玉米、小麥、大豆根系水溶性分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌的影響

馬志偉，陳慧，蒙美蓮，曲延軍，胡俊

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010019）

玉米、小麥、大豆根系水溶性分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌的影響

馬志偉，陳慧，蒙美蓮，曲延軍，胡俊*

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010019）

以玉米、小麥和大豆3種作物為試驗(yàn)材料，利用水培法收集3種作物根系分泌物測(cè)定其對(duì)馬鈴薯枯萎病菌生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，玉米、小麥和大豆的根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)和孢子產(chǎn)量均具有一定的抑制作用，尤其是玉米根系分泌物的抑制作用最為顯著，小麥根系分泌物次之，而大豆根系分泌物的抑制效果較差。

根系分泌物；馬鈴薯枯萎病菌；抑制作用

近年來(lái)隨著馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，馬鈴薯種植面積不斷擴(kuò)大，難以輪作倒茬，連作障礙是制約馬鈴薯生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展的重要因素。連作導(dǎo)致土壤環(huán)境惡化，病蟲(chóng)害發(fā)生加重，產(chǎn)量降低及品質(zhì)下降等一系列問(wèn)題。鐮刀菌（Fusarium oxysporum）引起的馬鈴薯枯萎病是一種危害嚴(yán)重的土傳病害，該病在內(nèi)蒙古馬鈴薯種植區(qū)逐年加重，但目前缺乏有效的防治措施。據(jù)Martyn和Hartz［1］以及Yoshihisa Homma和夏正俊［2］的研究報(bào)道，利用太陽(yáng)能曬田，對(duì)減輕枯萎病的發(fā)生有較好的效果。但由于內(nèi)蒙古馬鈴薯種植區(qū)土地面積有限，很難大面積翻耕土壤充分利用太陽(yáng)能曬田。據(jù)王曉麗等［3］的研究，尿素做基肥可以減輕馬鈴薯枯萎病的發(fā)生，且優(yōu)于碳酸氫鹽類和馬鈴薯專用肥做基肥的效果，同時(shí)尿素處理的地塊馬鈴薯產(chǎn)量最高；起壟覆膜對(duì)馬鈴薯枯萎病也有一定的減輕作用。另外加強(qiáng)田間管理，輪作倒茬，及時(shí)清除病株，促進(jìn)植株健壯生長(zhǎng)，增強(qiáng)植株抗病力，選育抗病品種等措施也可對(duì)馬鈴薯枯萎病起到一定防效［4］。其中與非寄主作物合理輪作是防控此類土傳病害的重要手段。

植物根系分泌物是指植物根系釋放到周圍環(huán)境中的各種物質(zhì)，其種類多，含量差異大，既有糖、蛋白質(zhì)和氨基酸等初生代謝產(chǎn)物，又有有機(jī)酸、酚類等次生代謝產(chǎn)物。許多研究表明，根系分泌物與根際微生物之間有著密切的關(guān)系，根系分泌物不僅為根際微生物提供所需能源，而且也直接影響著根際微生物的種群結(jié)構(gòu)、代謝和生長(zhǎng)發(fā)育，有時(shí)起促進(jìn)作用，有時(shí)也會(huì)起抑制作用［5，6］。

目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)植物根系分泌物與馬鈴薯枯萎病菌關(guān)系的研究報(bào)道甚少。輪作倒茬是有效、環(huán)保、經(jīng)濟(jì)地防治馬鈴薯枯萎病的措施，為選出適合與馬鈴薯輪作倒茬的非寄主作物，本試驗(yàn)通過(guò)室內(nèi)抑菌試驗(yàn)，研究了玉米、小麥和大豆3種不同作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌（F.oxysporum）的影響，揭示根系分泌物與病原微生物之間的關(guān)系，對(duì)生產(chǎn)進(jìn)行合理的輪作調(diào)控提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試作物：玉米（‘平育11’）、小紅麥、東北大豆。

供試病原菌：尖孢鐮刀菌（F.oxysporum）由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離獲得。

供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）和Bilay培養(yǎng)基。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1供試作物幼苗培養(yǎng)

