HPLC法同時(shí)測定復(fù)方康膚搽劑中兩組分含量

何德云，鐘元高，廖海燕，申冬妮，韓歡歡，張　濤，李　佳

HPLC法同時(shí)測定復(fù)方康膚搽劑中兩組分含量

何德云，鐘元高，廖海燕，申冬妮，韓歡歡，張濤，李佳

目的建立HPLC法測定復(fù)方康膚搽劑中水楊酸和醋酸地塞米松的含量的方法。方法采用Agilent 1100高效液相色譜儀同時(shí)測定復(fù)方康膚搽劑中水楊酸和醋酸地塞米松的含量，色譜柱Agilent 5hC-C18(2)（4.6 mm×250 mm；5 μm）；流動(dòng)相為：0.025 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH至3.0）∶乙腈（60∶40），檢測波長240 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量10 μl。結(jié)果水楊酸在1.068～10.68 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=1887X+325.74（r=0.9997）；醋酸地塞米松在0.0202～0.2018 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，回歸方程為：Y=2055.4X+0.1304（r=1）；水楊酸和醋酸地塞米松樣品平均回收率分別為100.91%（RSD=0.38%）和101.67%（RSD=0.94%）。結(jié)論該方法操作簡單，定量準(zhǔn)確，適合該制劑中兩組分含量的同時(shí)測定。

HPLC；復(fù)方康膚搽劑；水楊酸；醋酸地塞米松；含量測定

1　儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀（Agilent1100，美國），優(yōu)普系列超純水器（UPT-Ⅰ，成都超純科技有限公司），電子分析天平（BT25S，賽多利斯，德國）。

1.2試藥醋酸地塞米松對照品（100122-200805，純度99.6%，中國藥品生物制品檢定所），水楊酸對照品（100106-201104，純度99.9%，中國食品藥品檢定研究院）；無水乙醇[20100201，重慶川東化工 （集團(tuán)）有限公司化工試劑廠]，磷酸二氫鉀（20130413，成都市科龍化工試劑廠），色譜乙腈（A998-4，F(xiàn)isher Scientific），均為分析純；超純水（自制），復(fù)方康膚搽劑（批號(hào)：20131106、20131128、20131209，某醫(yī)院自制）。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液制備

2.1.1混合對照品溶液制備精密稱取醋酸地塞米松對照品10.13 mg，置100 ml量瓶，加75%乙醇溶解、稀釋至刻度，搖勻，作為A液（貯備液）；再精密稱取水楊酸對照品10.69 mg置10 ml量瓶中，加75%乙醇溶解、稀釋至刻度，搖勻，作為B液（貯備液）。精密量取A液1 ml、B液5 ml置10 ml量瓶中，加75%乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。

2.1.2供試品溶液制備精密量取復(fù)方康膚搽劑2 ml置200 ml量瓶中，加75%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，即得。

2.1.3陰性對照溶液制備按照處方工藝制備除醋酸地塞米松和水楊酸的樣品溶液100 ml，參照2.1.2項(xiàng)下方法制備成陰性對照溶液。

2.2色譜條件與專屬試驗(yàn)

2.2.1色譜條件色譜柱：Agilent 5hC-C18(2) （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.025 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH至3.0）∶乙腈（60∶40）；柱溫30℃；流速：1.0 ml/min；檢測波長：240 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2.2專屬性試驗(yàn)分別吸取混合對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μl，照上述色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，陰性對照溶液在醋酸地塞米松和水楊酸出峰處未檢出，色譜峰分離度>1.5，表明該方法專屬性良好。由于處方中水楊酸量為醋酸地塞米松量的50倍，使水楊酸色譜峰高明顯高于醋酸地塞米松，為了使色譜圖清晰、明了，本研究附放大后圖譜（圖1）。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對照品溶液2、4、8、10、15、20 μl，照上述色譜條件分別注入液相儀，記錄醋酸地塞米松和水楊酸的進(jìn)樣量（μg）與峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得醋酸地塞米松和水楊酸線性回歸方程分別為Y=2055.4X+0.1304，r=1 （n=6）；Y=1887X+325.74，r=0.9997(n=6)，結(jié)果表明，醋酸地塞米松和水楊酸分別在 0.0202～0.2018 μg 和1.068～10.68 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2精密度試驗(yàn)取混合對照品溶液，照上述色譜條件依次連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μl，記錄兩組分峰面積，以峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果：醋酸地塞米松和水楊酸RSD分別為0.7%（n=6）和0.9%（n=6），表明該方法精密度好。

2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為20131106復(fù)方康膚搽劑，按“2.1.2”條件制備供試品溶液6份，照上述色譜條件下進(jìn)行分析，記錄兩組分峰面積，以峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果：醋酸地塞米松和水楊酸RSD分別為0.8%（n=6）和1.1%（n=6），表明該方法重復(fù)性好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取批號(hào)為20131106樣品稀釋溶液，1 d內(nèi)依次在第2、4、6、10、16、20、24h，按上述色譜條件進(jìn)行分析，記錄兩組分峰面積，以峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果：醋酸地塞米松和水楊酸RSD分別為1.4%（n=7）和1.5%（n=7），表明該樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5加樣回收試驗(yàn)精密量取批號(hào)為20131106復(fù)方康膚搽劑（含醋酸地塞米松1.02 mg/ml，水楊酸50.22 mg/ml）1 ml置200 ml量瓶中，再精密稱取醋酸地塞米松和水楊酸對照品，按上述取樣量80%、100%、120%投料，制備成3個(gè)不同梯度的供試品溶液各3份，照2.1.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算回收率，得醋酸地塞米松和水楊酸的平均回收率分別為 101.67%和 100.91%，RSD分別為 0.94%和0.38%。

