超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜檢測生鮮肉中四環素類抗生素殘留

趙 飛，高廣慧

(遼寧省食品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110015)

分析與測試

超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜檢測生鮮肉中四環素類抗生素殘留

趙 飛，高廣慧

(遼寧省食品檢驗檢測院，遼寧 沈陽 110015)

建立了超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜(UPLC-MS/MS)檢測生鮮肉中四環素類抗生素殘留的分析方法。方法采用C18色譜柱(50 mm×2.1 mm，1.7μm)分離，柱溫30 ℃，樣品室溫度10 ℃。流動相由A相(乙腈)和B相(0.1%甲酸溶液)組成，流速為0.4 mL/min，采用梯度洗脫。在ESI正離子模式下，采用多反應離子監測模式進行測定，可以在5 min內完成檢測。四種四環素類抗生素土霉素、金霉素、四環素和強力霉素均在10～200 μg/mL范圍內有良好的線性關系，相關系數大于0.995。樣品最低檢出限為50 μg/kg，回收率在80%～89%之間，相對標準偏差為2.5%～6.3%。該方法準確度高，靈敏度好，適用于生鮮肉中四環素類抗生素的檢測。

超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜；四環素類抗生素；生鮮肉

四環素類抗生素是一類廣譜抗生素，主要包括金霉素、土霉素、四環素及強力霉素等。四環素類抗生素可以選擇性地與細菌核糖體30S亞基結合，阻止氨基酰-tRNA在其上的聯結，而起到抑制肽鏈的增長及細菌蛋白質的合成。四環素類抗生素被廣泛用于養殖業中多種細菌及衣原體、支原體等所致感染的治療中。但若超量使用，會造成藥物殘留，人類食用后可能產生消化道反應、肝損害、腎損害等不良反應，因此國際及我國均對該類抗生素殘留量有嚴格的限制。本文采用UPLC-MS/MS檢測生鮮肉中四環素類抗生素殘留，通過優化生鮮肉樣品的前處理方法、色譜條件和質譜條件，建立了UPLC-MS/MS檢測生鮮肉中四環素類抗生素殘留的檢測方法，本方法可為生鮮肉中四環素類抗生素殘留的定性定量分析提供高效高靈敏度的檢測方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

WATERS TQD超高效液相色譜-串聯四級桿質譜聯用儀(美國沃特世公司)； 渦旋混合器(德國IKA)；氮吹濃縮儀(上海屹堯儀器科技發展有限公司)；均質器(IKA)。標準品：土霉素、金霉素、四環素和強力霉素標準物質：純度不小于95%。

甲醇(色譜純，美國FISHER公司)，乙腈(色譜純，美國FISHER公司)，正己烷(色譜純，美國FISHER公司)，高氯酸(分析純，上海信裕生物科技有限公司)，實驗用水為一級水。

1.2 標準溶液的配制

分別精密稱取適量土霉素、金霉素、四環素和強力霉素標準物質，以甲醇為溶劑配制質量濃度為1.0 mg/mL的標準溶液，置于棕色容器中，于-18℃冰箱中保存。

1.3 樣品前處理

1.3.1 樣品準備

采用四分法將待測樣品進行切割，并加以粉碎并混合均勻。

1.3.2 提取

準確稱取混合均勻的樣品5.0 g(精確至0.01 g)于50 mL帶有螺旋蓋的離心管中，精密加入25 mL甲醇，用均質器均質1 min，5000 r/min離心15 min，將上清液轉移至另一離心管中，加入25 mL正己烷，渦旋1 min，待靜置分層。

1.3.3 濃縮

精密移取下層20 mL于另一離心管中，45℃下氮氣流吹至近干。

1.3.4 凈化和復溶

向離心管中精密加入1 mL 5 %高氯酸溶液，渦旋1 min，10000 r/min離心10 min，上清液待測。

1.4 UPLC色譜條件

Waters超高效液相色譜柱：ACQUITY UPLC BEH 1.7 μ m 2.1×50 mm；流動相：乙腈(A)，0.1 %甲酸水溶液(B)，梯度洗脫程序見表1；柱溫：30 ℃；樣品室溫度：10 ℃；進樣體積：5 μL；流速：0.4 mL/min。

