不同后處理富硒酵母對小鼠抗氧化力、免疫力及硒沉積的影響

鄒　楠，王學東，閻　兵，李　彪，胡先勤，胡駿鵬，劉　瓊（.武漢輕工大學，湖北武漢43003；.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌443003）

不同后處理富硒酵母對小鼠抗氧化力、免疫力及硒沉積的影響

鄒楠1，王學東1，閻兵1，李彪2，胡先勤1，胡駿鵬2，劉瓊1
（1.武漢輕工大學，湖北武漢430023；2.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌443003）

為研究不同后處理方式對富硒酵母應用效果的影響，本試驗比較了活性富硒酵母、酶解富硒酵母和機械粉碎富硒酵母對飼喂霉變日糧小鼠生理生化機能的影響。結果顯示，活性富硒酵母組在提高小鼠肝臟谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）水平上表現最佳，但與其他組差異不顯著（P＞0.05）；機械粉碎富硒酵母組血清總超氧化物歧化酶（TSOD）和血凝集指標顯著優于其他各組（P＜0.05）；而酶解富硒酵母組肝臟硒含量顯著優于其他各組（P＜0.05）。該試驗說明，不同后處理富硒酵母均具有緩解霉變日糧對動物負面影響的作用，但后處理方式不同，作用效果有差異。

富硒酵母；后處理；小鼠；抗氧化；免疫

［Abstract］Ⅰn order to explore the application effect of different post-processing selenium-enriched yeast（Se-Yeast），this paper compared the physiological activity changes ofmice fed moldy diet，which was treated with active Se-Yeast，hydrolysised Se-Yeast or crushed Se-Yeast.Results showed that the liver glutathione peroxidase（GSH-Px）in active Se-Yeastgroup was the highest，while therewas no significant difference among all groups（P＞0.05）.The serum total superoxide dismutase（T-SOD）and anti-SRBC antibody level in crushed Se-Yeast group was significantly higher than those of other groups（P＜0.05）.While the contentof tissue Se in the hydrolysised Se-Yeast group was higher than thatof other groups significantly（P＜0.05）.This experiment indicated that all the Se-Yeast above-mentioned could decrease the negative effects caused bymoldy diet，meanwhile the effect could be influenced by the post-processingmethods.

［Key words］selenium-enriched yeast；post-processing；mice；antioxidant；immunity

霉菌毒素污染會對動物機體的抗氧化和免疫機能等造成諸多負面影響，而硒具有提高動物機體抗氧化能力和免疫水平的作用。發酵制備的富硒酵母，可以通過不同的后處理技術得到不同類型的產品，其中包括具有酵母菌活性的富硒酵母（簡稱活性富硒酵母）、經機械粉碎失去酵母菌活性的富硒酵母（簡稱機械粉碎富硒酵母）及經過酶解自溶失去酵母活性的富硒酵母（簡稱酶解富硒酵母）等。為探討不同后處理富硒酵母的應用效果差異，本試驗比較了活性富硒酵母、酶解富硒酵母和機械粉碎富硒酵母對飼喂霉變日糧小鼠生理生化機能的影響，以期為選擇富硒酵母的后處理方式提供參考。

1　材料與方法

1.1試驗材料試驗動物：雄性昆明小鼠48只，單只體重約20g，購自湖北省疾病控制中心。

富硒酵母：活性富硒酵母、酶解富硒酵母、機械粉碎富硒酵母，均為實驗室自制。

試驗日糧：對小鼠普通日糧進行人工霉變處理（高溫高濕環境致霉）。檢測其中主要霉菌毒素含量，如表1所示。由表1可以看出，試驗日糧霉菌總數、黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮均已超標。

主要試劑：谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）檢測試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）檢測試劑盒、丙二醛（MDA）檢測試劑盒、考馬斯亮藍蛋白檢測試劑盒、溶菌酶（LZM）測試盒等，均購自南京建成生物工程研究所。

表1　發霉飼料主要霉菌毒素指標檢測結果及相應衛生標準

主要設備：低溫冷凍離心機（CR22GⅠⅠ，日本日立Hitachi）；組織勻漿機（FG200，濰坊三水檢驗設備公司）；電子天平（PL-2002，上海精密科學儀器有限公司）；分光光度計（T6，北京普析有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-S2，常州普天儀器制造有限公司）。

1.2試驗方法試驗動物分組與樣品采集：為消除不同飼養環境對試驗結果造成的影響，采用完全隨機分組的方法，將48只小鼠隨機分配成4組，即空白對照組（發霉飼料，灌胃0.86％生理鹽水）、機械粉碎富硒酵母組（發霉飼料，灌胃機械粉碎富硒酵母懸液）、酶解富硒酵母組（發霉飼料，灌胃酶解富硒酵母懸液）和活性富硒酵母組（發霉飼料，灌胃活性富硒酵母懸液），每劑型組有12只小鼠，實行混籠飼養。先預飼養1周，然后進行灌胃試驗，灌胃時間為4周。于每天15：00灌胃一次。各富硒酵母組中每天灌胃的硒劑量隨小鼠體重調節，按照每10 g體重給予0.9μg硒計算。小鼠自由采食、飲水、每天更換一次墊料，保證鼠籠內的環境清潔（張賓和王予輝，2007）。在第35天試驗結束后對小鼠進行體重稱量，全群利用摘除眼球法采血，之后處死并對其解剖，采集肝臟，低溫勻漿備用。血樣于離心管內，放置約1 h，將凝固血與管壁剝離，使血清充分析出，2000 r/min離心10 min，收集血清，-20℃保存。

