O60等10個血清型為主,占已定型血清的59.3%.已定型的59株菌包含了24種血清型,表明大腸桿菌血清型具有復雜性和多樣性.84株分離菌株對磺胺類藥物、甲砜霉素、土霉素等耐藥率較高,但對氨基糖苷類藥物敏感性相對較高,對喹諾酮類藥物敏感率最高.本研究結果與四川、內蒙和上海地區的報道結果基本一致[10-11].

本試驗采樣的16家奶牛場分屬于沈陽、錦州、阜新、盤錦四個地區.不同地區的奶牛乳房炎頭發生率有所不同,阜新較高(20.17%),沈陽(7.30%)、錦州(3.45%)、盤錦(6.64%)較低;阜新地區的大腸桿菌分離率(62.5%)也最高.大腸桿菌血清型復雜,未見其分布規律.各個地區的耐藥表型沒有明顯差異,均對磺胺類藥物和甲砜霉素高度耐藥,對喹諾酮類100%耐藥,對氯霉素,慶大霉素高度敏感.說明各地區可能存在相似的用藥習慣,建議加強對臨床用藥常識的普及,避免抗菌藥物的不合理使用,以避免新的耐藥菌株的產生,并根據藥敏試驗結果指導臨床科學合理使用抗菌藥物.

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S852.61

B

0529-6005(2016)06-0092-02

2015-04-16

遼寧省科學技術廳科技特派、農民技術員培訓項目(2013030055-201)

楊彩霞(1989-),女,碩士生,主要從事獸醫藥理與毒理學的研究,E-mail:yang_chaixia@163.com

劉明春,E-mail:liumingchun@sina.com