不同菌型幽門螺桿菌感染消化性潰瘍血清中T細胞亞群的變化及臨床意義

鄧丹，李遠發，陳瑞紅，馮慶，彭為

(仙桃市第一人民醫院消化內科，湖北 仙桃　433000)

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不同菌型幽門螺桿菌感染消化性潰瘍血清中T細胞亞群的變化及臨床意義

鄧丹，李遠發，陳瑞紅，馮慶，彭為

(仙桃市第一人民醫院消化內科，湖北 仙桃433000)

目的檢測不同菌型幽門螺桿菌(Hp)感染消化性潰瘍(PU)患者血清中T細胞亞群的變化以及白細胞介素-17(IL-17)、轉化生長因子-β(TGF-β)的表達。方法按照隨機數字表法選擇經胃鏡檢查確診的PU患者共88例，同期納入30例健康體檢者作為對照組；檢測Hp感染狀況并分型，檢測所有研究對象外周血T 淋巴細胞亞群活性、IL-17、TGF-β含量。結果Hp陽性組患者CD4+和IL-17水平明顯高于Hp陰性組，而TGF-β水平明顯低于Hp陰性組(P<0.01)；Ⅱ型Hp組患者CD4+和IL-17水平明顯低于Ⅰ型Hp組，TGF-β水平明顯高于Ⅰ型Hp組(P<0.01)；在Ⅰ型Hp感染組，十二指腸球部潰瘍(DU)患者的CD4+和IL-17表達水平明顯高于胃潰瘍(GU)患者，而TGF-β水平明顯低于GU患者(P<0.01)；在Ⅱ型Hp組，CD4+、IL-17和TGF-β水平在DU與GU間的表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。結論血清CD4+T細胞增高及其細胞因子IL-17和TGF-β的表達異?？赡茉贖p感染PU中發揮了重要調節作用。

消化性潰瘍;幽門螺桿菌;T淋巴細胞亞群;因果律

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染是多種消化系統疾病誘發因素[1-2]，不同類型的Hp在消化性潰瘍(PU)過程中直接破壞胃黏膜的致病力是不一樣的。輔助性T細胞17(Th17)與調節性T細胞(Treg)均屬CD4+T細胞亞群，在功能上相互制約，其比例失衡在Hp感染PU發病中起到重要調節作用[5]。而對不同菌型Hp感染PU患血清中T細胞亞群狀況尚未見報道；本研究探討了不同菌型Hp感染PU患者血清中T細胞亞群及其細胞因子的變化。

1　資料與方法

1.1臨床資料按照隨機數字表法選擇仙桃市第一人民醫院消化內科門診及住院2011年3月至2013年2月間收治PU患者共88例；其中Hp陽性的患者62例，十二指腸球部潰瘍(DU)36例，胃潰瘍(GU)276例，Hp陰性者26例；根據Hp陽性分為三組。Hp陰性組(26例)：男性17例，女性9例；年齡25～59歲，平均(39.17±4.22)歲；Ⅰ型Hp感染組(40例)：男性27例，女性13例；年齡26～62歲，平均(40.28±4.18)歲；DU為22例，GU為18例；Ⅱ型Hp感染組(22例)：男性15例，女性7例；年齡26～60歲，平均(39.77±4.30)歲；DU為14例，GU為8例；同期納入30位健康體檢者作為對照組(Hp陰性)，其中男性19例，女性11例；年齡27～60歲，平均(40.05±5.49)歲；各組在性別、年齡臨床資料方面比較差異無統計學意義，具有可比性。

1.2診斷標準消化性潰瘍：參照《消化性潰瘍病診斷與治療規范》[6]標準； Hp 感染診斷標準[7]：采用14C或13C標記尿素呼氣試驗進行檢測。Ⅰ型和Ⅱ型Hp感染診斷：采取血清HpCagA、VacA、UreB以及UreA基因抗體法檢測，CagA、VacA帶中任一者或兩者同時陽性為Ⅰ型，未見CagA、VacA帶陽性而僅UreB和UreA區帶中任意一者或兩者同時陽性為Ⅱ型。

1.3納入與排除標準納入標準：(1)本研究經本院倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情協議書；(2)符合以上相關診斷標準；(3)所有患者3個月未接受過任何治療；(4)所有研究對象經血常規、心電圖、生化、影像學、彩超等檢查排除其他疾病及腫瘤；(5)年齡18～65歲。排除標準：(1)妊娠或哺乳其女性；(2)正參與其他臨床試驗者；(3)其他不符合上述納入標準中任何一條者。

1.4檢測指標

1.4.1血清T細胞亞群和NK細胞檢測檢測指標包括CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56+，均經相應抗體免疫熒光染色后，在流式細胞儀(Counter 型，美國BD公司)上進行檢測，試劑均購于美國SD公司。