抗氧化指標檢測：GSH-Px活性、T-SOD活性和MDA值均依照南京建成生物工程研究所提供的方法進行測定。

免疫指標檢測：遲發型變態反應指標參照Corsini等（1997）提供的方法測定；血清溶血素的測定采用血凝集法（徐學瑛，1979）；溶菌酶的測定（比濁法）參照南京建成生物工程研究所提供的溶菌酶試劑盒LZM中的測定。

硒含量指測定：參照GB/T 5009.93-2003進行。

1.3數據處理所有數據均以 “平均數±標準差”表示，用SPSS12.0.1軟件進行統計分析。

2　試驗結果與分析

2.1不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟抗氧化指標的影響不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟抗氧化指標的影響結果見表2。由表2可以看出，添加富硒酵母各組的GSH-Px值均顯著高于空白硒組（P＜0.05），其中，活性富硒酵母組最高，但各不同后處理富硒酵母組間無顯著差異 （P＞0.05）；機械粉碎富硒酵母組T-SOD值顯著高于空白硒組和酶解富硒酵母組 （P＜0.05）；MDA值各組之間未見顯著差異（P＞0.05）。

表2　肝臟組織抗氧化指標

本試驗中，飼喂霉變日糧后，小鼠肝臟GSHPx和T-SOD值下降，MDA值上升，提示霉菌毒素對小鼠機體的抗氧化能力有負面作用，富硒酵母具有緩解上述負面作用的趨勢，但不同處理組間存在一定差異。

2.2不同后處理富硒酵母對小鼠血清免疫指標的影響不同后處理富硒酵母對小鼠血清免疫指標的影響結果見表3。由表3可見，血凝集抗體積數指標上機械粉碎富硒酵母組顯著高于其他各組（P＜0.05），另外兩個免疫指標遲發型變態反應和溶菌酶含量各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表3　血清的各項免疫指標

本試驗中，飼喂霉變日糧后，小鼠肝臟遲發型變態反應和血凝集抗體積數升高，溶菌酶含量下降，提示霉菌毒素對小鼠機體的免疫能力有負面作用。從數值上看，富硒酵母緩解了遲發型變態反應，提高了溶菌酶活力，顯示出改善免疫機能的作用。機械粉碎富硒酵母組血凝集抗體積數提高，這可能與機械破碎后酵母細胞壁的形態有關，具體原因還有待進一步探討。

2.3不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟硒含量的影響不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟硒含量的影響見表4。表4結果表明，添加不同后處理富硒酵母的各組肝臟硒沉積量均極顯著高于空白組（P＜0.01）。各富硒酵母組之間也存在一定差異，酶解富硒酵母組硒沉積量顯著高于活性富硒酵母組和機械粉碎富硒酵母組（P＜0.05）。

表4　肝臟組織樣硒的含量

本研究中各富硒酵母組肝臟硒水平均在2.0 mg/kg以上。這提示，攝入霉變日糧后，小鼠機體需要更多的硒儲備，以利于緩解霉菌毒素的負面影響。

3　討論與小結

硒元素具有提高動物機體抗氧化能力和免疫水平的作用 （王冠興等，2008；Kouadio等，2007）。不同來源的硒應用效果不同，這與各種形態的硒在吸收、轉運和代謝的方面的差異有關。同一來源的硒，受各種因素的影響，應用效果也可能不同（陳忠法等，2003）。

富硒酵母是發酵生產的制劑，其最初是單細胞形態，也可繼續通過酶解或機械加工打開細胞壁，以促進其中硒成分的釋放。研究顯示，單細胞形態的富硒酵母在動物消化道內會發生自溶現象，釋放出包含硒成分的內容物組分，發揮補硒的作用（閻兵等，2011）。目前，關于不同后處理工藝制備的富硒酵母的應用效果研究較少。

本試驗中，小鼠飼喂發霉日糧后，其機體抗氧化和免疫能力受到一定程度的負面影響，通過應用富硒酵母，上述負面作用得到緩解。不同后處理方法制備的富硒酵母在應用效果上存在一定差異。活性富硒酵母在提高小鼠肝臟GSH-Px水平上表現最佳，但與其他組差異不顯著（P＞0.05）；機械粉碎富硒酵母組血清T-SOD和血凝集指標顯著優于其他各組（P＜0.05）；而酶解富硒酵母組肝臟硒含量顯著優于其他各組（P＜0.05）。

本試驗結果提示，富硒酵母的后處理工藝影響硒的釋放及其在機體內的吸收利用。同時，由于富硒酵母自身除硒元素外，還含有其他諸多成分，這些成分也會收到后處理的影響，進而最終影響產品的應用效果，其原因還有待今后深入探討。

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S816.7

A

1004-3314（2016）08-0040-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160811