HuR和p120在結直腸癌中的表達及意義

章　輝　楊朝暉　曹學全★　盧洪勝　顧華敏　陶芳芳

HuR和p120在結直腸癌中的表達及意義

章輝楊朝暉曹學全★盧洪勝顧華敏陶芳芳

目的 檢測HuR和p120在結直腸癌組織中的表達及臨床意義。方法 采用免疫組織化學方法（IHC）檢測HuR和p120在45例結直腸癌組織中的表達。結果 結直腸癌組織中HuR表達高于正常結直腸組織（P＜0.05），而p120表達則低于正常結直腸組織（P＜0.05）。45例結直腸癌組織中，HuR、p120陽性表達率均與腫瘤的組織學分級、浸潤程度及臨床TNM分期有關（P＜0.05）；而與年齡、性別、腫塊大小無關（P均＞0.05）；p120在有、無淋巴結轉移組中表達差異有統計學意義（P＜0.05），而HuR 蛋白表達差異無統計學意義（P＞0.05）；HuR 和p120表達呈負相關（r=-0.343，P＜0.05）。結論 結直腸癌中HuR高表達可能參與了腫瘤發生與增殖，而p120低表達可能與腫瘤浸潤及淋巴結轉移有關。

結直腸癌 免疫組織化學 HuR p120

結直腸癌是胃腸道最常見的惡性腫瘤之一，預后較差。原發性結直腸癌的發病率呈上升態勢，同時發病年齡趨向老年化［1］。人們對結直腸癌的發病機制尚不明確，因此，早期診斷仍是提高患者預后的有效手段［2］。HuR是Hu家族中至今發現的唯一在人體組織廣泛表達的蛋白（除神經組織外），是目前公認的mRNA 結合蛋白之一，在腫瘤發生早期，即參與增殖分化、細胞凋亡、侵襲轉移、血管新生和免疫逃逸中發揮作用［3］。p120連接素是近年來發現的一種細胞粘附分子，細胞內信號分化喪失和具有侵襲性，容易發生轉移［4］。本研究采用免疫組織化學方法（IHC）檢測HuR和p120在結直腸癌組織中的表達情況。報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 收集本院病理科2012年10月至2013年10月經手術切除且病史完整的結直腸癌石蠟包埋組織標本45例（患者45例）。其中男27例，女18例；年齡39～80歲，中位年齡58歲。均無遠處轉移。患者手術前均未接受放、化療及內分泌治療。其中低分化癌5例、中分化32例、高分化8例。TNM臨床分期：Ⅰ期14例、Ⅱ期25例、Ⅲ期6例、Ⅳ期0例。包膜浸潤35例、無浸潤10例。有淋巴結轉移者15例、無淋巴結轉移者30例。另取經病理學檢查證實無癌腫浸潤的正常結直腸組織15例作為對照組。所有切片經病理科多位診斷醫師閱片證實。