圖1　專屬性試驗(yàn)高效液相色譜圖（放大后圖譜）

2.4樣品含量測定將 20131106、20131128、20131209三個(gè)批次樣品按照“2.1.2”方法處理，每個(gè)批次平行取2份，每份樣品溶液按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件方法依次進(jìn)樣2次，記錄醋酸地塞米松和水楊酸的峰面積及出峰時(shí)間；再精密稱取醋酸地塞米松和水楊酸對照品各2份，照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備混合對照品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣分析，記錄兩組分峰面積及出峰時(shí)間，以外標(biāo)法計(jì)算樣品的含量，結(jié)果見表1。

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3　討論

復(fù)方康膚搽劑屬于醫(yī)院非標(biāo)準(zhǔn)制劑，主要成分為醋酸地塞米松和水楊酸，且水楊酸量為醋酸地塞米松的50倍，其含量測定標(biāo)準(zhǔn)為高效液相色譜法測定醋酸地塞米松的含量，并未對水楊酸含量做具體規(guī)定。而水楊酸在處方中占的比例相當(dāng)大，為了保障患者用藥安全，本研究建立了能同時(shí)測定醋酸地塞米松和水楊酸含量的方法，通過驗(yàn)證，該方法具有一定可行性。

本研究以流動(dòng)相為空白，對醋酸地塞米松和水楊酸對照品分別在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示，醋酸地塞米松在240 nm有最大吸收，水楊酸在230 nm有最大吸收。由于處方中醋酸地塞米松含量為水楊酸含量的1/50，為了使醋酸地塞米松在檢測中得到最大的響應(yīng)，故本研究采用240 nm作為檢測波長。

針對水楊酸和醋酸地塞米松的化學(xué)特性，以及二者的極性，筆者以0.025 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH至3.0）∶乙腈（60∶40）為流動(dòng)相進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，水楊酸保留時(shí)間為4.9 min左右，醋酸地塞米松保留時(shí)間為21.8 min左右，二者分離度完全符合《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)。

本研究結(jié)果表明，本文建立的方法，同時(shí)測定復(fù)方康膚搽劑中醋酸地塞米松和水楊酸的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率均符合 《中國藥典》2010年版二部 附錄ⅪⅩ規(guī)定，適合用于該制劑的質(zhì)量控制和監(jiān)督。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1120-1122.

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Simultaneous determination of two components content in compound Kangfu liniment byhPLC method

He Deyun,Zhong Yuangao,Liaohaiyan,Shen Dongni,Hanhuanhuan,Zhang Tao,Li JiaInstitute for Drug and Instrument Control of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610017,China

ObjectiveTo establish a determination method of salicylic acid and dexamethasone acetate content in compound Kangfu liniment byhPLC.MethodsAgilent 1100hPLC was used to simultaneously determinate the content of salicylic acid and dexamethasone acetate in compound Kangfu liniment.The column was agilent 5hC-C18(2)(4.6 mm×250 mm;5 μm);mobile phase was 0.025 mol/L potassium dihydrogen phosphate(pH=3.0)∶acetonitrile(60∶40);the detection wavelength was 240 nm;the column temperature was 30℃;and the injection volume was 10 μl.ResultsSalicylic acidhad a good linear correlation with the peak area within the range of 1.068 μg to 10.68 μg,and the regression equation wasY=1887X+325.74(r=0.9997).Dexamethasone acetatehad a good linear correlation with the peak area within the range of 0.0202 μg to 0.2018 μg,and the regression equation wasY=2055.4X+0.1304(r=1).The average sample recovery rates of salicylic acid and dexamethasone acetate were 100.91%(RSD= 0.38%)and 101.67%(RSD=0.94%),respectively.ConclusionHPLC methodhas the advantages of easy operation and accurate quantitation,which is suitable for the simultaneous content determination of salicylic acid and dexamethasone acetate in compound Kangfu liniment.

HPLC;compound Kangfu liniment;salicylic acid;dexamethasone acetate;content determination

R 927.2

A

1004-0188（2016）01-0014-04

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.01.005

610017成都，成都軍區(qū)藥品儀器檢驗(yàn)所

復(fù)方康膚搽劑為醫(yī)院非標(biāo)準(zhǔn)制劑，主要由醋酸地塞米松和水楊酸組成，制備工藝簡單，臨床用于治療銀屑病、神經(jīng)性皮炎及結(jié)節(jié)性癢癥等。《中國人民解放軍非標(biāo)準(zhǔn)制劑標(biāo)準(zhǔn)》主要是利用高效液相色譜法測定醋酸地塞米松含量，并未對水楊酸含量做具體要求。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，醋酸地塞米松和水楊酸含量測定方法主要有高效液相色譜法、紫外分光光度法[1-5]。筆者對復(fù)方康膚搽劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了初步研究，采用HPLC法同時(shí)測定該制劑中醋酸地塞米松和水楊酸含量，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步修訂提供參考。

（2015-01-07）