Wilson病銅過量負(fù)荷大鼠肝損傷的代謝組學(xué)研究

蔣懷周， 王　鍵， 許晶晶， 董繼揚(yáng)

(1安徽中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臨床學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論教研室，合肥　230031； 2廈門大學(xué)電子科學(xué)系，福建省等離子體與磁共振研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

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Wilson病銅過量負(fù)荷大鼠肝損傷的代謝組學(xué)研究

蔣懷周1， 王鍵1， 許晶晶2， 董繼揚(yáng)2

(1安徽中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臨床學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論教研室，合肥230031；2廈門大學(xué)電子科學(xué)系，福建省等離子體與磁共振研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

目的利用代謝組學(xué)技術(shù)研究銅負(fù)荷大鼠肝組織的小分子變化，探討銅過量對(duì)肝臟小分子代謝的影響。方法16只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組和模型組，以銅負(fù)荷法造模，通過核磁共振氫譜技術(shù)采集大鼠肝組織的代謝輪廓，以PLS-DA方法分析銅中毒后，大鼠肝組織代謝物的變化。結(jié)果與正常組對(duì)比，模型組大鼠肝組織中尿素囊、牛磺酸、肌醇、賴氨酸、尼克酰胺、乙醇胺、乙酸、谷氨酸、酪氨酸、尿苷、甲硫氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、3-羥基丁酸、纈氨酸、乳酸、亮氨酸、苯丙氨酸、N-乙酰天冬氨酸、延胡索酸和腺苷/肌苷的含量升高(P<0.05)，肌酸、天冬酰胺、天冬氨酸、磷酸膽堿和甘露醇的含量降低(P<0.05)。結(jié)論銅對(duì)大鼠肝組織的損傷可能涉及鳥氨酸和三羧酸循環(huán)、磷脂、氨基酸、能量、核苷酸和糖的代謝。

Wilson病；肝豆?fàn)詈俗冃裕淮x組學(xué)；銅負(fù)荷；核磁共振氫譜；肝損傷

Wilson病(Wilson’s disease，WD)是一種常染色體隱性遺傳性銅代謝障礙疾病，由英國(guó)神經(jīng)病學(xué)家Samuel Alexander Kinnier Wilson在1912年首次描述，又稱肝豆?fàn)詈俗冃?hepatolenticular degeneration，HLD)。WD的病理過程是過量的銅沉積于肝臟，當(dāng)肝內(nèi)銅飽和后，銅繼續(xù)在腦、骨、腎臟、角膜等其他組織器官沉積，引發(fā)一系列損傷和相應(yīng)臨床表現(xiàn)[1]。肝臟是WD最早也是最主要的受累器官，肝損傷是多數(shù)WD患者的首發(fā)癥狀，其損害程度與本病預(yù)后密切相關(guān)，也是導(dǎo)致該病患者死亡的重要因素[2]。因此，研究銅對(duì)肝的損傷機(jī)制，對(duì)于探討WD肝損傷及其治療具有一定的意義。

代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)重要組成部分，它是研究生理、病理或者藥物等刺激下生物體代謝物的變化，可廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)的諸多領(lǐng)域。前期研究發(fā)現(xiàn)，核磁共振(nuclear magnetic resonance，NMR)代謝組學(xué)技術(shù)可篩選出與銅負(fù)荷大鼠模型相關(guān)的差異代謝物[3]，在探索銅過量對(duì)機(jī)體毒理方面具有良好的應(yīng)用前景。肝臟是機(jī)體物質(zhì)代謝的中樞器官，也是銅代謝和沉積所涉及的重要器官。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)銅負(fù)荷大鼠肝組織的代謝組學(xué)分析，探討銅負(fù)荷對(duì)肝組織的小分子代謝影響，期望能對(duì)WD肝損傷機(jī)制及其治療提供一定的研究思路。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

12周齡雄性SPF級(jí)Wistar大鼠16只，體質(zhì)量(180±20)g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(皖)2011-002，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)于安徽中醫(yī)藥大學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2主要試劑與儀器