1.2主要試劑 （1）IHC一抗：鼠抗人HuR 單克隆抗體購自武漢博士德生物技術有限公司，鼠抗人p120連接素單克隆抗體購自福州邁新生物技術開發有限公司。（2）IHC二抗：PV-8000檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。（3）DAB顯色試劑盒，購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3檢測方法 標本經10%中性緩沖福爾馬林溶液固定，常規脫水、透明、浸蠟，石蠟包埋，4μm連續切片。IHC染色采用通用型二步法：切片經常規脫蠟至水，置于檸檬酸緩沖液（pH=6.0）中加熱行抗原修復，室溫冷卻后磷酸緩沖鹽溶液（PBS，pH=7.2）洗滌，滴加一抗，置濕盒4℃冰箱過夜。PBS 洗滌后滴加二抗，室溫中孵育15～20min，再行PBS洗滌后DAB顯色，蘇木素復染，常規脫水、透明、封片，顯微鏡下觀察。用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4染色結果判斷 在排除非特異性染色的前提下，HuR陽性染色定位于細胞核；p120陽性染色定位于細胞膜，p120無論膜表達情況如何，只要≥10%腫瘤細胞胞漿或核出現棕褐色顆粒則為異位表達。顯微鏡下定位區域出現清晰的棕黃色染色的細胞即為陽性細胞。觀察＞5個高倍鏡視野，計數≥1000個細胞中的陽性細胞數，陽性細胞數＜10%為陰性，≥10%為陽性。1.5 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件。計數資料組間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用spearman等級相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1HuR、p120在結直腸癌及正常對照直腸組織中的表達 免疫組化結果顯示，HuR定位于細胞核（癌旁正常直腸組織細胞偶有少量核染色），呈棕黃色顆粒（見圖1A）；p120表達陽性細胞定位于細胞膜，呈棕黃色顆粒（見圖1B）；而p120異常表達主要表現為細胞膜表達減弱，胞膜表達正常但同時出現了胞質表達，以及胞膜表達減弱或缺失的同時出現胞質和（或）胞核表達。在正常對照結直腸組織中HuR均不表達，陽性率為0.00%（0/15）；而p120全部呈陽性，陽性率為100.00%（15/15）。在結直腸癌組織中，HuR陽性率為64.44%（29/45），p120陽性率為73.33%（33/45）。見表1。

圖1　HuR在結直腸癌組織中的表達（×400）

表1　HuR、p120在結直腸癌及正常直腸組織中的表達［n（%）］

2.2結直腸癌組織中HuR表達與患者臨床病理特征的關系 見表2。

表2　HuR、p120表達與患者臨床病理特征的關系［n（%）］

2.3HuR和p120在結直腸癌組織中表達的相關性 在45例結直腸癌標本中，HuR和p120表達均為陽性的共14例，表達均為陰性的共1例。spearman 等級相關分析顯示，HuR、p120表達呈負相關（rs=-0.343，P＜0.05）。

3　討論

Hu家族又稱類胚胎致死異常視覺（ELAVL）家族，有4個成員：HuB（He1-N1）、HuC、HuD和HuR，前3個成員主要在終端分化的神經組織表達并與神經發育有關，而HuR（又名ELAV1）是一種廣譜mRNA結合蛋白，在許多組織細胞中廣泛表達［5］。HuR 通過和細胞內mRNA 非翻譯區富含Au元件（AREs）的結合，保持mRNA 的穩定性，使之不易被降解從而增強其表達，發揮其轉錄后的調控作用［6，7］。研究發現，HuR在眾多腫瘤的發生、發展及轉移中發揮作用，參與腫瘤的增殖分化、細胞凋亡、侵襲轉移和免疫逃逸等［5，8～10］。本研究發現，HuR 蛋白在結直腸癌組織中表達的陽性率明顯高于正常對照結直腸組織，提示HuR可能參與結直腸癌的早期事件之一，為進一步闡明HuR導致結直腸癌的發生機制提供了充分證據。通過HuR蛋白與結直腸癌臨床病理特征分析結果顯示，HuR蛋白表達與結直腸癌臨床分期、分化程度及有無包膜浸潤等相關，而與患者性別、年齡、腫瘤大小、有無淋巴結轉移等無關，提示HuR蛋白可能參與結直腸癌的早期發生及與疾病預后相關。

p120是一種定位于細胞膜的細胞內糖蛋白，與E-cad的胞質區段結合，形成E-cad鏈蛋白復合體，是維持細胞粘附和上皮結構的首要中介蛋白［11］。在正常上皮組織中，p120表達以細胞膜尤其是細胞-細胞連接處為主，胞質表達微弱，胞核不表達，而在癌組織和癌細胞中p120會從胞膜轉移至胞質中，表現為胞質和（或）胞核表達，胞膜表達減弱或消失，說明癌細胞中信號分子已出現轉位或重新分布，易位至胞質和胞核的p120啟動了癌基因的轉錄［12］。本研究結果顯示，結直腸癌組中p120細胞膜表達陽性率明顯低于對照組的正常結直腸組織，且隨著分化程度的降低p120細胞膜表達的陽性率也相應降低，部分癌組織中表達缺失。免疫組化顯示隨著腫瘤分化的降低，p120在包膜表達逐漸降低；TNM分期晚、浸潤程度深、有淋巴結轉移的腫瘤細胞，p120表達水平低，提示隨著p120胞膜陽性表達的減少，腫瘤的浸潤轉移能力增強，且在胞質出現易位表達，這可能是由于在腫瘤組織中p120以磷酸化的形式自胞膜轉移至胞質的原因。因此，作者認為p120與腫瘤的分化、浸潤、轉移可能密切相關。

