miR-139對骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響

李志全， 馬　龍， 董　暉， 黎　璞， 吳堯平*

(1第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科，西安　710032； 2解放軍第513醫(yī)院心內(nèi)科； 3解放軍第474醫(yī)院骨科； 4第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院麻醉科； *通訊作者，E-mail：fmmuxj_wuyp@sina.com)

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miR-139對骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響

李志全1， 馬龍2， 董暉3， 黎璞4， 吳堯平1*

(1第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科，西安710032；2解放軍第513醫(yī)院心內(nèi)科；3解放軍第474醫(yī)院骨科；4第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院麻醉科；*通訊作者，E-mail：fmmuxj_wuyp@sina.com)

目的闡明miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 方法采用qRT-PCR檢測miR-139在永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19及骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607、MG-63中的表達(dá)情況；采用5-氮雜-2′-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)和曲古抑菌素A(TSA)處理骨肉瘤細(xì)胞，通過qRT-PCR檢測miR-139的表達(dá)變化；將miR-139模擬物轉(zhuǎn)染入骨肉瘤細(xì)胞中，通過MTT實驗檢測細(xì)胞增殖能力的變化，通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡的變化，通過Western blot檢測Cyclin D1表達(dá)和Caspase-3活化的變化。 結(jié)果與永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19相比，miR-139在SOSP-9607和MG-63骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)；5-Aza-CdR對SOSP-9607和MG-63骨肉瘤細(xì)胞中miR-139的表達(dá)沒有影響，而TSA能夠促進(jìn)miR-139的表達(dá)(P<0.01)；miR-139模擬物能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力，誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡，并抑制Cyclin D1的表達(dá)、促進(jìn)Caspase-3的激活(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中低表達(dá)，而過表達(dá)miR-139能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡。

骨肉瘤；miR-139；增殖；凋亡

骨肉瘤(osteosarcoma)是最常見的惡性骨腫瘤，起源于間質(zhì)細(xì)胞，好發(fā)于兒童及青少年，腫瘤早期即可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。20世紀(jì)70年代以前，骨肉瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療方案是截肢術(shù)，患者5年生存率不足20%。隨著化療方案和技術(shù)的不斷進(jìn)步，化療聯(lián)合保肢手術(shù)已成為骨肉瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，非轉(zhuǎn)移性骨肉瘤患者的5年生存率已提高至65%-70%。但是，對于惡性程度較高或者已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者，近幾十年來其生存率并沒有顯著提高，中位生存期僅為23個月，其主要原因是骨肉瘤細(xì)胞容易對化療藥物產(chǎn)生多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)，從而導(dǎo)致化療效果不明顯[1]。

微小RNA(microRNA，miRNA)是由18-25個堿基組成的非編碼小分子RNA，能夠通過種子序列(seed sequence)識別靶基因mRNA的3′端非翻譯區(qū)(3′-untranslated region，3′-UTR)，與之發(fā)生完全或不完全的堿基配對結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致靶基因mRNA的降解或抑制其翻譯，因此，miRNA能夠從轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。迄今為止，通過生物信息學(xué)及實驗研究已在人體組織細(xì)胞中鑒定出了1 000多個miRNA分子，每個miRNA分子能夠調(diào)控多個基因的表達(dá)，而每個基因也可能受到多個miRNA分子的調(diào)控。目前的研究表明，大約50%的人類基因表達(dá)受到miRNA的調(diào)控。miRNA的堿基序列在種間具有高度保守性，其在細(xì)胞分化、代謝、增殖和凋亡等生命活動過程中扮演重要角色，廣泛參與了多種生理及病理過程[2]。

高杰等[3]最先研究了骨肉瘤的miRNA表達(dá)譜，從SOSP-9607骨肉瘤細(xì)胞中鑒定得到了182個miRNA分子。迄今已有大量研究證實，骨肉瘤組織細(xì)胞中存在多種miRNA分子的異常表達(dá)，其與骨肉瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲及耐藥性等多種惡性表型相關(guān)[4]。miR-139是近幾年新發(fā)現(xiàn)的一種具有抑癌作用的miRNA分子，其在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)降低，而過表達(dá)miR-139能夠抑制腫瘤細(xì)胞的惡性表型，但目前有關(guān)miR-139與骨肉瘤的相關(guān)性尚未見報道[5]。因此，本研究將檢測miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況，觀察其對骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響，初步探索miR-139在骨肉瘤形成及發(fā)展過程中的作用，為骨肉瘤的臨床診斷及治療提供實驗參考。

