過表達DKK1、Sost重組腺病毒載體的構建及其對MG63細胞和相關蛋白的影響

萬雷，　黃宏興，　黃紅，　柴生颋，　魏合偉，　張志海，　王吉利

（1.廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院，廣東廣州　510240；2.廣州中醫藥大學，廣東廣州　510405）

過表達DKK1、Sost重組腺病毒載體的構建及其對MG63細胞和相關蛋白的影響

萬雷1，黃宏興1，黃紅2，柴生颋1，魏合偉1，張志海1，王吉利2

（1.廣州中醫藥大學附屬骨傷科醫院，廣東廣州510240；2.廣州中醫藥大學，廣東廣州510405）

【目的】針對Wnt信號通路抑制因子Dickkopf（DKK）1、骨硬化蛋白Sclerostin（Sost）基因構建過表達重組腺病毒載體，觀察其對MG63細胞和相關蛋白的影響。【方法】構建DKK1、Sost過表達重組腺病毒載體，將培養好的MG63細胞分為空白對照組、空載病毒組（NC對照組）、過表達DKK1組、過表達Sost組、過表達DKK1+Sost組5組，根據組別不同分別用上述過表達重組腺病毒感染MG63細胞，觀察細胞增殖、堿性磷酸酶（ALP）活性、鈣離子濃度和骨調節蛋白表達情況。【結果】與空白對照組比較，過表達DKK1組、過表達Sost組、過表達DKK1+Sost組的細胞光密度值、ALP活性值均顯著降低，而鈣離子濃度顯著升高，以過表達DKK1+Sost組變化最明顯（P＜0.01）。與空白對照組比較，過表達DKK1組、過表達Sost組、過表達DKK1+Sost組的骨保護蛋白（OPG）、低密度脂蛋白受體相關蛋白（Lrp）5、骨形態發生蛋白（BMP）2、結締組織生長因子（CTGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）2、骨橋蛋白（OPN）表達量均降低，而腫瘤壞死因子（TNF）-α表達量則升高，以過表達DKK1+Sost組變化最明顯，組間比較差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。【結論】過表達DKK1、Sost可降低MG63細胞增殖和ALP活性，升高鈣離子濃度，對骨調節蛋白有一定影響，尤以兩者同時過表達時的作用最強。

DKK1；Sost；過表達基因；腺病毒；MG63細胞；細胞培養

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