表1 梯度洗脫程序

1.5 MS/MS質譜條件

離子化方式：電噴霧離子化；掃描方式：負離子模式；監測方式：多反應離子監測；毛細管電壓：2.5 kV；離子源溫度：150 ℃；脫溶劑氣溫度：500 ℃；脫溶劑氣流量：800 L/h；錐孔反吹氣流量：50 L/h；質量條件參數見表2。

表2 MRM分析的質譜參數

2 結果與討論

2.1 標準曲線

0.2 mg/mL的四中四環素類抗生素標準溶液的色譜圖如圖1所示。

圖1 四環素類抗生素的MRM色譜圖

在設定的條件下，將系列標準混合溶液依次進樣檢測，得到四種四環素類抗生素的標準曲線如圖2所示。

圖2 標準曲線

金霉素、土霉素、四環素和強力霉素在10-200μg/mL范圍內均成良好線性關系，相關系數均大于0.998。

2.2 方法的檢出限

以產生3倍信噪比時的樣品中四種四環素類抗生素的濃度為樣品檢出限，得到本方法的樣品檢出限為50μg/kg。

2.3 方法的精密度和準確度試驗

稱取空白樣品18份，分別加入一定濃度的標準溶液，按樣品前處理方法進行處理，并依次進樣測試，分別計算回收率和精密度，得出回收率在80%～95%之間，RSD小于5.0%，測定結果見表3。

表3 方法的精密度和準確度試驗(n=6)

3 小結

本文采用超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜法檢測生鮮肉中四種四環素類抗生素殘留具有以下優勢：超高效液相色譜具有高效高靈敏度的特點，完成一次檢測僅需5 min；該法樣品的前處理操作簡便快速，適用于大批量樣品的檢測；串聯四級桿檢測具有選擇性更好，抗干擾能力強。綜上，本文研究的超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜法檢測生鮮肉中四環素類抗生素殘留方法具有準確、快速、高靈敏優勢。

[1] 楊 旭, 劉美嬌, 林 深,等. 限進材料固相萃取-高效液相色譜在線聯用檢測牛奶中四環素類抗生素殘留[J].分析化學, 2016,44(1)：155-160.

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(本文文獻格式：趙 飛，高廣慧.超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜檢測生鮮肉中四環素類抗生素殘留[J].山東化工，2016，45(14)：48-50.)

Determination of Antibiotics Residues in Fresh Meat by Ultra Performance Liquid Chromagraphy-tandem Mass Spectrometry

ZhaoFei,GaoGuanghui

(Liaoning Tnstitute for Food Inspection and Testing,Shengyang 110015,China)

An ultra performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry( UPLC-ESI-MS/MS) method for the determination of Antibiotics Residues in fresh meat was developed. Methods C18 chromatographic column (50mm × 2.1mm, 1.7 μ m), the solvent system was composed of mobile phase A (Acetonitrile), and mobile phase B (water with 0.1% methanoic acid ). The flow rate was 0.4 mL/min and gradient elution, and the temperature is held constant at 30℃ within a thermostated column. Multiple reaction monitoring (MRM)in ESI positive mode was used for quantitation. The Antibiotics Residues was successfully detected within 5 min. Antibiotics Residues have good linear relationship in the range of 0.5 μg /L -8 μg /L with the correlation coefficient larger than 0.995. The detection limit was 50 μg /kg, and the recovery is between 80%- 89% with the relative standard deviation between 2.5%～6.3%. An accurate and sensitivity method was developed in this study. The established method has been successfully applied to the determination of antibiotics residues in fresh meat.

UPLC -MS/MS; antibiotics residues; fresh meat

2016-05-05

趙 飛(1986—)，遼寧撫順人，碩士，工程師，主要從事食品、保健食品和藥品的理化項目檢測方法研究與開發。

O657.72;TS252.7

A

1008-021X(2016)14-0048-03