NK細(xì)胞與早發(fā)型重度子癇前期疾病進(jìn)展的相關(guān)性研究

趙秀伶　馬紅梅　馬　唯　單志娟　洛　麗

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院產(chǎn)科， 北京 101100； 2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院檢驗(yàn)科， 北京 101100；3.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院病理科， 北京 101100)

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· 臨床研究 ·

NK細(xì)胞與早發(fā)型重度子癇前期疾病進(jìn)展的相關(guān)性研究

趙秀伶1*馬紅梅1馬唯1單志娟2洛麗3

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院產(chǎn)科， 北京 101100； 2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院檢驗(yàn)科， 北京 101100；3.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院病理科， 北京 101100)

目的 探討自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell, NK)與早發(fā)型重度子癇前期發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)關(guān)系。方法選取2012年1月至2014年12月在北京潞河醫(yī)院定期孕檢的重度子癇前期患者44例(早發(fā)型重度子癇前期20例,晚發(fā)型重度子癇前期24例)為研究對(duì)象。選取同時(shí)期正常無合并癥的患者20例為對(duì)照組。采集母親外周血2 mL，胎兒臍帶血2 mL及蛻膜組織。采用流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)外周血和臍帶血中的CD3-CD16-CD56+的百分率；蛻膜組織應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，計(jì)算CD3-CD16-CD56+的數(shù)量取均值，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析法讀取CD56+細(xì)胞平均灰度值。結(jié)果重度子癇前期組外周血、臍血、蛻膜組織中的NK細(xì)胞數(shù)量高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；早發(fā)型重度子癇前期組臍血、蛻膜組織中NK細(xì)胞數(shù)量高于晚發(fā)型重度子癇前期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。重度子癇前期外周血、蛻膜組織中的NK細(xì)胞數(shù)量與病程進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)(r=-0.397，P=0.040；r=-0.391，P=0.044)，與血壓升高幅度呈正相關(guān)(r=-0.597，P=0.001；r=-0.416，P=0.031)。蛻膜組織中的NK細(xì)胞數(shù)量與確診重度子癇前期的孕周呈負(fù)相關(guān)(r=-0.594，P=0.003)。結(jié)論重度子癇前期患者外周血、臍血、蛻膜中NK細(xì)胞數(shù)量增加，早發(fā)型重度子癇前期增加更為顯著。外周血、蛻膜中NK細(xì)胞數(shù)量與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

早發(fā)型重度子癇前期； 自然殺傷細(xì)胞； 蛻膜

妊娠期高血壓疾病是嚴(yán)重的妊娠期特發(fā)性疾病之一，嚴(yán)重威脅母兒生命。我國(guó)發(fā)生率9.4%～10.4%，國(guó)外7%～12%，其中早發(fā)型重度子癇前期(孕34周前)約占妊娠期高血壓疾病的0.9%[1]。妊娠期高血壓疾病對(duì)母嬰健康的危害以早發(fā)型重度子癇前期最為明顯。近年來對(duì)于早發(fā)型重度子癇前期的防治，是產(chǎn)科的熱點(diǎn)問題之一。自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell, NK)細(xì)胞可誘發(fā)子癇前期。但是NK細(xì)胞與子癇前期的病情嚴(yán)重程度，子癇前期的起始時(shí)間關(guān)系尚不明確。本研究通過早發(fā)型重度子癇前期NK細(xì)胞表達(dá)的水平，探討NK細(xì)胞與早發(fā)型重度子癇前期發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)關(guān)系，為NK細(xì)胞與子癇前期發(fā)病機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1　研究對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選取2012年1月至2014年12月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院產(chǎn)科門診定期孕檢的單胎重度子癇前期患者為研究對(duì)象，共納入研究44例(早發(fā)型重度子癇前期患者20例，晚發(fā)型重度子癇前期患者24例)。按照2∶1比例，選取同時(shí)期因臀位、骨盆狹窄等產(chǎn)科因素行剖宮產(chǎn)終止妊娠的患者20例為對(duì)照組。所有研究對(duì)象均排除合并慢性高血壓、糖尿病、宮內(nèi)感染、術(shù)前發(fā)熱、甲狀腺疾病、胎膜早破、自身免疫性疾病、腎炎及經(jīng)陰道分娩者。