1　材料和方法

1.1主要儀器

CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo Fisher Scientific，美國)；NanoDrop ND-000分光光度計(NanoDrop Tech，美國)；ABI7500 Fast實時定量PCR儀(Applied Biosystems，美國)；蛋白電泳儀、iMark酶標(biāo)儀(Bio-Rad，美國)；FACSCalibur 流式細(xì)胞儀(BD Biosciences，美國)；FluorChem FC2凝膠成像系統(tǒng)(Alpha Innotech，美國)。

1.2主要試劑

RPMI1640培養(yǎng)基(Gibco，美國)；胎牛血清(HyClone，美國)；青-鏈霉素溶液(100×)、胰酶細(xì)胞消化液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)；總RNA提取試劑盒miRNeasy Mini Kit、miRNA反轉(zhuǎn)錄與實時定量PCR試劑盒miScript PCR Starter Kit(Qiagen，德國)；組蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)抑制劑曲古抑菌素A(trichostatin A，TSA)、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2′-脫氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine，5-Aza-CdR)、二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)(Sigma，美國)；MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒、Annexin Ⅴ-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)；siRNA-Mate轉(zhuǎn)染試劑(上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司)；抗Cyclin D1、活化Caspase-3及β-actin抗體(Abcam，英國)；BCA蛋白定量試劑盒、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(Pierce，美國)。

1.3細(xì)胞培養(yǎng)

永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19、骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607及MG-63由本室保存。細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，加入適量含10%胎牛血清、1%青-鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，常規(guī)胰酶消化傳代。

1.4實時定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)

采用miRNeasy Mini Kit提取細(xì)胞總RNA，定量后采用miScript PCR Starter Kit進(jìn)行qRT-PCR，以U6為內(nèi)參。miR-139的上游引物序列為：5′-TCT ACA GTG CAC GTG TCT-3′，下游引物為試劑盒中的通用引物。U6的上游引物序列為：5′-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3′，下游引物序列為：5′-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3′。引物由上海生工生物有限公司合成。

1.5細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗

miR-139模擬物(mimics)及陰性對照(negative control)由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成。細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟參考siRNA-Mate說明書，簡要步驟如下：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞至6孔板，待第2天細(xì)胞生長至約30%匯合度時進(jìn)行轉(zhuǎn)染。采用無血清RPMI1640培養(yǎng)基分別稀釋siRNA-Mate和miRNA(二者比例為1 μl siRNA-Mate對應(yīng)10 pmol miRNA)，靜置5 min后將二者混勻，室溫孵育20 min后加入培養(yǎng)孔中，miRNA終濃度為40 nmol/L。

1.6MTT實驗檢測細(xì)胞增殖能力

胰酶消化、離心收集骨肉瘤細(xì)胞，血球計數(shù)板計數(shù)后調(diào)整細(xì)胞密度至2×104/ml。隨后將細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μl(即2×103/孔)。待細(xì)胞貼壁后(接種后12 h)開始計時，分別于0，1，2，3，4，5 d向每孔中加入10 μl MTT溶液(5 mg/ml)，繼續(xù)孵育4 h，每孔中再加入100 μl Formanzan溶解液并繼續(xù)孵育，直至普通光學(xué)顯微鏡下顯示Formanzan結(jié)晶全部溶解為止(約4 h)，于570 nm波長處測定OD值。1.7流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞凋亡

分別收集處理后的SOSP-9607及MG-63骨肉瘤細(xì)胞(包括培養(yǎng)液中的細(xì)胞)，PBS重懸細(xì)胞并計數(shù)。取1×105個重懸細(xì)胞，1 000×g離心5 min后棄上清，加入195 μl Annexin Ⅴ-FITC結(jié)合液輕輕重懸細(xì)胞，然后加入5 μl Annexin Ⅴ-FITC，輕輕混勻，再加入10 μl碘化丙啶(PI)染色液，輕輕混勻。室溫避光孵育20 min，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡狀況。

