大血藤對慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及子宮病理組織形態學的影響*

劉　清，鄧　翀，黃淑鳳，孟建國，衛　昊陜西中醫藥大學，陜西　咸陽712046

大血藤對慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6、TNF-α及子宮病理組織形態學的影響*

劉清，鄧翀△，黃淑鳳，孟建國，衛昊
陜西中醫藥大學，陜西咸陽712046

目的：探討大血藤對慢性盆腔炎模型大鼠血清IL-6和TNF-α及子宮病理形態學的影響。方法：采用苯酚膠漿法建立大鼠慢性盆腔炎模型，以血清中IL-6和TNF-α含量、子宮腫脹程度及病理組織形態學評價為考察指標，考察大血藤對盆腔炎大鼠的影響。結果：與模型組比較，大血藤各劑量組大鼠血清中IL-6、TNF-α含量均不同程度降低，子宮內膜病理組織形態學較模型組顯著改善，子宮腫脹呈現減輕趨勢。結論：大血藤通過抑制炎癥相關反應，發揮對盆腔炎的治療作用。

慢性盆腔炎；IL-6；TNF-α；病理組織形態學；大血藤

大血藤為木通科植物大血藤Sargentodoxa cuneata(Ol iv.)Rehd.et Wi ls.的干燥藤莖。具有清熱解毒、活血、祛風之功效。用于腸癰腹痛，經閉痛經，風濕痹痛，跌撲腫痛［1］。近代研究發現［2-4］，大血藤常以復方(如紅藤湯、紅藤敗醬湯等)煎劑內服或灌腸等應用于盆腔炎等的治療［2-4］。本研究按照中醫血瘀證思路建立慢性盆腔炎模型，以大鼠血清中IL-6和TNF-α含量變化及子宮宮腔組織形態學變化等為指標研究大血藤單味藥對慢性盆腔炎模型的作用。

1　材料與方法

1.1藥物大血藤購于西安市萬壽路藥材市場，經陜西中醫藥大學高級實驗師王繼濤鑒定為木通科植物大血藤的藤莖。稱取大血藤藥材飲片1 kg，10倍量水提取3次，2 h/次，濃縮干燥，粉碎稱重，收膏率為19.325%，臨用時用0.5%CMC-Na配制成混懸液。婦科千金片(株洲千金藥業股份有限公司，批號：201011046)。

1.2動物雌性SD大鼠7 2只，體質量(2 0 0±2 0)g，由西安交通大學醫學實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK(陜)2007-001。

1.3試劑PGI 2試劑盒(批號LOT：201 11 00 2B)；TXA2試劑盒(批號LOT：20111002B)；IL-6試劑盒(批號LOT：20111002B)；TNF-α(批號LOT：20111002B)，均購于長春江力生物技術有限公司。

1.4儀器BT 2 2 4 S型電子天平(賽多利斯科學儀器北京有限公司)；ELX808-IU型酶聯免疫檢測儀(美國Bio Tek儀器公司)。

1.5方法

1.5.1苯酚膠漿的配制量取液化苯酚5 m L，西黃芪膠1 g，甘油4mL，加蒸餾水至20mL，配制成25%的苯酚膠漿。

1.5.2方法［5］取雌性大鼠7 2只，隨機抽取1 2只作為假手術組。所有大鼠采用10%烏拉坦(0.01 mL/g)腹腔注射麻醉后固定，下腹部手術部位被毛并常規消毒，沿腹中線于尿道口上方1 cm處向上切口約0.8～1.0 cm，暴露左側子宮，假手術組不做任何處理，關腹，其余各組于距離卵巢2 cm處用帶有倒刺的5號針頭以相同力量機械劃傷子宮5次后，向卵巢方向緩慢注入苯酚膠漿0.05mL，另一側子宮不注射作為自身對照。分層縫合關閉腹腔，恢復飲水，正常清潔飼養。造模10天后將模型動物隨機分為5組各12只：模型組、大血藤大劑量組(8 g生藥/kg)、中劑量組(4 g生藥/kg)、小劑量組(2g生藥/kg)和婦科千金片組(1.13g/kg)。按10mL/(kg·d)藥量灌胃，假手術組和模型組給予等量純凈水，連續灌胃給藥21天。于處理前1天將動物禁食不禁水12小時，動物按上述方法麻醉后，負壓管(抗凝管與促凝管)腹主動脈各取血3～4mL，3 000轉離心10分鐘分離血漿、血清后置-80℃冰箱保存待測。摘取雙側子宮，除去脂肪組織后用分析天平稱重記錄，子宮左右兩側的重量差即為炎癥腫脹程度，計算腫脹率和抑制率。子宮放入10%甲醛固定，HE染色顯微鏡下觀察大鼠子宮組織形態學變化。按照試劑盒說明書操作，采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定血清中TNF-α、IL-6的濃度。

1.6統計學方法數據采用SPSS 2 0.0軟件統計分析，計量資料以(±s)表示，采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