硫酸銅(分析純,上海國(guó)藥集團(tuán))；蘇木精(上海化學(xué)試劑公司)；伊紅(上海化學(xué)試劑公司)；乙醚(分析純,上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司)；TUNEL試劑盒(10279600，美國(guó)Roche公司)；甲醇(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；三氯甲烷(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

Bruker 600 MHz核磁共振譜儀(Bruker-AV600 spectrometer，德國(guó)Bruker公司)；全自動(dòng)生化分析儀(Olmpus AU2700，日本Olympus公司)；病理圖像分析儀(HPIAS-1000，武漢清平影像技術(shù)有限責(zé)任公司)；高通量組織研磨器(SCIENTZ-48，寧波新芝生物科技股份有限公公司)；冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康試驗(yàn)儀器有限公司)。

1.3銅負(fù)荷大鼠模型的建立及樣本采集

適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，大鼠被隨機(jī)分為正常組和模型組，每組8只。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫20-22 ℃，相對(duì)濕度40%-60%，光照12 h、黑暗 12 h。正常組始終自由攝食基礎(chǔ)飼料、飲用自來水；模型組以銅負(fù)荷法[3]造模，具體方法為：連續(xù)12周喂飼含硫酸銅的飼料(1 g/kg)和水(0.185%)。

造模結(jié)束，大鼠禁食12 h，乙醚吸入麻醉，腹主動(dòng)脈采血，用于血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測(cè)；取新鮮肝組織分為兩份，一份置于液氮快速冷凍，以超低溫冰箱(-80 ℃)保存，用于NMR檢測(cè)，另一份以10%中性緩沖甲醛固定，石蠟包埋，用于肝組織病理和細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

1.4血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)

由全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。將儀器比色參數(shù)設(shè)置為主波長(zhǎng)340 nm，副波長(zhǎng)405 nm。檢測(cè)血清ALT時(shí)，取12 μl血清樣品與試劑1(α-酮戊二酸65 mmol/L+還原型輔酶Ⅰ 0.37 mmol/L)混勻，37 ℃恒溫靜置5 min，加入試劑2(L-丙氨酸0.9 mol/L+乳酸脫氫酶25 kU/L)，混勻，延遲1 min后，測(cè)第一測(cè)光點(diǎn)，溫浴3-4 min，測(cè)第二測(cè)光點(diǎn)。測(cè)血清AST時(shí)，除試劑2為L(zhǎng)-天門冬氨酸1.0 mmol/L+蘋果酸脫氫酶5 kU/L，其余參數(shù)及步驟與測(cè)血清ALT相同。

1.5肝組織病理學(xué)檢查

將甲醛固定的待測(cè)組織乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟過夜；石蠟包埋并切片；切片脫蠟至水，蘇木精染色，分化，PBS藍(lán)化；伊紅染色；乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并攝片。

1.6肝組織細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)

以Roche公司原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)盒說明書操作實(shí)驗(yàn)過程。結(jié)果判定：陽(yáng)性肝細(xì)胞核染色呈棕褐色，陰性肝細(xì)胞核染色呈藍(lán)色。根據(jù)隨機(jī)拍取的肝細(xì)胞TUNEL染色照片，光鏡下(400倍)用單盲法計(jì)數(shù)，計(jì)算肝細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index, AI)。具體計(jì)算方法為:AI=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.7核磁共振氫譜技術(shù)采集大鼠肝組織的代謝輪廓

肝組織組織提取：取肝組織樣品置于由甲醇和蒸餾水配置的溶液里，4 ℃勻漿；加入氯仿(1.4 ml)，漩渦樣品；加入蒸餾水(0.7 ml)，再漩渦樣品；4 ℃離心樣品(10 000 r/min×10 min)；將離心所得上清液移至離心管；真空干燥揮發(fā)甲醇；剩余溶液凍干成粉末狀。