1.8Western blot實驗檢測蛋白表達(dá)

收集處理后的SOSP-9607及MG-63骨肉瘤細(xì)胞，提取總蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒定量。制備蛋白電泳樣品，SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)膜。5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，加入TBST稀釋的抗Cyclin D1、活化Caspase-3或β-actin抗體，4 ℃孵育過夜。次日洗滌一抗后加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育2 h，洗滌后采用ECL試劑盒進(jìn)行化學(xué)發(fā)光，利用FluorChem FC2系統(tǒng)成像并進(jìn)行灰度分析。

1.9統(tǒng)計學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)變化

miR-139在多種腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)降低，但在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)變化未見研究報道。為此，首先采用qRT-PCR檢測了miR-139在永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19及骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607、MG-63中的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19相比，miR-139在SOSP-9607和MG-63骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著降低，分別為hFOB 1.19細(xì)胞的42%±11%(P<0.01)和18%±4%(P<0.001，見圖1)。

2.2miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中表達(dá)變化的調(diào)控機制

上述qRT-PCR結(jié)果表明,miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯下降，為進(jìn)一步揭示miR-139表達(dá)降低的原因，采用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR和組蛋白去乙酰化酶抑制劑TSA處理骨肉瘤細(xì)胞，通過qRT-PCR檢測miR-139的表達(dá)變化。以DMSO為對照，分別用5 μmol/L的5-Aza-CdR和200nmol/L的TSA處理hFOB 1.19、SOSP-9607、MG-63細(xì)胞72 h，提取總RNA后進(jìn)行qRT-PCR。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：5-Aza-CdR和TSA對hFOB 1.19細(xì)胞中miR-139的表達(dá)沒有顯著影響(P>0.05)，5-Aza-CdR對SOSP-9607和MG-63細(xì)胞中miR-139的表達(dá)也沒有顯著影響(P>0.05)，但TSA能夠顯著促進(jìn)SOSP-9607和MG-63細(xì)胞中miR-139的表達(dá)(P<0.01或P<0.001，見圖2)。

與hFOB 1.19細(xì)胞比較，*P<0.01，**P<0.001圖1　qRT-PCR檢測miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)Figure 1　Expression of miR-139 in osteosarcoma cells detected by qRT-PCR

與DMSO對照組比較，*P<0.01，**P<0.001圖2　5-Aza-CdR和TSA 對骨肉瘤細(xì)胞中miR-139表達(dá)的影響Figure 2　The effect of 5-Aza-CdR and TSA on miR-139 expression in osteosarcoma cells

2.3轉(zhuǎn)染miR-139模擬物對骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響

miR-139是一種具有抑癌作用的miRNA分子[5]。為證實miR-139是否能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖，我們合成了miR-139模擬物(mimics)，將其轉(zhuǎn)染入骨肉瘤細(xì)胞中，通過MTT實驗檢測細(xì)胞增殖能力的變化。與轉(zhuǎn)染陰性對照(negative control)相比，轉(zhuǎn)染miR-139模擬物能夠顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞SOSP-9607的增殖能力(P<0.05，見圖3A)，第3,4,5天的抑制率分別為28.9%±13.2%,32.7%±9.1%,29.3%±12.1%。轉(zhuǎn)染miR-139模擬物同樣顯著抑制了MG-63細(xì)胞的增殖能力(P<0.01，見圖3B)，第3，4，5天的抑制率分別為41.7%±8.3%，37.3%±8.5%，39.1%±6.3%。

與陰性對照比較，*P<0.05　　　　　　　　　　與陰性對照比較，**P<0.01　　　　　　　　　A.SOSP-9607細(xì)胞　　　　　　　　　　　　　　B.MG-63細(xì)胞圖3　miR-139對骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響Figure 3　The effect of miR-139 on osteosarcoma cell proliferation

2.4轉(zhuǎn)染miR-139模擬物對骨肉瘤細(xì)胞凋亡的影響

為分析miR-139是否能夠誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡，將miR-139模擬物轉(zhuǎn)染入骨肉瘤細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染后72 h收集細(xì)胞，經(jīng)Annexin Ⅴ-FITC/PI染色后，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與陰性對照轉(zhuǎn)染組比較，轉(zhuǎn)染miR-139模擬物能夠誘導(dǎo)SOSP-9607和MG-63細(xì)胞的凋亡，二者凋亡率分別為8.66%±3.12%和13.3%±2.77%(見圖4)，與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.001，見圖5)。

