白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型大鼠PGE2和TNFα的影響

薛艷萍， 秦旭華，胡黃婉瑩，許玲，黨凱茹，王瑞清，吳小莉

·藥理毒理·

白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型大鼠PGE2和TNFα的影響

薛艷萍， 秦旭華，胡黃婉瑩，許玲，黨凱茹，王瑞清，吳小莉

目的：研究白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型大鼠血中前列腺素E2（PGE2）及腫瘤壞死因子α（TNFα）的影響，探討白芷總香豆素對(duì)治療偏頭痛的作用機(jī)理。方法：采用SD大鼠皮下注射硝酸甘油復(fù)制大鼠偏頭痛模型，實(shí)驗(yàn)組灌胃給予不同劑量白芷總香豆素混懸液，給藥4 h后，將動(dòng)物斷頭取血，分離血清，采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法檢測(cè)血清中PGE2和TNFα含量。結(jié)果：白芷總香豆素在0.72 g·kg-1劑量下可明顯抑制模型動(dòng)物血清中PGE2水平，降低模型動(dòng)物血中TNFα含量，與模型組比較有明顯差異（P＜0.05）。結(jié)論：白芷總香豆素可通過(guò)抑制TNFα、PGE2釋放來(lái)發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用，可能為其臨床治療偏頭痛作用機(jī)理之一。

白芷總香豆素；偏頭痛；實(shí)驗(yàn)研究

偏頭痛（Migraine）是一種原發(fā)性顱內(nèi)血管運(yùn)動(dòng)和神經(jīng)功能調(diào)節(jié)失常所引起的復(fù)發(fā)性疾病，屬于中醫(yī)學(xué)“頭痛”、“頭風(fēng)”的范疇。白芷為傘形科當(dāng)歸屬植物的根，具有散風(fēng)除濕、通竅止痛等功效，為歷代治療頭痛的要藥。既往研究發(fā)現(xiàn)，白芷的鎮(zhèn)痛成分主要與香豆素類成分有關(guān)。本研究選擇川產(chǎn)道地藥材白芷（Angelica dahuriea （Fisch. ex Hoffm. ） Benth. et Hook. f. var. formosana（Boiss.）Shan et Yuan）的提取物-總香豆素為研究對(duì)象，考察其對(duì)偏頭痛模型大鼠血中PGE2和TNFα影響，探討其作用機(jī)理。實(shí)驗(yàn)研究如下：

1 材料

1.1藥物

白芷購(gòu)于四川遂寧白芷GAP生產(chǎn)基地，白芷總香豆素浸膏（由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥制劑教研室制備，總香豆素含量測(cè)定為55.8％），實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水（含0.5％吐溫-80助溶）配成所需濃度的混懸液備用。

1.2試劑

Goat anti-rat PGE2ELISA Kit，美國(guó)ADL公司提供；Goat anti-rat TNFα ELISA Kit，晶美生物工程有限公司產(chǎn)品。

1.3儀器

美國(guó)Thermo Labsystems Multiskan MK3全自動(dòng)酶標(biāo)儀；美國(guó)Thermo Labsystems Wellwash 4MK2全自動(dòng)洗板機(jī)；Heraeus BioFuge stratos低溫高速離心機(jī)（德國(guó)）； SANYO全自動(dòng)制冰機(jī)（日本）；SANYO超低溫冰箱（日本）；ACS-AA型電子計(jì)重秤，上海友聲衡器有限公司；FA1004N電子天平（萬(wàn)分之一），法國(guó)塞多利斯公司。

1.4動(dòng)物

SD大鼠，雌雄兼用，體重180-220g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：scxk（川）2008-11。