挑選大小一致的種子用1‰高錳酸鉀溶液處理20 min后用水沖洗2～3遍，置于光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行催芽，將芽長(zhǎng)相近的種子播種在盛有無(wú)菌土的營(yíng)養(yǎng)缽中室內(nèi)培養(yǎng)，每缽內(nèi)播5粒種子，每個(gè)品種培養(yǎng)10缽，共50株。

1.2.2作物根系分泌物的收集

根系分泌物收集采用自制的水培系統(tǒng)，由塑料瓶、硬紙殼板構(gòu)成。挖取生長(zhǎng)30 d左右健康均一的植株幼苗，盡量不傷根，以蒸餾水洗根后移栽到培養(yǎng)系統(tǒng)中，用硬紙殼板固定。每瓶20株，共5瓶，向瓶中加入適量無(wú)菌水使根系沒(méi)入水中，對(duì)根系進(jìn)行遮光培養(yǎng)，振蕩培養(yǎng)24 h經(jīng)3層濾紙過(guò)濾后，用蒸餾水將根系分泌液調(diào)節(jié)至鮮根重為10 mL/g，再用0.22 μm濾膜過(guò)濾后密封，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)的影響

壞死性小腸結(jié)腸炎常見(jiàn)于早產(chǎn)兒，NEC的表現(xiàn)多種多樣。疾病早期，患兒可表現(xiàn)嘔吐、腹脹、腸鳴音減弱等等。如果疾病嚴(yán)重，還會(huì)表現(xiàn)為腹壁紅腫、腹腔積液、腹脹加重以及氣腹等等。部分病患也可能出現(xiàn)反應(yīng)查、貪睡、休克、體溫不穩(wěn)、彌漫性血管內(nèi)凝血等表現(xiàn)。單純依靠觀察臨床癥狀，并不會(huì)對(duì)NEC做出明確診斷。就腹部X線表現(xiàn)來(lái)看，則通常為腸壁囊樣積氣、腸梗阻以及門靜脈積氣等等。

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定。將含不同作物根系分泌物液等體積與已融化稍冷卻的PDA培養(yǎng)基充分搖勻并迅速倒入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，以含等體積的無(wú)菌水培養(yǎng)基作為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)4次。在平板中央接入直徑為6 mm的菌餅，置于25℃黑暗條件下培養(yǎng)，生長(zhǎng)第3 d開(kāi)始測(cè)量菌落直徑，每天測(cè)量1次，并計(jì)算抑制率。待對(duì)照菌落生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿邊緣時(shí)，停止測(cè)量。

抑制率（％）=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100

1.2.4作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌孢子萌發(fā)的影響

挑取適量培養(yǎng)好的菌片放入小燒杯中，加入少量無(wú)菌水，攪拌，將菌懸液用3層無(wú)菌紗布過(guò)濾，搖勻后鏡檢，調(diào)整孢子濃度，使每個(gè)視野（40×10倍）約含20個(gè)孢子。

利用凹玻片孢子萌發(fā)法測(cè)定。在培養(yǎng)皿中放置2層濾紙，上面擺放回形玻璃棒，將凹玻片架在玻璃棒上，121℃高壓滅菌后，無(wú)菌操作下向該培養(yǎng)皿中加入適量無(wú)菌水，將等量的孢子懸液與根系分泌液混勻，吸取混合液50 μL于凹玻片上，25℃黑暗培養(yǎng)12 h在（40×10）倍下鏡檢病原菌孢子萌發(fā)情況，重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)檢查10個(gè)視野，最后計(jì)算出平均孢子萌發(fā)抑制率，以無(wú)菌水培養(yǎng)作為對(duì)照，以孢子芽管的長(zhǎng)度超過(guò)孢子直徑的一半為已萌發(fā)孢子。

孢子萌發(fā)抑制率（％）=（對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)-處理孢子萌發(fā)數(shù)）/對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)×100

1.2.5作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌孢子產(chǎn)量的影響

將培養(yǎng)的枯萎病菌菌落用無(wú)菌水沖洗于三角瓶?jī)?nèi)，充分振蕩搖勻，用3層無(wú)菌紗布過(guò)濾得到其孢子懸浮液，將孢子懸液濃度調(diào)至1×105個(gè)/mL。

