一種簡單高效的新生鼠海馬神經元原代培養方法

謝麗，　趙樹進，　嚴華成，3，　石磊

（1.廣州軍區廣州總醫院藥劑科，廣東廣州　510010；2.廣州中醫藥大學，廣東廣州　510006；3.廣州軍區疾病預防控制中心，廣東廣州　510507）

·基礎研究·

一種簡單高效的新生鼠海馬神經元原代培養方法

謝麗1，2，趙樹進1，嚴華成1，3，石磊1

（1.廣州軍區廣州總醫院藥劑科，廣東廣州510010；2.廣州中醫藥大學，廣東廣州510006；3.廣州軍區疾病預防控制中心，廣東廣州510507）

【目的】建立一種簡單、高效、高純度的新生小鼠海馬神經元的原代培養方法。【方法】取出生24 h內的C57BL/6J新生鼠，分離海馬組織，采用胰蛋白酶消化加機械吹打的方法獲得單個細胞，用含體積分數1%B27及2%Glutamax-100X、終濃度25 μmol/L Glutamate的Neurobasal-A培養基接種培養，3 d后用去Glutamate成分的上述培養基換液，并加阿糖胞苷作用48 h以抑制膠質細胞增長。于倒置相差顯微鏡下觀察細胞的生長狀態，采用微管蛋白相關標志物2（MAP2）及Hoechst 33258免疫熒光染色鑒定神經元純度。【結果】此培養方法獲得的海馬神經元生長狀態良好，細胞形態從接種時的圓形透亮、無突起，到培養第7天后發展為神經元胞體聚集、樹突發達并形成縱橫交錯的神經網絡；經鑒定，神經元的純度高達97.2%以上，且能穩定存活2～3周。【結論】該方法操作簡單、高效，所得神經元純度高，結果穩定。

海馬神經元；原代培養；新生小鼠

海馬是大腦邊緣系統的一個重要部分，參與記憶、學習、認知、情緒等多種高級精神活動［1］。體外培養海馬神經元是目前研究阿爾茨海默病、癲癇、腦卒中等神經系統疾病的重要模型［2］。自1977 年Banker等［3］首次在體外成功分離并培養出海馬神經元以來，海馬神經元的體外分離培養技術一直在不斷地發展和完善。……