2 方法

2.1白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型動(dòng)物血中PGE2的影響

取SD大鼠40只，雌雄各半，按體重分層隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白組、模型組、白芷總香豆素高劑量組、低劑量組。除空白組外其余各組動(dòng)物按文獻(xiàn)方法［1］復(fù)制硝酸甘油型偏頭痛模型（予皮下注射硝酸甘油10 mL·kg-1）。造模30 min后，實(shí)驗(yàn)組予川白芷總香豆素混懸液灌胃，具體給藥劑量見(jiàn)表1，空白組和模型組予等容積蒸餾水灌胃。給藥4 h后，將動(dòng)物斷頭處死，立即收集頸部動(dòng)靜脈混合血，注入含0.3 mg 的肝素鈉的冰冷試管中，輕輕搖勻。然后， 4℃3000 r·min-1離心10 min ，分離血清備用。采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法測(cè)PGE2，具體操作按測(cè)試盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2.2白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型動(dòng)物血中TNFα的影響

取SD大鼠40只，雌雄各半，按體重分層隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為空白組、模型組、白芷總香豆素高劑量組、低劑量組。除空白組外其余各組動(dòng)物按文獻(xiàn)方法［1］復(fù)制硝酸甘油型偏頭痛模型（予皮下注射硝酸甘油10 mL·kg-1）。造模30 min后，實(shí)驗(yàn)組予川白芷總香豆素混懸液灌胃，具體給藥劑量見(jiàn)表2，空白組和模型組予等容積蒸餾水灌胃（含0.5％吐溫-80）。給藥4 h后，將動(dòng)物斷頭處死，立即收集頸部動(dòng)靜脈混合血。待凝后，4 ℃3000 r·min-1離心10 min，分離血清備用。采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法測(cè)TNFα含量，具體操作按測(cè)試盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用《中國(guó)醫(yī)學(xué)百科全書·醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》統(tǒng)計(jì)軟件包PEMS3.1進(jìn)行。

3 結(jié)果

3.1白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型動(dòng)物血中PGE2的影響

表1　白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型大鼠血中PGE2的影響

表1結(jié)果顯示：模型組與空白組比較，血中PGE2水平明顯升高（P＜0.05），白芷總香豆素高劑量組對(duì)模型動(dòng)物血中PGE2水平有明顯的抑制作用（P＜0.05）。3.2 白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型動(dòng)物血中TNFα的影響

表2　白芷總香豆素對(duì)偏頭痛模型大鼠血中TNFα的影響

表2結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組血中TNFα含量明顯升高（P＜0.05），白芷總香豆素高劑量組能降低血中TNFα含量，與模型組比較具有顯著差異（P＜0.05）。

4 討論

前列腺素（prostaglandins ， PGs）廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體的一類重要的活性物質(zhì)。1930年由von Enler發(fā)現(xiàn)，前列腺素廣泛存在于人類和哺乳動(dòng)物組織和體液中。前列腺素的化學(xué)本質(zhì)為具20個(gè)碳原子的不飽和脂肪酸，可進(jìn)一步分為A、B、C、D、E、F、G、H、I等型。目前研究較多的有E、F、A、B、I型。多數(shù)PG作用限于產(chǎn)生釋放的局部，為一局部激素。前列腺素參與哺乳動(dòng)物的炎癥反應(yīng)，是一類重要的炎癥因子［2］。

在偏頭痛的發(fā)生機(jī)理中，三叉神經(jīng)周圍及血管的無(wú)菌性炎癥學(xué)說(shuō)也從一個(gè)側(cè)面反應(yīng)了偏頭痛的部分病理過(guò)程。我們知道毛細(xì)血管通透性增高、炎細(xì)胞浸潤(rùn)趨化與炎性介質(zhì)的釋放是炎癥反應(yīng)的基本過(guò)程，是引起炎癥部位腫脹、疼痛的主要原因。而在這一過(guò)程中，花生四烯酸及其代謝產(chǎn)物前列腺素類物質(zhì)是一類重要的炎癥介質(zhì)，H+與PGE2刺激神經(jīng)末梢是造成炎癥組織疼痛的主要原因，降低PGE2的生成對(duì)于減少滲出和抗炎鎮(zhèn)痛都具有重要意義。當(dāng)前針對(duì)前列腺素代謝的非甾體抗炎藥（如ASA）也是臨床上正對(duì)偏頭痛應(yīng)用最廣泛的抗炎止痛藥［3］。