1.2診斷方法

重度子癇前期的診斷按照謝幸等[2]主編的第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》中妊娠期高血壓疾病的分類與臨床表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)；根據(jù)發(fā)病時(shí)間早晚，將孕34周前診斷的重度子癇前期為早發(fā)型，孕34周后診斷的重度子癇前期為晚發(fā)型[1]。

1.3研究方法

采用前瞻性對(duì)照研究。研究對(duì)象入組后，確診重度子癇前期時(shí)，立即采集孕婦外周靜脈血(2 mL)，對(duì)照組入組時(shí)采集外周血，給予EDTA-K2抗凝，24 h內(nèi)經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3-CD16-CD56+的百分率。剖宮產(chǎn)術(shù)中新生兒娩出后立即留取臍帶血2 mL、給予EDTA-K2抗凝，24 h內(nèi)經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3-CD16-CD56+的百分率。胎盤娩出后30 min內(nèi)取胎盤母體面絨毛組織5～10塊, 約1 cm×1 cm×1 cm的組織, 置入10%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))多聚甲醛溶液中固定24 h以上, 常規(guī)石蠟包埋, 連續(xù)切片,厚4 μm。采用免疫組織化學(xué)(SP)法, CD3、CD16、CD56單抗為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，工作濃度1∶100，每實(shí)驗(yàn)切片高倍鏡下選取3個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)CD3-CD16-CD56+的量取均值。采用計(jì)算機(jī)圖像分析法計(jì)算CD56+細(xì)胞平均灰度值。所有胎盤送病理，排除宮內(nèi)感染。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.1重度子癇前期組與對(duì)照組患者一般情況的比較

3組患者年齡、孕產(chǎn)次、基礎(chǔ)平均動(dòng)脈壓、術(shù)前白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；早發(fā)型重度子癇前期組孕期平均動(dòng)脈壓升高幅度高于晚發(fā)型重度子癇前期組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.027)；病情進(jìn)展速度即：血壓升高到確診重度子癇前期(preeclampsia PE)的時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.047)；2組臨床表現(xiàn)(如以高血壓為主要表現(xiàn)/其他臟器損傷為主要表現(xiàn)所占比例、尿蛋白定量)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

2.2NK細(xì)胞比較

早發(fā)型重度子癇前期組、晚發(fā)型重度子癇前期組的外周血、臍血、蛻膜組織中CD3-CD16-CD56+細(xì)胞數(shù)量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.067，P=0.000；F=7.400，P=0.002；F=8.986，P=0.000)。兩兩比較，早發(fā)型重度子癇前期組外周血、臍血、蛻膜組織中CD3-CD16-CD56+細(xì)胞數(shù)量高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。早發(fā)型重度子癇前期組臍血及蛻膜組織中CD3-CD16-CD56+細(xì)胞數(shù)量高于晚發(fā)型重度子癇前期組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析法計(jì)算CD56+平均灰度值，3組CD56+平均灰度值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩兩比較，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見表3。

2.3NK細(xì)胞與子癇前期相關(guān)性

外周血、蛻膜、臍血中NK細(xì)胞與重度子癇前期的病程進(jìn)展速度及血壓升高幅度相關(guān)性分析：外周血和蛻膜組織中NK細(xì)胞數(shù)量與病程進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)(r=-0.397、r=-0.391)，與平均動(dòng)脈壓升高幅度正相關(guān)(r=0.597、r=0.461)；蛻膜組織NK細(xì)胞數(shù)量與重度子癇前期確診孕周呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)：r=-0.594 ；臍血中NK細(xì)胞與重度子癇前期的病程進(jìn)展、平均動(dòng)脈壓升高程度、確診孕周無相關(guān)(表4)。