肝組織氫譜采集：將凍干粉加入重水配置的550 μl磷酸鹽緩沖液里，震蕩混勻；4 ℃離心10 min(10 000 r/min)，以移液槍將上清液(500 μl)移至核磁管，樣本采集于Bruker 600 MHz核磁共振譜儀完成，使用標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)飽和脈沖序列ZGPR(RD-90°-ACQ)采集1H-NMR譜，實(shí)驗(yàn)溫度296 K，譜寬12 kHz，弛豫延時(shí)長(zhǎng)2 s，采樣點(diǎn)數(shù)32 000，累加次數(shù)64次。

氫譜數(shù)據(jù)處理：MestreNova 9.0軟件將fid數(shù)據(jù)傅里葉變換成NMR譜。將TSP譜峰為零點(diǎn)定標(biāo)NMR譜，對(duì)所得NMR譜進(jìn)行相位校正和基線校正。以自編軟件[4]進(jìn)行譜峰對(duì)齊，截除殘余水信號(hào)和甲醇信號(hào)(分別為：δ5.23-4.68和δ3.40-3.31)，自適應(yīng)分段積分[5]剩余區(qū)域，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行概率商歸一化(probabilistic quotient normalization，PQN)[6]。最后導(dǎo)入SIMCA-P軟件(version 14.0，Umetrics，Sweden)進(jìn)行多變量分析。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1大鼠一般狀態(tài)觀察

正常組大鼠生長(zhǎng)狀態(tài)未見明顯改變；模型組大鼠組于造模過程中逐漸出現(xiàn)食欲減退、毛發(fā)蓬松、光澤度差、精神萎靡、腹瀉、對(duì)外界刺激反應(yīng)減弱等狀態(tài)改變。

2.2血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶變化

與正常組相比，造模6周后模型組大鼠血清AST和ALT水平顯著升高(P<0.01，見表1)。

2.3肝組織病理學(xué)變化

HE染色結(jié)果顯示，正常組大鼠的肝細(xì)胞大小基本相同、界限明顯，圍繞中央靜脈和匯管區(qū)呈有序排列，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰(見圖1A)；與正常組相比，模型組大鼠肝細(xì)胞之間界限不清，細(xì)胞核固縮，肝小葉結(jié)構(gòu)較紊亂(見圖1B)。

表1銅負(fù)荷造模6周后兩組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平比較

Table 1Comparison of serum AST and ALT levels after copper overload for 6 weeks between the two groups

組別nALT(U/L)AST(U/L)正常組637.22±4.77120.53±16.79模型組670.31±11.17△201.92±21.60△

與正常組比較，△P<0.01

2.4肝組織細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如圖2所示，正常組大鼠肝組織僅可見少數(shù)、散在凋亡細(xì)胞(見圖2A)，細(xì)胞凋亡指數(shù)為10.38±3.49；模型組較正常組凋亡細(xì)胞增多(見圖2B)，細(xì)胞凋亡指數(shù)為65.84±7.15。與正常組相比，模型組大鼠細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著增高(P<0.01)。

A.正常組　　　　　　　　　　　　　　B.模型組圖1　銅負(fù)荷造模6周后兩組大鼠肝組織形態(tài)學(xué)變化 (HE染色，×400)Figure 1　Morphologic changes of rat liver tissues after copper overload for 6 weeks in the two groups (HE staining，×400)

A.正常組　　　　　　　　　　　　　　B.模型組圖2　銅負(fù)荷造模6周后兩組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡 (TUNEL，×400)Figure 2　Apoptosis of rat liver tissue cells after copper overload for six weeks in the two groups (TUNEL，×400)

2.51H-NMR代謝輪廓分析結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)兩組大鼠肝組織典型1H-NMR譜見圖3。由于樣品譜圖低場(chǎng)部分信號(hào)強(qiáng)度較低，我們將譜圖放大15倍顯示,并根據(jù)HMDB數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.hmdb.ca)和相關(guān)文獻(xiàn)[7，8]，對(duì)強(qiáng)度較高的譜峰進(jìn)行代謝物歸屬。