圖4　SOSP-9607和MG-63細(xì)胞的 FCM檢測結(jié)果Figure 4　The FCM results of SOSP-9607 and MG-63 cell apoptosis

與陰性對照組比較，*P<0.01，**P<0.001圖5　FCM檢測結(jié)果的統(tǒng)計分析Figure 5　The statistical analysis of FCM results

2.5轉(zhuǎn)染miR-139模擬物對骨肉瘤細(xì)胞Cyclin D1表達(dá)和Caspase-3活化的影響

前述結(jié)果表明miR-139能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡。為進(jìn)一步分析miR-139生物學(xué)作用的分子機制，采用Western blot檢測了miR-139對骨肉瘤細(xì)胞中細(xì)胞周期素Cyclin D1表達(dá)和Caspase-3活化的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染后72 h，與陰性對照轉(zhuǎn)染組相比，miR-139模擬物導(dǎo)致SOSP-9607和MG-63細(xì)胞中Cyclin D1的表達(dá)下降，而活化Caspase-3的表達(dá)升高(見圖6)。

1.SOSP-9607細(xì)胞陰性對照組；2.SOSP-9607細(xì)胞實驗組；3.MG-63細(xì)胞陰性對照組；4.MG-63細(xì)胞實驗組圖6　miR-139對骨肉瘤細(xì)胞Cyclin D1和活化Caspase-3表達(dá)的影響Figure 6　The effect of miR-139 on Cyclin D1 and active Caspase-3 expression in osteosarcoma cells

3　討論

miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)，既可扮演癌基因的角色，也可扮演抑癌基因的角色，其在腫瘤組織細(xì)胞中的表達(dá)變化特征對于腫瘤診斷、治療及預(yù)后評估具有重要的參考價值[2]。miR-139是近年新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌miRNA分子，基因定位于染色體11q13.4。miR-139在肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、食管鱗癌、非小細(xì)胞肺癌、膠質(zhì)瘤等多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)降低，同時證實過表達(dá)miR-139能夠抑制這些腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲等惡性生物學(xué)表型[5]。盡管已有許多研究證實miR-139作為抑癌基因參與了多種腫瘤的病理進(jìn)程，但迄今尚無miR-139與骨肉瘤相關(guān)性的研究報道。因此，本研究以永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19、骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607及MG-63為研究對象，首先采用qRT-PCR分析了這三種細(xì)胞中miR-139的表達(dá)狀況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19相比較，miR-139在SOSP-9607和MG-63骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯下降，這提示miR-139可能參與了骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展。

miRNA的編碼序列多位于蛋白質(zhì)編碼基因的內(nèi)含子區(qū)，因而常與其宿主基因共表達(dá)，但有研究表明miR-139具有獨立的啟動子，不僅與其宿主基因PDE2A的表達(dá)缺乏相關(guān)性，而且具有與宿主基因相反的生物學(xué)功能[6,7]。miRNA基因的表觀遺傳學(xué)修飾與其表達(dá)狀況緊密相關(guān)，而DNA的甲基化修飾和組蛋白的乙酰化修飾是最常見的兩種表觀遺傳學(xué)修飾方式，前者抑制基因表達(dá)而后者促進(jìn)基因表達(dá)[8]。為揭示骨肉瘤細(xì)胞中miR-139表達(dá)降低與表觀遺傳學(xué)修飾的相關(guān)性，本研究采用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR和組蛋白去乙酰化酶抑制劑TSA分別處理永生化成骨細(xì)胞系hFOB 1.19、骨肉瘤細(xì)胞系SOSP-9607及MG-63，通過qRT-PCR檢測miR-139的表達(dá)變化，結(jié)果證實骨肉瘤細(xì)胞中miR-139的低表達(dá)與DNA的甲基化修飾無關(guān)，但與組蛋白的去乙酰化修飾相關(guān)。在胃癌、結(jié)腸癌等其他腫瘤細(xì)胞中的研究同樣證實miR-139的表達(dá)水平與組蛋白的去乙酰化修飾密切相關(guān)[6,7]。