3　討論

妊娠子宮最主要的淋巴細(xì)胞是NK細(xì)胞源性的大顆粒細(xì)胞，占淋巴細(xì)胞的70%～80%。胎盤蛻膜表面局部浸潤(rùn)的NK細(xì)胞可能來自于母體外周血NK細(xì)胞和胎兒肝臟趨化而來[3]。蛻膜中的NK細(xì)胞不同于外周血中的細(xì)胞，高表達(dá)CD56，主要表型為CD56+CD16-CD3-[4]。殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(killer cell Ig-like receptor-2DL4, KIR2DL4)通過識(shí)別人類白細(xì)胞抗原-G (human leukocyte antigen-G, HLA-G)，向NK細(xì)胞傳遞抑制性信號(hào)，抑制NK細(xì)胞活性，保護(hù)滋養(yǎng)層細(xì)胞免受NK細(xì)胞殺傷作用，使母體對(duì)胚胎抗原免疫耐受并且控制滋養(yǎng)細(xì)胞的遷徙，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞釋放細(xì)胞因子[5-7]發(fā)揮作用。

表1　3組一般情況比較

△1 mmHg=0.133 kPa.

*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vslate onset preeclampsia group; NK: natural killer cell.

表3　胎盤蛻膜CD56+細(xì)胞平均灰度值比較

表4　重度子癇前期疾病進(jìn)展與NK細(xì)胞的相關(guān)性

NK: natural killer cell; PE:preeclampsia.

蛻膜中的NK細(xì)胞能分泌大量的細(xì)胞因子，如：粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，干擾素、生長(zhǎng)刺激因子-1、腫瘤壞死因子等[3]。干擾素-γ、干擾素-α具有組織滋養(yǎng)葉細(xì)胞遷移作用，引起胎盤淺著床、螺旋動(dòng)脈重鑄受阻，誘發(fā)病理妊娠[8-9]。馬艷娟等[10]發(fā)現(xiàn)，子癇前期孕婦HLA-G分子的表達(dá)明顯減少。李源等[11]的研究提示子癇前期患者胎盤組織KIR2DL4 mRNA表達(dá)明顯降低。HLA-G與KIR2DL4 mRNA低表達(dá)，對(duì)NK細(xì)胞的抑制作用減弱或消失，NK細(xì)胞數(shù)量增生，導(dǎo)致子癇前期。本研究中，重度子癇前期組外周血、臍血及蛻膜組織中NK細(xì)胞數(shù)量明顯高于正常對(duì)照組，提示NK細(xì)胞可能參與了重度子癇前期的發(fā)生。

盡管對(duì)于HLA在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中的作用也得到證實(shí)，但是HLA與重度子癇前期的嚴(yán)重程度以及發(fā)病時(shí)間的關(guān)系報(bào)道很少[13]。早發(fā)型重度子癇前期與晚發(fā)型重度子癇前期發(fā)病機(jī)制不同，母胎免疫耐受機(jī)制的破壞被認(rèn)為是早發(fā)型重度子癇前期發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵。有學(xué)者[12]提出早發(fā)型子癇前期病變可能主要通過胎盤病變影響母體雙方疾病的發(fā)展，而晚發(fā)型子癇前期病變則為直接母體反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，早發(fā)型子癇前期組(<34周)蛻膜組織中NK細(xì)胞數(shù)量明顯高于晚發(fā)型子癇前期組(≥34周)，并且蛻膜組織中的NK細(xì)胞數(shù)量與確診子癇前期的時(shí)間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.594)。推測(cè)蛻膜組織中的NK細(xì)胞的異常增生與重度子癇前期發(fā)病時(shí)間有關(guān)。但是NK細(xì)胞增生的速度、程度與重度子癇前期發(fā)病的關(guān)系還有待進(jìn)一步的研究。