為了尋找正常組和模型組之間代謝物的差異，我們對(duì)譜圖進(jìn)行偏最小二乘法-判別分析(partial least squares-discriminate analysis,PLS-DA)，結(jié)果見圖4。PLS-DA得分圖(4A)中，每一個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)肝組織樣品，正常組和模型組分別處于圖4A不同的區(qū)域，可明顯區(qū)分，說明它們之間存在代謝差異。其中，正常組樣品較為分散，可能是自由飲食大鼠個(gè)體差異較大所致。為驗(yàn)證正常組和模型組之間是否存在顯著差異，我們對(duì)PLS-DA模型進(jìn)行200次的排列實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖4B，驗(yàn)證通過，模型有效。

ADP:二磷酸腺苷；Ino:肌苷；Ade:腺嘌呤核苷；Ads：腺苷；α-Glu：α-葡萄糖；β-Glu：β-葡萄糖；EA：乙醇胺；Tau：牛磺酸；Glu：谷氨酸；Ala：丙氨酸；NA：煙堿；Phe：苯丙氨酸；Tyr：酪氨酸；Fum：延胡索酸；AMP：?jiǎn)瘟姿嵯佘眨籄ll：尿素囊；Lac，乳酸；Cr：肌酸；GPC：甘油磷酸膽堿；PC：磷酸膽堿；Asn：天冬酰胺；Gln：谷氨酰胺；Ace：乙酸；Eth：乙醇；Val：纈氨酸;m-I:肌醇圖3　銅負(fù)荷造模6周后兩組大鼠肝組織樣品典型1H-NMR譜Figure 3　Typical 1H-NMR spectra of rat liver tissues in the two groups after copper overload for 6 weeks

A.PLS-DA得分圖(正常組，模型組)　　　　　　　　　B.PLS-DA模型驗(yàn)證(正常組-模型組)圖4　兩組大鼠肝組織樣品1H-NMR譜PLS-DA分析圖Figure 4　PLS-DA analysis result of 1H-NMR spectra of rat liver tissues in the two groups

根據(jù)模型變量的VIP值和t檢驗(yàn)結(jié)果，篩選出對(duì)組間區(qū)分貢獻(xiàn)較大的代謝物(見圖5)。銅負(fù)荷所致大鼠肝組織小分子變化包括尿素囊、牛磺酸、肌醇、賴氨酸、尼克酰胺、乙醇胺、乙酸、谷氨酸、酪氨酸、尿苷、甲硫氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、3-羥基丁酸、纈氨酸、乳酸、亮氨酸、苯丙氨酸、N-乙酰天冬氨酸、延胡索酸、腺苷/肌苷含量升高，肌酸、天冬酰胺、天冬氨酸、磷酸膽堿、甘露醇含量降低。

3　討論

銅是人類必需的微量元素，分布于人體各組織器官，參與造血、代謝、生長(zhǎng)發(fā)育等多種生理功能。正常情況下銅自腸道被吸收，大部分被肝細(xì)胞攝取。在肝細(xì)胞內(nèi)，β多肽銅轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶[9](ATPase Cu2+transporting beta polypeptide，ATP7B )將銅與前銅藍(lán)蛋白結(jié)合成銅藍(lán)蛋白并釋放入血，循環(huán)中90%的銅以銅藍(lán)蛋白形式存在；肝細(xì)胞含銅過多時(shí)，銅可在ATP7B蛋白作用下隨膽汁排出。WD患者因ATP7B基因突變，導(dǎo)致銅藍(lán)蛋白合成異常、膽汁排銅障礙，過量的銅沉積于肝臟，造成肝細(xì)胞凋亡、壞死等損傷，臨床可表現(xiàn)為急、慢性肝炎，肝纖維化等[2,10]。由于本病臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，目前尚無任何一種動(dòng)物模型可復(fù)制其全部臨床特征，但已證實(shí)，銅負(fù)荷飲食可在大鼠肝、腦、腎、骨等組織器官產(chǎn)生類似于WD的銅沉積，常用于WD銅損傷及藥物治療機(jī)制的研究[3,11,12]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠AST和ALT升高，肝組織發(fā)生病理學(xué)改變，肝細(xì)胞凋亡指數(shù)增高。模型組與正常組大鼠肝組織樣品在PLS-DA得分圖上可明顯區(qū)分，提示正常組和模型組之間存在代謝差異，且銅對(duì)模型組大鼠肝臟具有一定的損傷。

