慢性胃炎脾胃濕熱證骨橋蛋白的表達及臨床意義

黃曉映 曾耀明 余維微 鄭偉偉 何璠

·診治分析·

慢性胃炎脾胃濕熱證骨橋蛋白的表達及臨床意義

黃曉映 曾耀明 余維微 鄭偉偉 何璠

目的 探討骨橋蛋白（OPN）在慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中的表達。方法 經內鏡活檢獲取胃竇黏膜，采用免疫組化SABC法檢測比較慢性胃炎脾胃濕熱證、脾虛氣滯證患者胃竇黏膜組織和正常胃竇黏膜組織中OPN的表達情況。結果 OPN在脾胃濕熱組、脾虛氣滯組及正常胃竇黏膜組織中陽性表達率分別80.00% 、45.16%和 10.00%，差異有統計學意義（P＜0.05）；3組患者胃竇黏膜中均有OPN表達，脾胃濕熱證組高于脾虛氣滯組和正常對照組。結論 慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中OPN的表達高于脾虛氣滯證及正常對照組，提示OPN的測定可能對慢性胃炎證型的病情判斷有一定意義。

慢性胃炎 脾胃濕熱證 骨橋蛋白

慢性胃炎屬于臨床常見病﹑多發病，脾胃濕熱證是慢性胃炎的主要證型之一。有研究表明，慢性胃炎的證型與胃黏膜病理改變存在十分密切的關系［1］。骨橋蛋白（OPN）是一種有多功能的非膠原性骨基質磷酸化糖蛋白，在炎癥和腫瘤的生理病理過程中起重要作用［2］。本文探討骨橋蛋白（OPN）在慢性胃炎脾胃濕熱證患者胃竇黏膜組織中的表達。

1　臨床資料

1.1一般資料 2014年1月至12月本院消化科門診就診的慢性淺表性胃炎患者61例，分為2組。脾胃濕熱證組30例，男18例，女12例；平均年齡（47.5±10.7）歲。平均病程（7.64±3.65）年。幽門螺桿菌（Hp）陰性11例，Hp陽性19例。脾虛氣滯證組31例，男17例，女14例；平均年齡（43.4±10.3）歲。平均病程（7.70±2.37）年。Hp陰性16例﹑Hp陽性15例，兩組在年齡﹑性別和Hp感染﹑病程等方面比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。另選擇10名健康體檢者為正常對照組，其中男5例，女5例，平均年齡（40.22±9.23）歲。診斷標準：慢性胃炎診斷標準按照《慢性胃炎的中西醫結合診治方案（草案）》［3］及《中藥新藥臨床研究指導原則》［4］。排除標準：（1）不符合上述診斷標準。（2）有明顯兼夾證或合并證候。（3）合并肝﹑腎﹑造血系統﹑內分泌疾病等嚴重原發性疾病及精神病患者。（4）病情危重患者。（5）慢性萎縮性胃炎﹑消化性潰瘍或胃腸道腫瘤患者。

1.2方法 （1）步驟：常規胃鏡檢查時取胃竇黏膜2顆，石蠟標本常規4μm連續切片，56℃烤箱中過夜，脫蠟至水后室溫下置于3%過氧化氫中5min，枸櫞酸工作液高壓鍋噴氣2min進行抗原修復，滴加一抗，4℃過夜，PBS清洗后滴加二抗反應20 min，PBS清洗后DAB顯色。蘇木精復染，常規梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察顯色結果。主要試劑：OPN兔抗人多克隆抗體（武漢博士德公司）；即用型SABC-POD（兔IgG）試劑盒（武漢博士德公司）。（2）判定標準：鏡下觀察胃黏膜上皮細胞，以胞漿出現棕黃色顆粒為陽性，高倍鏡下取4個不同視野，各計數100個細胞，無陽性細胞為（-），陽性細胞＜10%為（+），陽性細胞占10%～50%為陽性（++），陽性細胞＞50%為強陽性（+++）。

1.3統計學方法 采用 SPSS 17.0 統計軟件。計量資料兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2　結果