藥效學(xué)研究顯示：白芷總香豆素具有明確的抗炎作用，因此，考察其對(duì)PGE2的影響是了解其作用機(jī)理和環(huán)節(jié)的途徑，本次研究顯示：白芷總香豆素在0.72 g·kg-1劑量下對(duì)PGE2水平有明顯的抑制作用，因此我們認(rèn)為該作用與其對(duì)抗偏頭痛的發(fā)生時(shí)三叉神經(jīng)周圍及血管的無(wú)菌性炎癥的作用有關(guān)，是其抗偏頭痛治療作用的機(jī)理之一。

腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNFα）是1975年發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞因子。目前分為兩種，即TNFα（由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生）和TNFβ（由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，也稱淋巴細(xì)胞毒素）。TNFα和前述的PGE2一樣，是促進(jìn)炎癥病理進(jìn)展的重要炎癥因子，在炎癥的病理生理中起到重要的作用。最新研究表明，細(xì)胞因子中的TNFα在炎癥發(fā)病中起到“中心罪犯”的作用，它可以刺激PGE2等多種炎性介質(zhì)釋放，導(dǎo)致持續(xù)性炎癥反應(yīng)，說(shuō)明TNFα在炎癥的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起中心作用［4］。

在本次其對(duì)模型動(dòng)物血中TNFα影響的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在0.72 g·kg-1劑量下，白芷總香豆素可下調(diào)偏頭痛模型動(dòng)物中TNFα的水平。故我們認(rèn)為白芷總香豆素可通過(guò)抑制細(xì)胞因子中的TNFα釋放，繼而抑制PGE2等炎性介質(zhì)釋放來(lái)發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用，這可能為其臨床治療偏頭痛作用機(jī)理之一。

［1］ 周永紅，王新陸，胡懷強(qiáng)，等.硝酸甘油型實(shí)驗(yàn)性偏頭痛大鼠模型建立與評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2005，12 （2）：113.

［2］ 李旭，王百忍.炎性和免疫因子參與神經(jīng)源性痛機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2007，23（3）：327.

［3］ 章元沛.環(huán)氧合酶-2特異性抑制劑非甾體抗炎藥的研究進(jìn)展［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊(cè)，2001， 28（5）：285.

［4］ 竇肇華，張遠(yuǎn)強(qiáng)，郭順根.免疫細(xì)胞學(xué)與疾病［M］.北京中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2004：458.

（責(zé)任編輯：陳思敏）

Study of the effects of Baizhi total coumarin on PGE2 and TNFα in rat migraine model /

XUE Yan-ping， QIN Xuhua， HU Huang-wanying， XU Ling， DANG Kai-Ru，WANG Rui-qing， WU Xiao-Li//（ School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To study the effects of Baizhi total coumarin on PGE2and TNFα in rat migraine model， and investigate the mechanism of Baizhi total coumarin in treating migraine. Method: The rat migraine model was induced by hypodermic injection of nitroglycerinum and given different dosages of Baizhi total coumarin. The serum of rat migraine model was collected to detect the levels of PGE2and TNFα by ELISA after 4h. Result: The levels of PGE2and TNFα were obvious lower in the serum of rat migraine model administered with 0.72 g·kg-1Baizhi total coumarin compared with the control group （P ＜0. 05）. Conclusion: Baizhi total coumarin shows analgesic and anti-inflammatory effects through restraining TNFα and PGE2， which maybe one of mechanisms for Baizhi total coumarin in treating migraine in clinic.

Baizhi total coumarin； migraine； experimental study

R 285.5

A

1674-926X（2016）03-014-03

四川省教育廳重大培育項(xiàng)目（09ZZ006）；四川省科技廳攻關(guān)項(xiàng)目（2006C08-76）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 611137

薛艷萍，在讀碩士研究生，主要從事中藥基礎(chǔ)理論及應(yīng)用研究Tel：18328752526 Email：634095743@qq.com

秦旭華，女，副教授，主要從事中藥基礎(chǔ)理論及應(yīng)用研究Tel：13398199519 Email：1978537820@qq.com

2015-10-06