2.1 對模型大鼠子宮腫脹程度的影響與假手術組比較，模型組子宮腫脹度和腫脹率增加，差異有統計學意義(P＜0.01)，說明盆腔炎模型成功。大血藤各劑量組均有減輕子宮腫脹的趨勢，其中大血藤高、中、低劑量組子宮腫脹度及腫脹率與模型組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.2對模型大鼠血清IL-6和TNF-α的影響模型組與假手術組比較，苯酚膠漿注射子宮31天后大鼠血清中IL-6、TNF-α均上升，其差異有統計學意義(P＜0.01)，表明盆腔炎模型造模成功。治療21天后與模型組比較，大血藤各劑量組及婦科千金片組大鼠血清中IL-6含量均不同程度降低。大血藤高、中劑量組IL-6含量接近假手術組，與模型組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。與模型組比較，婦科千金片組、大血藤各劑量組大鼠血清中TNF-α含量均降低，大血藤高、中劑量組與模型組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表1　大血藤對苯酚膠漿致慢性盆腔炎模型大鼠子宮腫脹程度的影響?χ±s）

表2　大血藤對苯酚膠漿致慢性盆腔炎模型I L-6和TNF-α的影響?±s）

2.3各組大鼠子宮宮腔組織的病理形態學變化［6-7］肉眼觀察模型組，可見子宮組織與腹腔其他組織粘連，部分宮腔變窄、組織積液，毛細血管變粗，充血嚴重。其他各組粘連較少，子宮形態正常。子宮組織HE染色后，光鏡觀察，假手術組子宮內膜腔壁結構清晰，無充血水腫與壞死脫落，偶見輕度增生，肌纖維紋理清晰可見。模型組子宮內膜腔壁結構改變，內膜充血水腫，肌層與豁膜肌層結構紊亂；有大量或層狀性炎性細胞浸潤，纖維組織增生；上皮細胞變性壞死，腺體萎縮變形。提示苯酚膠漿致慢性盆腔炎模型成功。大血藤各劑量組內膜組織結構基本恢復正常排序，上皮輕度增生、增厚，肌層、漿膜完整界清；炎性細胞浸潤明顯減輕，內膜無明顯充血水腫；大部分腺體恢復。表明大血藤能夠有效改善慢性盆腔炎大鼠子宮內膜組織形態學的病理狀態，見附圖1。

3　討論

苯酚膠漿注入大鼠子宮制造慢性盆腔炎模型，造成大鼠子宮內膜充血、水腫、炎癥滲出，粘連。病理檢查顯示，模型動物的子宮發生了充血、炎癥浸潤、黏膜層水腫、腺體破壞減少等變化，說明模型成功。

細胞因子IL-6是單核細胞和血管內皮細胞產生的重要炎癥介質之一，IL-6主要誘導炎癥反應，能促進淋巴細胞分化，催化和放大炎癥性反應和毒性作用，造成組織細胞的損害，其雖無疾病的特異性，但能直接反映各種類型損害的嚴重程度，IL-6的過量產生會導致劇烈的免疫反應，對機體造成損害［8-9］。TNF-α是誘導天然免疫和特異性免疫的重要介質，又是特異性免疫和炎癥反應間聯系的重要因子，并由激活的巨噬細胞產生［10］。TNF-α過度表達可誘發炎性反應。實驗研究發現，與假手術組比較，模型組大鼠血清中IL-6、TNF-α濃度均升高，初步證實大血藤可通過降低血清IL-6、TNF-α水平，抑制炎癥介質和炎癥因子的表達，調節機體免疫功能，為治療慢性盆腔炎免疫機制之一，而更多的免疫調控環節有待進一步探究。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：19.

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［4］ 賈先紅.紅藤敗醬湯治療慢性盆腔炎52例療效觀察［J］.山西中醫，2007，23（3）：19-20.

［5］ 聞莉，張三元，李莉，等.大鼠慢性盆腔炎模型的技術要求及模型特點［J］.浙江中西醫結合雜志，2001，11（8）：484-486.

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［10］程違.免疫生理學［M］.上海：上海科學技術出版社，1993：11.

In fluence of DaXueTeng on PathologicalM orphology，IL-6 and TNF-α of the Ratsw ith Chronic Pelvic In flamm atory D isease

LIU Qing，DENG Chong△，HUANG Shufeng，MENG Jianguo，WEIHao
ShaanxiUniversity of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China

Objective：To discuss the influence of DaXueTeng［Sargentodoxa cuneata（Oliv.）Rehd.etWils.］on uterine pathomorphology，the levels of IL-6 and TNF-αof the rats w ith chronic pelvic inflammatory disease （PID）.Methods：Ratmodel w ith chronic PID was established by adopting phenol method，and the effects of DaXueTeng on the ratsw ith PID were surveyed by observing the indexes of the contents of IL-6 and TNF-α，uterine swelling degrees and pathomorphology.Results：Compared w ith themodel group，the contents of IL-6 and TNF-α decreased in different degrees in the rats of different doses groups of DaXueTeng，pathologicalmorphology of endometria improved compared w ith themodel group，uterine swelling relieved.Conclusion：DaXueTeng could treat PID by inhibiting inflammation-related reactions.

chronic pelvic inflammatory disease；IL-6；TNF-α；pathomorphology；DaXueTeng

附圖1　各組盆腔炎模型大鼠HE染色子宮的病理變化（4 0 0×）

R711.33

A

1004-6852（2016）07-0011-04

2015-06-23

陜西省教育廳專項科研計劃項目（編號09JK389）。

劉清（1982—），女，碩士學位，實驗師。研究方向：中藥抗炎與免疫調節研究。

鄧翀（1978—），男，博士學位，副教授。研究方向：中藥炮制化學及中藥炮制原理研究。