本資料中檢測結果顯示結直腸癌組織中HuR與p120的表達與結直腸癌的TNM 分期有關，對兩者表達的相關性進行分析，發現兩者的表達呈負相關關系（r=0.343）。說明HuR與p120在結直腸癌的發生發展中具有重要作用，提示在結直腸癌中HuR與p120兩者可能通過共同或相同的通路在腫瘤的發生發展中發揮作用。陽性表達的HuR可能作為上游調控因子通過多種途徑對p120基因產生調控，降低p120在胞膜的表達，而在胞質和（或）胞核表達，易位至胞質和胞核的p120啟動了癌基因的轉錄［12］。

綜上所述，在結直腸癌的發生、發展及轉移過程中，HuR、p120呈現出不同程度的陽性表達，此兩種蛋白為判斷結直腸癌預后的一個重要指標。針對HuR、p120進行藥物設計和開發，也有可能為結直腸癌的早期診斷和治療開辟新的途徑。

1 郝希山，王殿昌.腹部腫瘤學.北京：人民衛生出版社，2013.353～354.

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3 GubinM M，Calaluce R，Davis J W，et al.Overexpression of the RNA binding protein HuR impairs tumor growth in triple negative breast cancer associated with deficient angiogenesis.Cell Cycle， 2010， 9（16）： 3337～3346.

4 Cheung LW，Leung PC，Wong AS.Cadherin switching and activation of p120 catenin signaling are mediators of gonadotropin-releasing hormone to promote tumor cell migration and invasion in ovarian cancer.Oncogene，2010，29（16）：2427～2440.

5 Liao WL，Wang WC，Chang WC，et al.The RNA-binding protrein HuR stabilizes cytosolic phospholipase A2α mRNA under interleukin-1β treatment in nonsmall cell lung cancer A549 cells.J Biol Chem，2011，286（41）：35499～35508.

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11 Liu Y，Wang Y，Zhang Y，et al.Abnormal expression of p120-catenin，E-cadherin，and small GTPases is significantly associated with malignant phenotype of human lung cancer.Lung Cancer，2009，63（3）：375～382.

12 Stairs DB，Bayne LJ，Rhoades B，et al.Deletion of p120-catenin results in a tumor microenvironment with inflammation and cancer that establishes it as a tumor suppressor gene.Cancer Cell，2011，19（4）：470～483.

Objective To investigate the expression of HuR and p120 proteins in colorectal carcinoma and the clinical significance. Methods The expressions of HuR and p120 in 45 cases of colorectal carcinoma and 15 samples of normal rectal tissue were detected by immunohistochemical （PV-8000 method）. Results The expressions of HuR in colorectal carcinoma tissues were significantly higher than those in normal rectal tissue （both P＜0.05），while p120 was lower than those in normal rectal tissue （P＜0.05））.The expressions of HuR and p120 in colorectal carcinoma tissues were correlated with the clinical stage，infiltrationand and histological grade （both P＜0.05）； while not correlated with age，gender and tumor size（both P＞0.05）. The lymph node metastasis was correlated with p120 expression （P＜0.05），but not with HuR expression （P＞0.05）. HuR expression was positively was negatively correlated correlated with p120 expression in colorectal carcinoma（r=0.343，P＜0.05）. Conclusion Overexpression of HuR may be involved in the tumorigenesis and tumor proliferation，while lowexpression of p120 might be related to the tumor invasion and lymph node metastasis in colorectal carcinoma。

Colorectal carcinomat Immunohistochemical HuR p120

318000 浙江省臺州市中心醫院病理科