金銀花提取物的體外抑菌試驗

阮武營，張俊婷，黃宗梅，劉守川

（1.開封市動物疫病預(yù)防控制中心，河南　開封　470002；2.開封市第二人民醫(yī)院；3.河南農(nóng)業(yè)大學；4.洛陽普萊柯生物工程股份有限公司）

金銀花提取物的體外抑菌試驗

阮武營1，張俊婷2，黃宗梅3，劉守川4

（1.開封市動物疫病預(yù)防控制中心，河南開封470002；2.開封市第二人民醫(yī)院；3.河南農(nóng)業(yè)大學；4.洛陽普萊柯生物工程股份有限公司）

分別用藥敏片法、管碟法測定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對供試菌種的抑菌效果。結(jié)果表明：金銀花黃酮類、綠原酸類提取物對鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌抑菌效果明顯，對豬沙門氏菌抑菌效果次之。

金銀花；黃酮類；綠原酸類；抑菌效果

現(xiàn)代醫(yī)學，特別是化學藥物，面臨著越來越多的問題，例如，毒副作用、抗藥性、病癥不能徹底根除等等。隨著人們醫(yī)療保健意識的增強，人們越來越追求綠色食品，純天然制品。“回歸自然”，崇尚天然藥物，已經(jīng)成為一種世界性的潮流。金銀花的主要化學成分是綠原酸、異綠原酸、白果酸、咖啡酸、本樨草素、木樨草素-7-葡萄甙、β-谷甾醇、豆甾醇、p-谷甾醇-D-G甙、豆甾醇-D-D甙及揮發(fā)油等，這些化學成分均具有強的抗菌作用。據(jù)報道，銀花醇浸液對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎桿菌、腦膜炎雙球菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌、百日咳桿菌、綠膿桿菌、結(jié)核桿菌、霍亂桿菌等多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有一定的抑菌作用，服用后，具有無毒、無害、無殘留、無耐藥性的優(yōu)勢。試驗分別采用了藥敏片法、管碟法來測定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌、豬沙門氏菌的抑菌環(huán)大小，來分析判定黃酮類、綠原酸類的抑菌效果，為應(yīng)用于臨床實踐，預(yù)防和治療幾種常見的細菌性疾病提供理論依據(jù)，現(xiàn)將試驗結(jié)果報告如下：

1　材料與方法

1.1黃酮類、綠原酸類

金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物由河南省動物性食品安全重點實驗室提供，藥品均為無菌。

1.2供試菌種

豬鏈球菌（Porcine streptococcus）、豬沙門氏菌（PrcineSalmonella）、鴨巴氏桿菌（Duck pasteurella）均系開封市動物疫病預(yù)防控制中心保存菌種。

1.3藥敏片法測定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對供試菌的抑菌作用

首先取15 ml瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后，將各種供試菌懸液取1 ml注入培養(yǎng)基內(nèi)搖均勻，再用酒精棉球吸取多余的菌懸液，制成含菌平板，然后用無菌鑷子夾取含有黃酮類、綠原酸類的藥敏片貼在含菌平板上，每皿貼4片，每菌作3次重復(fù)，細菌培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24 h，測量藥敏片周圍抑菌圈直徑大小，比較抑菌效果。

1.4管碟法測定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對供試菌的抑菌作用

首先取15 ml瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后，將各種供試菌懸液取1 ml注入培養(yǎng)基內(nèi)搖均勻，再用酒精棉球吸取多余的菌懸液，制成含菌平板，然后用無菌鑷子夾無菌牛津杯放在含菌平板上，用鑷子輕按一下，每皿放3個牛津杯，每菌作3次重復(fù)，加入200 μl金銀花提取液（原液含量為200 μg/ml），放在4℃冰箱擴散24 h后，在細菌培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24 h，測量抑菌圈直徑大小，比較抑菌效果。

2　結(jié)果與分析

2.1藥敏片法測定金銀花黃酮類、綠原酸類提取物對供試菌種的抑菌效果

金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌有明顯的抑菌作用；對豬沙門氏菌抑制作用次之；綠原酸類對細菌的抑菌作用略強于黃酮類對細菌的抑菌作用。結(jié)果見表1。

表1　藥敏片法測定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對供試菌種的抑菌環(huán)直徑（mm）

2.2管碟法測定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對供試菌種的抑菌效果

試驗結(jié)果與藥敏片法基本一致，金銀花的黃酮類，綠原酸類提取物對鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌有明顯的抑菌作用；對豬沙門氏菌抑制作用次之；綠原類對細菌的抑菌作用略強于黃酮類對細菌的抑菌作用，結(jié)果見表2。

表2　管碟法測定金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物對供試菌種的抑菌環(huán)直徑（mm）

3　小結(jié)與討論

金銀花的化學成分主要有黃酮類化合物、木樨草素、綠原酸、異綠原酸和一些揮發(fā)油。其中抗菌有效成分以綠原酸和異綠原酸以及黃酮類化合物為主。現(xiàn)代藥理學研究證明，植物金銀花內(nèi)含有木樨草素、肌醇、皂貳IV等有效成分，因其含有大量的還原基團，所以對多種致病菌具有抑制作用。抑菌試驗證明，中藥金銀花提取物對巴氏桿菌、鏈球菌、沙門氏菌具有良好的抗菌活性，從各菌種的抑菌環(huán)大小來看，金銀花黃酮類、綠原酸類提取物對鴨巴氏桿菌、豬鏈球菌抑菌效果明顯，對豬沙門氏菌抑菌效果次之。標準綠原酸對供試菌周圍無抑菌環(huán)，經(jīng)查資料可知，金銀花提取物中抑菌成分除綠原酸和異綠原酸不耐高溫外，其他抑菌成分能耐高溫，因此，可能是由于保存或干燥過程中破壞了其有效成分。綠原酸類、黃酮類制成的藥敏片，用無真空干燥的比用真空干燥的抑菌效果明顯，說明溫度對綠原酸類、黃酮類有影響。

臨床資料表明，金銀花提取物對多種細菌所致的感染性疾病有良好的治療效果。現(xiàn)代試驗研究顯示，金銀花提取物能抑制細菌的糖、蛋白質(zhì)、核酸代謝，抑制細菌繁殖，提高巨噬細胞、中性白細胞吞噬功能。該試驗所用金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物具有清熱解毒作用，對試驗提供的常見菌種都有不同程度的抑菌作用，可為預(yù)防和治療幾種常見的細菌性疾病提供理論依據(jù)，如傳染性漿膜炎是由鴨疫巴氏桿菌（PA）引起鴨或其他禽類的一種敗血性疾病，此病對2～3周齡的雛鴨易感性很強，感染率可達90%，死亡率在5%～8%，是造成養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟損失最主要的疾病之一；沙門氏菌引起的豬副傷寒，是腸道的重要致病菌，其侵害腸道，可引起腸炎。該試驗結(jié)果也可為開發(fā)金銀花的黃酮類、綠原酸類提取物作為治療鴨疫巴氏桿菌、豬副傷寒、豬鏈球菌感染的藥物提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。

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［3］林麗英，梁藝.濕熱片抑菌實驗［J］.中藥材，2003，26 （lO）：748

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S853.74

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1004-5090（2016）07-0012-02

2016-05-13）