1.3-羥基丁酸；2.乳酸；3.賴氨酸；4.苯丙氨酸；5.N-乙酰天冬氨酸；6.纈氨酸；7.異亮氨酸；8.腺苷/肌苷；9.亮氨酸；10.磷酸膽堿；11.延胡索酸；12.天冬氨酸；13.尿素囊；14.肌酸；15.牛磺酸；16.肌醇；17.尼克酰胺；18.乙醇胺；19.天冬酰胺；20.乙酸；21.谷氨酸；22.酪氨酸；23.尿苷；24.甲硫氨酸；25.蘇氨酸；26.甘露醇圖5　銅負(fù)荷造模6周后兩組大鼠肝組織樣品相比較的差異代謝物Figure 5　Differences of metabolites of rat liver tissues between the two groups after copper overload for six weeks

前期研究證實(shí)，銅離子主要通過活性氧族介導(dǎo)的氧化應(yīng)激，引起線粒體膜通透性增加，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[2]。肝細(xì)胞受損后，胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶可大量釋放入血，造成血清轉(zhuǎn)氨酶如AST、ALT的升高。磷脂是線粒體膜、細(xì)胞膜等生物膜的重要組成部分，對(duì)于維持線粒體和細(xì)胞功能起著重要作用，乙醇胺、肌醇、磷酸膽堿參與磷脂代謝[13]，尼克酰胺是維生素PP的一種，可通過增加線粒體能量底物NAD+和 NADP+的合成，減少活性氧族的產(chǎn)生，穩(wěn)定線粒體膜結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)抗氧化和凋亡[14]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M大鼠以上代謝物含量皆發(fā)生改變，說明銅對(duì)肝細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)的損傷，可能涉及這些小分子代謝的異常。

肝臟在機(jī)體某些代謝中起著獨(dú)特的作用，是其他器官所不能取代的。比如，經(jīng)鳥氨酸循環(huán)將氨合成無毒的尿素排出體外，即是肝特有的功能。以肝損傷為主要表現(xiàn)的肝型WD患者，隨著肝臟受損程度的加重，鳥氨酸循環(huán)不能正常進(jìn)行，可出現(xiàn)血氨增高，肝性腦病的表現(xiàn)[2]。基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)現(xiàn)，銅損傷大鼠肝臟時(shí)，與三羧酸循環(huán)和鳥氨酸循環(huán)密切相關(guān)的基因、蛋白質(zhì)發(fā)生了一定改變[15]。這兩個(gè)循環(huán)通過延胡索酸和天冬氨酸相連，且此處的天冬氨酸由谷氨酸轉(zhuǎn)氨基作用生成。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫蟾谓M織這三種氨基酸含量改變，可能提示銅損傷肝臟時(shí)，鳥氨酸循環(huán)和三羧酸循環(huán)的連接環(huán)節(jié)發(fā)生了變化，或可為今后研究肝損傷與鳥氨酸循環(huán)和三羧酸循環(huán)的聯(lián)系提供一定的線索。

肝臟富含參與氨基酸代謝的酶類，氨基酸的分解、合成在肝內(nèi)十分活躍。苯丙氨酸和酪氨酸屬于芳香族氨基酸，在肝中代謝分解；纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸為支鏈氨基酸，由胰島素促進(jìn)其進(jìn)入骨骼肌分解，而胰島素由肝臟滅活。肝損傷時(shí)，不能正常代謝芳香族氨基酸、滅活胰島素，以上氨基酸代謝可發(fā)生異常。在同樣是金屬中毒的研究中發(fā)現(xiàn)，支鏈氨基酸的含量有所變化[16,17]，而芳香族氨基酸含量的改變常見于肝損傷[18,19]。本研究結(jié)果與之相符合，說明銅損傷肝臟與支鏈氨基酸和芳香族氨基酸的變化可能具有一定聯(lián)系。