無(wú)菌條件下，將根系分泌物用無(wú)菌過(guò)濾器（微孔濾膜，孔徑0.22 μm）過(guò)濾后與滅菌的Bilay液體培養(yǎng)基進(jìn)行等體積混勻，配成含根系分泌物的培養(yǎng)基，每瓶培養(yǎng)基50 mL，對(duì)照加等體積無(wú)菌水混合。

取1 mL孢子懸液加入到含供試作物根系分泌物的Bilay培養(yǎng)基中，25℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)第3 d時(shí)用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定產(chǎn)孢量。

2　結(jié)果與分析

2.1不同作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)的影響

從表1中可以看出，玉米、小麥和大豆3種作物根系分泌物處理的馬鈴薯枯萎病菌菌落生長(zhǎng)直徑顯著低于對(duì)照，對(duì)馬鈴薯枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)出明顯的抑制作用，但存在差異。玉米根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果最好，處理3 d時(shí)抑制效果明顯高于小麥和大豆，抑制率為51.27％，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)抑制作用增強(qiáng)，處理6 d時(shí)抑制率達(dá)61.75％。小麥根系分泌物處理3 d時(shí)抑制率為30.48％，處理4 d時(shí)抑制率最大，為32.37％，隨后抑制作用減弱。大豆根系分泌物處理3 d時(shí)抑制率為25.17％，處理4 d時(shí)抑制效果最好，抑制率達(dá)33.22％，隨后抑制效果降低，6 d時(shí)抑制率降到23.26％。

表1　玉米、小麥、大豆根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)的影響Table 1Effectc of corn，wheat，soybean root exudates on mycelium growth of F.oxysporum infecting potato

表2　玉米、小麥、大豆根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌孢子萌發(fā)的影響Table 2Effects of corn，wheat，soybean root exudates on spore germination of F.oxysporum infecting potato

2.2不同作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌孢子萌發(fā)的影響

不同作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌孢子萌發(fā)的影響見(jiàn)表2。在相同時(shí)間處理的條件下，對(duì)照平均孢子萌發(fā)數(shù)為26.25個(gè)，玉米、小麥和大豆根系分泌物處理的平均孢子萌發(fā)數(shù)分別為11.33，22.11和24.89個(gè)，3種作物根系分泌物對(duì)病菌孢子萌發(fā)表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，玉米根系分泌物處理的孢子萌發(fā)抑制率高于小麥根系分泌物處理和大豆根系分泌物處理，為56.84％，小麥根系分泌物處理的孢子萌發(fā)抑制率高于大豆根系分泌物處理，為15.77％，大豆根系分泌物處理孢子萌發(fā)抑制率僅為5.18％。

2.3不同作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌孢子產(chǎn)量的影響

從圖1可以看出，經(jīng)過(guò)3種作物根系分泌物處理培養(yǎng)的馬鈴薯枯萎病菌，其孢子產(chǎn)量顯著低于對(duì)照處理。當(dāng)對(duì)照處理的孢子數(shù)達(dá)9.24×106個(gè)/mL時(shí)，加入玉米、小麥、大豆3種作物根系分泌物的培養(yǎng)基孢子數(shù)分別為0.15×106，1.41×106和3.20× 106個(gè)/mL，且差異顯著。說(shuō)明玉米根系分泌物抑制馬鈴薯枯萎病菌產(chǎn)孢能力最強(qiáng)，小麥根系分泌物次之，大豆根系分泌物抑制效果最差。

圖1　不同作物根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌孢子產(chǎn)量的影響Figure 1Effect of different crop root exudates on spore production of F.oxysporum infecting potato

3　討論

研究結(jié)果表明，玉米、小麥和大豆3種作物的根系分泌物，對(duì)馬鈴薯枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)，孢子萌發(fā)和孢子產(chǎn)量均有一定程度的抑制作用，但3種作物根系分泌物的抑制效果之間存在差異，其中玉米根系分泌物具有較強(qiáng)的抑菌活性，小麥和大豆根系分泌物的抑制作用較弱。其可能是因作物種類不同根系分泌物中抑菌活性物質(zhì)的含量或成分不同所致。