3組免疫組化結果比較 見表1﹑圖1﹑2﹑3。

作者單位：325000 浙江中醫藥大學附屬溫州中醫院消化科

圖1　脾胃濕熱組OPN 表達情況（×40倍）

圖2　脾虛氣滯組OPN 表達情況（×40倍）

圖3　正常組OPN 表達強度情況（×40倍）

表1　3組 OPN 表達強度比較（n）

3　討論

慢性胃炎是消化科門診最常見疾病，嚴重影響患者的工作與生活質量，目前西醫治療易復發，而中醫藥對本病的治療積累了豐富的經驗，因此積極開展中醫藥對本病的診斷與治療研究具有現實意義。祖國醫學無“慢性胃炎”病名，根據其癥狀相當于“胃痞”﹑“胃痛”等范疇，中醫證型常見肝胃不和﹑肝胃郁熱﹑脾胃濕熱﹑脾虛氣滯﹑脾胃陰虛﹑胃絡瘀血等幾種。溫州地處浙南沿海，常年空氣濕度較大，當地居民有嗜海鮮﹑啤酒飲食習慣。臨床所見慢性胃炎患者表現為脾胃濕熱證，脾主運化水液，濕邪困脾，導致脾胃氣機升降失常，納運失司，故臨床可見脘痞腹脹，食欲減退，濕邪蘊久化熱，則表現為口苦口臭，小便黃，大便溏等癥狀?，F代醫學證實，胃竇黏膜能較好的從微觀層面反映胃部病變，因此作者選擇脾胃濕熱證患者的胃黏膜組織免疫組化與證型進行同步觀察，從分子水平了解脾胃濕熱證的變化規律，提高對脾胃濕熱證本質的認識，充實四診客觀化研究和微觀辨證的成果，切實提高中醫證的微觀研究水平。骨橋蛋白是一種有多功能的非膠原性骨基質磷酸化糖蛋白，在炎癥和腫瘤的生理病理過程中起重要作用［2］。故作者選擇骨橋蛋白作為觀察指標。本資料顯示，正常對照組胃竇黏膜中OPN的表達極低，而慢性胃炎OPN的表達明顯升高，且脾胃濕熱組明顯高于脾虛氣滯組。慢性胃炎脾胃濕熱證組胃黏膜OPN表達顯著高于非脾胃濕熱組（P＜0.05），分析認為由于在水液的代謝過程中，肺為水之上源，腎為水之下源，而脾居中焦，為水液升降輸布的樞紐，脾運化失職，氣機升降失常則產生濕邪內阻，濕熱內蘊等病機，有研究發現清熱利濕藥物能抑制小鼠腎組織OPN的表達［6］，因此推測OPN的高度表達可能是“脾胃濕熱證”的微觀辨證證據之一，清熱利濕治法能下調慢性胃炎胃竇黏膜OPN的表達。Junnila等［5］研究發現，OPN在胃癌組織中過表達，提示OPN在胃癌的發生﹑發展中具有重要作用。另有報道在正常黏膜﹑不典型增生胃黏膜﹑胃癌3種病變組織中，OPN陽性表達率隨病變程度加重呈逐漸上升趨勢［7］，故臨床應重視對慢性胃炎脾胃濕熱證的及時治療與病情監測。

綜上，作者認為OPN的高度表達可能是“脾胃濕熱證”的微觀證據之一，但要明確 OPN 在慢性胃炎脾胃濕熱證發病機制﹑診斷和治療后的表達情況，仍需進一步深入研究。

1邢海倫，胡玲，羅琦，等.幽門螺桿菌相關胃病脾胃濕熱證患者熱休克蛋白70和白細胞介素-8的表達.廣東醫學，2015，26（1）：133～136.

2Park JW， Lee SH， Go du M，et al.Osteopontin depletion decreases inflammation and gastric epithelial proliferation during Helicobacter pylori infection in mice Lab Invest，2015，95（6）：660～671.

3中國中西醫結合學會消化系統疾病專業委員會.慢性胃炎的中西醫結合診治方案（草案）.中國中西醫結合雜志，2005， 25（2）： 172～175.

4鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導原則（試行）.北京：中國醫藥科技出版社， 2002： 371.

5黃彥彬，張佩青，楊馨，等.腎衰瀉濁丸對單側輸尿管梗阻大鼠腎組織核轉錄因子κB與肝細胞生長因子及骨橋蛋白mRNA表達的影響.中國中西醫結合腎病雜志，2011（4）：306～309.

6Junnila S， Kokkola A， Mizuguchi T，et al.Gene expression analysis identifies over-expression of CXCL1， SPARC， SPP1， and SULF1 in gastric cancer. Genes Chromosomes Cancer， 2010， 49：28～39.

7蘇薇， 吳會超， 楊瑩瑩，等. 胃泌素與骨橋蛋白在胃癌及癌前病變組織中表達的相關性. 世界華人消化雜志， 2014， 22（9）：1275～1279.

浙江省溫州市中醫藥科研課題（2014ZB008）