此外，肌酸主要由甲硫氨酸提供甲基在肝臟合成，它是儲(chǔ)存能量的重要化合物，被認(rèn)為是評(píng)估肝損傷的一個(gè)重要指標(biāo)[20]；腺苷/肌苷、尿素囊、尿苷為核苷酸代謝的重要產(chǎn)物；銅可影響有氧氧化過程，使無氧代謝增加，糖酵解最終產(chǎn)物乳酸含量可因此升高。以上小分子含量均在模型組大鼠肝組織發(fā)生了變化，提示銅過量可導(dǎo)致肝組織能量、核苷酸和糖代謝發(fā)生一定的失調(diào)。

肝臟是機(jī)體最大的腺體、代謝最活躍的器官，它整合、調(diào)節(jié)機(jī)體各代謝途徑，在代謝過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。本實(shí)驗(yàn)以核磁共振代謝組學(xué)技術(shù)分析了銅負(fù)荷大鼠肝組織樣本，初步鑒定了銅對(duì)大鼠肝損傷的一些小分子代謝物，分析認(rèn)為這些小分子變化可能涉及鳥氨酸和三羧酸循環(huán)、磷脂、氨基酸、能量、核苷酸和糖代謝，可為今后研究銅對(duì)WD肝損傷的機(jī)制提供一些參考。

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Research on metabolomics of liver injury rats with Wilson’s disease due to copper overload

JIANG Huaizhou1, WANG Jian1, XU Jingjing2, DONG Jiyang2

(1TeachingandResearchOfficeofBasicTheoryofTraditionalChineseMedicine,SchoolofTraditionalChineseMedicine,AnhuiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Hefei230031,China;2FujianProvincialKeyLaboratoryofPlasmaandMagneticResonance,DepartmentofElectronicScience,XiamenUniversity)

ObjectiveTo explore the changes of small molecules in liver tissues of rats with copper overload and the influences of copper overload on metabolism of small molecules in liver tissues.MethodsSixteen Wistar rats were randomly divided into normal control group and model group. Copper overload method was used to establish the model rats.1H-NMR was used to acquire the metabolic profile of rat liver tissues, and PLS-DA was used to analyze the changes of metabolites in rat liver tissues after copper poisoning.ResultsCompared with normal control group, the contents of allantoin, taurine, myoinositol, lysine, nicotinamide, ethanolamine, acetate, glutamate, tyrosine, uridine, methionine, threonine, isoleucine, 3-hydroxybutyrate, valine, lactate, leucine, phenylalanine, N-acetylaspartate, fumarate, and adenosine/inosine were increased(P<0.05), while the contents of creatine, asparagine, aspartate, phosphorylcholine and mannitol were decreased in model group(P<0.05).ConclusionCopper damage in rat liver tissues may be involved in the metabolism of ornithine and Krebs cycles, lecithin, amino acid, energy, nucleotides and glucose.

Wilson’s disease;hepatolenticular degeneration;metabonomics;copper overload;1H-NMR;liver damage

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(81202691)；安徽省高校自然科學(xué)基金重點(diǎn)基金資助項(xiàng)目(KJ2012Z228)；安徽中醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2011ZR008B)；安徽省高校博士后崗位項(xiàng)目基金資助項(xiàng)目;安徽省高校優(yōu)秀青年骨干教師國(guó)外訪問研修重點(diǎn)項(xiàng)目(gxfxZD2016121)

蔣懷周，女，1978-01生，博士，講師，E-mail：jhzlindq@hotmail.com

2015-11-22

R596

A

1007-6611(2016)03-0199-06

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.03.002