魏軍等[14-15]發(fā)現(xiàn)重度子癇前期患者血清在NK細(xì)胞作用下，血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌血管收縮因子——內(nèi)皮素-1增多，分泌血管舒張因子——前列環(huán)素減少。病理學(xué)研究[16]也顯示，與晚發(fā)型子癇前期相比，早發(fā)型患者胎盤床面積減少，其胎盤的各級(jí)動(dòng)靜脈血管管徑明顯變細(xì)。本研究中，早發(fā)型重度子癇前期患者的平均動(dòng)脈壓升高幅度明顯高于晚發(fā)型重度子癇前期(P=0.027)，且外周血與蛻膜組織中的NK細(xì)胞數(shù)量與孕期血壓升高幅度呈正相關(guān)，考慮與NK細(xì)胞作用下血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的收縮血管物質(zhì)增多有關(guān)。由于血壓明顯升高，縮短了從出現(xiàn)臨床表現(xiàn)到確診重度子癇前期的時(shí)間。本研究提示外周血及蛻膜組織中NK細(xì)胞數(shù)量的增加與病程進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)。提示NK細(xì)胞可能對(duì)重度子癇前期疾病進(jìn)展起作用。筆者推測(cè)早發(fā)型重度子癇前期血壓升高時(shí)，NK細(xì)胞水平可能已經(jīng)升高，加速了病程進(jìn)展，因此NK細(xì)胞可能與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生時(shí)間相關(guān)。

綜上所述，重度子癇前期患者外周血、臍血、蛻膜中NK細(xì)胞數(shù)量增加，早發(fā)型重度子癇前期患者增加更為顯著； NK細(xì)胞與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。但是由于本研究樣本量小，具有局限性，尚需大樣本研究進(jìn)一步證實(shí)。

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編輯孫超淵

Study about the correlation of NK cell with early onset preeclampsia

Zhao Xiuling1*, Ma Hongmei1, Ma Wei1, Shan Zhijuan2, Luo Li3

(1.DepartmentofObstetricsandGynecology,BeijingLuheHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing101100,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingLuheHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing101100,China; 3.DepartmentofPathology,BeijingLuheHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing101100,China)

ObjectiveTo study the correlation of natural killer cell (NK) to early onset preeclampsia. MethodsThis research adopts the case-control study. 44 preeclampsia patients who were regularly checked up in BeiJing LUHE hospital from Jan 2012 to Dec 2014 entered the research. The group included 20 early onset preeclampsia patients and 24 late onset preeclampsia patients. The control group was normal patients at the same period. Collecting maternal peripheral blood umbilical blood and deciduas. We test percentage of NK cell in peripheral and umbilical blood by Flow cytometry. NK cells in deciduas were tested by immunohistochemistry. ResultsThe courts of NK cells in maternal peripheral, umbilical blood and deciduas of early onset preeclampsia and late onset preeclampsia were all higher than those of the normal (P<0.05). It is significantly different. The counts of the NK cells in umbilical blood and deciduas were significantly higher than those of the late onset preeclampsia patients (P<0.05). The NK cell percentage in maternal peripheral blood in early onset preeclampsia patients were higher than in late onset preeclampsia patients.P<0.05. The courts of NK cells in maternal peripheral and deciduas was with negative correlation with course of preeclampsia.(r=-0.397，P=0.040；r=-0.391,P=0.044). It was positive correlation with the degree of elevation of pressure. (r=-0.597，P=0.001；r=-0.416,P=0.031). The courts of NK cells in deciduas was positive correlation with the time of diagnosis. (r=-0.594，P=0.003). ConclusionThe counts of the NK cell in maternal peripheral blood, umbilical blood and deciduas in preeclampsia patients were significantly higher than those of the control. Early onset severe preeclampsia increased significantly. NK cell in maternal peripheral blood and deciduas probably play a role in early onset preeclampsia.

early onset preeclampsia; Natural killer cell; deciduas

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.04.025]

R 71

2016-03-01)

*Corresponding author， E-mail：lhyyzxl@hotmail.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-07-2021∶18網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160714.2118.054.html