1.4.2血清白細胞介素(IL)-17、轉化生長因子(TGF)-β含量檢測采取Elisa法檢測，試劑盒由上海賣約爾生物科技有限公司提供。

2　結果

2.1各組血清T細胞亞群比較Ⅰ型Hp組和Ⅱ型Hp組患者CD4+水平明顯高于對照組和Hp陰性組，Ⅱ型Hp組患者CD4+水平明顯低于Ⅰ型Hp組，差異均有統計學意義(P<0.01)；其他指標各組比較差異無統計學意義(P>0.05)，具體見表1。

2.2Hp感染十二指腸球部潰瘍與胃潰瘍患者血清CD4+水平比較Ⅰ型Hp感染患者，CD4+在十二指腸球部潰瘍的表達水平明顯高于胃潰瘍(P<0.01)；在Ⅱ型Hp感染者，則差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2　Hp感染十二指腸球部潰瘍與胃潰瘍患者血清CD4+水平比較

注：與本組十二指腸球部潰瘍比較aP<0.01。

2.3各組血清IL-17和TGF-β水平比較Ⅰ型Hp組和Ⅱ型Hp組患者血清IL-17水平明顯高于Hp陰性組，血清TGF-β水平明顯低于Hp陰性組(P<0.01)；Ⅱ型Hp組患者血清IL-17水平明顯低于Ⅰ型Hp組，血清TGF-β水平明顯高于Ⅰ型Hp組，(均P<0.01),見表3。

表3　各組血清IL-17和TGF-β水平比較

注：與Hp陰性組比較aP<0.01；與Ⅱ型Hp組比較bP<0.01。

2.4Hp感染十二指腸球部潰瘍與胃潰瘍患者血清IL-17和TGF-β水平比較在Ⅰ型Hp組，十二指腸球部潰瘍患者血清IL-17水平明顯高于胃潰瘍，TGF-β水平明顯低于胃潰瘍(P<0.01)；在Ⅱ型Hp組，血清IL-17和TGF-β水平在十二指腸球部潰瘍組與胃潰瘍組比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

表1　各組血清T細胞亞群和NK細胞比較±s

注：與對照組比較aP<0.01；與Hp陰性組比較bP<0.01；與Ⅱ型Hp組比較cP<0.01。

表4　Hp感染十二指腸球部潰瘍與胃潰瘍患者血清IL-17和TGF-β水平比較

注：與本組胃潰瘍比較aP<0.01。

3　討論

近年，Hp感染PU的免疫學發病機制取得較大進展，Hp感染胃腸道上皮細胞后可進行抗原提呈細胞，介導細胞免疫反應，其中以CD4+T淋巴細胞免疫反應為主[5]。在PU發生發展過程中，不同菌型Hp感染介導了不同途徑，發揮了不同的致病作用[8-9]。

本研究結果顯示：Hp陽性患者CD4+水平明顯高于對照組和Hp陰性組，與以往研究報道基本一致[10]。此外，本研究進一步發現，Ⅰ型Hp組患者的CD4+水平明顯高于Ⅱ型Hp組，且對于Ⅰ型Hp感染患者十二指腸球部潰瘍的CD4+表達水平明顯高于胃潰瘍(P<0.01)；而在Ⅱ型Hp感染者，CD4+在十二指腸球部潰瘍的表達水平與胃潰瘍比較差異無統計學意義(P>0.05)。以上結果提示：CD4+增加參與Ⅰ型和Ⅱ型Hp導致潰瘍的機制，且在Ⅰ型HP感染中以及十二指腸潰瘍球部潰瘍中表現更為突出，這可能與它們產生毒素不一致有關。

CD4+T細胞家族由輔助性T 細胞和調節性T 細胞等亞群組成，其亞型Th17和Treg細胞可分泌多種細胞因子，其中Th17可產生IL-17等促炎性反應因子，IL-17作為一種促炎性細胞因子，能夠誘導成纖維細胞、內皮細胞、角質細胞分泌IL-6、PGE2、金屬蛋白酶-1等，從而發揮其黏膜破壞作用[11]。Treg可分泌TGF-β等抑炎性因子，可在誘導人體自身免疫耐受、維持機體免疫穩態等方面發揮重要作用[12]。當CD4+T細胞亞群比例失衡及其相關促炎和抗炎因子表達異常時能夠引起胃黏膜炎癥損傷，進而誘發PU。以往研究證實，Hp感染PU患者體內Th17細胞和其細胞因子IL-17 明顯升高，而Treg細胞和TGF-β明顯降低[4]。

本組結果顯示：Ⅰ型Hp組和Ⅱ型Hp組患者血清IL-17水平明顯高于Hp陰性組，血清TGF-β水平明顯低于Hp陰性組(P<0.01)，與以往報道結果近似[5]。Ⅱ型Hp組患者血清IL-17水平明顯低于Ⅰ型Hp組，血清TGF-β水平明顯高于Ⅰ型Hp組，差異均有統計學意義(P<0.01)。在Ⅰ型Hp組，十二指腸球部潰瘍患者血清IL-17水平明顯高于胃潰瘍，TGF-β水平明顯低于胃潰瘍(P<0.01)；在Ⅱ型Hp組，血清IL-17和TGF-β水平在十二指腸球部潰瘍組與胃潰瘍組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

以往研究證實，Hp感染者血清IL-17水平明顯高于健康者，而DU患者血清IL-17表達受CagA影響[13]，本研究結果與上述文獻報道結果相似。結合以往研究表明，不同菌型Hp感染通過誘導IL-17和TGF-β間的比例失衡，從而導致PU發生。因此，以上結果進一步提示CD4+參與Ⅰ型和Ⅱ型HP導致潰瘍的機制，同樣在Ⅰ型HP感染中以十二指腸潰瘍球部潰瘍更為明顯。

[1]Greenberg ER,Chey WD.Defining the role of sequential therapy for H pylori infection[J].Lancet,2013,381(9862):180-182.