作為抑癌miRNA分子，許多研究結(jié)果表明過表達(dá)外源性miR-139能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖能力，并可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡[5]。本研究初步探索了miR-139對骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡的作用，與其他腫瘤中的研究結(jié)果類似，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的miR-139模擬物能夠顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞SOSP-9607、MG-63的增殖，并能夠誘導(dǎo)其凋亡。細(xì)胞周期素Cyclin D1是調(diào)控細(xì)胞周期G1期的關(guān)鍵蛋白，對細(xì)胞周期調(diào)控至關(guān)重要。大量研究表明，Cyclin D1在多種腫瘤組織細(xì)胞中存在過表達(dá)，可作為癌基因促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[9]。不同刺激因素導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡過程主要由三條通路執(zhí)行，包括線粒體通路或內(nèi)源性通路、死亡受體通路或外源性通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路，其中Caspase-3是所有通路共同的關(guān)鍵執(zhí)行蛋白[10]。因此，為揭示miR-139抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的機制，本研究采用Western blot分析了miR-139對骨肉瘤細(xì)胞中Cyclin D1表達(dá)和Caspase-3活化的影響，結(jié)果證實miR-139能夠抑制Cyclin D1表達(dá)，并誘導(dǎo)Procaspase-3剪切以形成活化型Caspase-3。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)miR-139在骨肉瘤細(xì)胞中呈低表達(dá)狀態(tài)，這種低表達(dá)與DNA的甲基化修飾無關(guān)，而是由組蛋白的去乙酰化導(dǎo)致的。過表達(dá)外源性miR-139能夠通過下調(diào)Cyclin D1的表達(dá)而抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖，同時能夠通過激活Caspase-3而誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡。

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Effects of miR-139 on osteosarcoma cell proliferation and apoptosis

LI Zhiquan1, MA Long2, DONG Hui3, LI Pu4, WU Yaoping1*

(1DepartmentofOrthopedics,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi’an710032,China;2DepartmentofCardiology, 513thHospitalofChinesePLA;3DepartmentofOrthopedics, 474thHospitalofChinesePLA;4DepartmentofAnesthesiology,TangduHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:fmmuxj_wuyp@sina.com)

ObjectiveTo clarify the expression level of miR-139 in human osteosarcoma cells and its effects on osteosarcoma cell proliferation and apoptosis.MethodsThe expression of miR-139 was detected by qRT-PCR in immortalized osteoblast cell line hFOB 1.19 and osteosarcoma cell lines SOSP-9607 and MG-63. Osteosarcoma cells were treated with 5-Aza-2′-deoxycytidine (5-Aza-CdR) and trichostatin A(TSA), and then miR-139 expression was detected by qRT-PCR. After miR-139 mimics was transfected into osteosarcoma cells, the cell proliferation ability, cell apoptosis rate, Cyclin D1 and active Caspase-3 expression were detected by MTT assay, flow cytometry and Western blot, respectively.ResultsCompared with hFOB 1.19 cells, miR-139 expression was significantly reduced in SOSP-9607 and MG-63 osteosarcoma cells(P<0.01). The expression of miR-139 was not affected by 5-Aza-CdR in SOSP-9607 and MG-63 osteosarcoma cells, while TSA promoted the expression of miR-139 in these cells(P<0.01). The miR-139 mimics was capable of inhibiting the proliferation, inducing cell apoptosis, suppressing Cyclin D1 expression, and promoting the activation of Caspase-3 in SOSP-9607 and MG-63 osteosarcoma cells(P<0.05 orP<0.01).ConclusionThe expression of miR-139 is downregulated in human osteosarcoma cells and its overexpression can inhibit osteosarcoma cell proliferation and induce apoptosis.

osteosarcoma;miR-139;proliferation;apoptosis

陜西省自然科學(xué)基礎(chǔ)研究計劃資助項目(2014JM4120)

李志全，男，1976-06生，博士，主治醫(yī)師，E-mail：fmmuxj_wuyp@sina.com

2015-12-21

R738

A

1007-6611(2016)03-0232-06

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.03.009