植物根系分泌物的種類及其含量與其生長(zhǎng)環(huán)境相關(guān)［7］。本試驗(yàn)中僅采用了無(wú)菌水做提取溶劑，在人工環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)收集，因而不可能將極性和非極性的活性物質(zhì)全部提取出來(lái)。宋煒［8］的研究結(jié)果表明，萬(wàn)壽菊根不同溶劑粗提物對(duì)西瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)均有一定抑制作用。陳磊［9］所研究西芹鮮根不同浸提液對(duì)黃瓜枯萎病菌抑制作用中，乙醇的效果最好，其次是蒸餾水，丙酮的抑制作用最差。不同的植物其產(chǎn)生的根系分泌物也不同，吳蕾等［10］在大豆與玉米、小麥、高粱根系分泌物的比較分析中表明，大豆根系分泌物成分77種、小麥97種、玉米84種、高粱80種。玉米和煙草等植物根系分泌物的組成成分有著很大差異，各種成分含量也都不同，尤其是糖、有機(jī)酸以及氨基酸等［11］。此外植物在不同生長(zhǎng)階段的根系分泌物也不相同，Kamilova等［12］研究比較番茄、黃瓜和甜辣椒在3個(gè)不同的生長(zhǎng)階段有機(jī)酸和糖的滲出量，表明3種蔬菜根系分泌物中有機(jī)酸和糖的總量隨植物生長(zhǎng)而增加，并且有機(jī)酸組分均高于糖組分，但不同植物種類和植物的不同發(fā)育階段，有機(jī)酸變化占主導(dǎo)地位。

根系分泌物中含有多種真菌刺激劑或引誘劑，勢(shì)必會(huì)對(duì)周圍土壤微生物產(chǎn)生間接或直接的有害或有利的化感作用［13］。因此可利用植物根系分泌物中的化感物質(zhì)來(lái)抑制土壤中致病微生物的萌發(fā)和生長(zhǎng)繁殖，從而減輕植物病害。如前作為大麻，則幾乎可以使馬鈴薯免遭晚疫病的侵害；前作若為苜蓿，可明顯降低棉花枯萎病的發(fā)生；前作若為車軸草，亞麻的立枯病感染率則降低［14］。

綜上所述，玉米、小麥和大豆3種作物的水溶性根系分泌物對(duì)馬鈴薯枯萎病菌的菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)和孢子產(chǎn)量均有良好的抑制作用。該研究結(jié)果為防治馬鈴薯枯萎病提供了一定的理論依據(jù)。但能否作為防治馬鈴薯枯萎病的倒茬作物，還需進(jìn)一步的田間驗(yàn)證。另外，具有抑菌活性的物質(zhì)尚需進(jìn)行分離鑒定，為更深入的研究防治馬鈴薯枯萎病提供新的思路。

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Effect of Corn，Wheat and Soybean Root Exudates on Fusarium oxysporum Infecting Potato

MA Zhiwei，CHEN Hui，MENG Meilian，QU Yanjun，HU Jun*
（College of Agronomy，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot，Inner Mongolia 010019，China）

With corn，wheat and soybean，three crops as materials，root exudates were collected through hydroponics to measure how they affect the growth of Fusarium oxysporum infecting potato.The results showed that the root exudates of corn，wheat and soybean inhibited the growth of F.oxysporum mycelium，spore germination，and spore yield.The inhibitory effect of corn root exudates was the most significant.Wheat root exudates came in the second place and soybean root exudates were the least effective.

root exudate；Fusarium oxysporum；inhibition effect

S532

B

1672-3635（2016）04-0235-05

2015-03-31

國(guó)家現(xiàn)代馬鈴薯產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)崗位專家專項(xiàng)（nycytx-15；gwzj-20）。

馬志偉（1989-），男，碩士研究生，研究方向?yàn)轳R鈴薯病害。

（Corresponding author）：胡俊，教授，主要從事植物病害綜合防治，E-mail:hujun6202@126.com。