[2]楊宗澄,李思捷.幽門螺桿菌在胃癌發病機制中的作用研究[J].安徽醫藥,2014,18(8):1584-1585.

[3]Sezen OS,Kubilay U,Erzin Y,et al.Does tonsillectomy affect the outcome of drug treatment for the eradication of gastric H pylori infection? A pilot study[J].Ear Nose Throat J,2013,92(3):127-132.

[4]Targosz A,Brzozowski T,Pierzchalski P,et al.Helicobacter pylori promotes apoptosis,activates cyclooxygenase (COX)-2 and inhibits heat shock protein HSP70 in gastric cancer epithelial cells[J].Inflamm Res,2012,61(9):955-966.

[5]吳德明,吳治德,劉怡菲.幽門螺桿菌相關的消化性潰瘍患者中Th17/Treg細胞及其細胞因子的表達水平及意義[J].臨床薈萃,2014,29(7):790-791.

[6]中華消化雜志編委會.消化性潰瘍病診斷與治療規范(2013年,深圳)[J].中華消化雜志,2014,34(2):73-76.

[7]陳灝珠.實用內科學[M].12版.北京:人民衛生出版社,2005:1866.

[8]游海梅,胡團敏.IL-10、TNF-α在不同菌型幽門螺桿菌感染消化性潰瘍中的表達[J].世界華人消化雜志,2014,22(5):742-746.

[9]Alimadadi M,Seyyedmajidi M,Amirkhanlou S,et al.Impact of creatinine clearance on Helicobacter Pylori eradication rate in patients with peptic ulcer disease[J].Iran J Kidney Dis,2015,9(6):427-432.

[10] Kido M,Watanabe N,Aoki N,et al.Dual roles of CagA protein in Helicobacterpylori-induced chronic gastritis in mice[J].Biochem Biophys Res Commun,2011,412(2):266-272.

[11] Talaat RM,Mohamed SF,Bassyouni IH,et al.Th1/Th2/Th17/Treg cytokine imbalance in systemic lupus erythematosus (SLE) patients:Correlation with disease activity[J].Cytokine,2015,72(2):146-153.

[12] Bellemore SM,Nikoopour E,Schwartz JA,et al.Preventative role of interleukin-17 producing regulatory T helper type 17 (Treg 17) cells in type 1 diabetes in non-obese diabetic mice[J].Clin Exp Immunol,2015,182(3):261-269.

[13] 孫瑜.十二指腸球部潰瘍患者幽門螺桿菌CagA與血清IL-17及IL-23的關系[J].中國全科醫學,2010,13(11):1158-1159.

Changes and Clinical significance of T cell subset in serum of peptic ulcer patients with infection of different types of bacteria Helicobacter Pylori

DENG Dan,LI Yuanfa,CHEN Ruihong,et al

(DepartmentofGastroenterology,FirstRenminHospital,Xiantao,Hubei433000,China)

ObjectiveTo investigate changes of T cell subset in serum of peptic ulcer(PU) patients with infection of different types of bacteria helicobacter pylori(Hp) and expressions of interleukin(IL)-17 and transforming growth factors(TGF)-β.MethodsEighty-eight patients with PU confirmed by gastroscope examination were chosen ifor the study,and at the same time 30 healthy examined people as control group.Types of Hp infection were detected.Peripheral blood T lymphocyte subsets and NK cells activities were detected by flow cytometer in all cases.Levels of IL-17 and TGF-β were detected by Elisa method.ResultsCD4+and IL-17 in Hp positive group were obviously higher,while TGF-β was evidently lower than Hp negative group(P<0.01).CD4+and IL-17 in Hp typeⅡgroup were obviously lower,while TGF-β was evidently higher than HpⅠgroup (P<0.01).In Hp typeⅠgroup,CD4+and IL-17 of duodenal ulcer(DU) patients were obviously higher,while TGF-β was evidently lower than gastric ulcer(GU) patients(P<0.05).In Hp typeⅡgroup,CD4+,IL-17 and TGF-β in DU and GU were not significantly different(P>0.05).ConclusionsIncrease in serum CD4+T cell and abnormal expressions of IL-17 and TGF-β may play an important regulating role in PU patients with Hp infection.

Peptic ulcer;Helicobacter pylori;T-lymphocyte subsets;Causality

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.032

2015-09-18，

2016-01-20)