非小細胞肺癌組織中Snail、E-cadherin及N-cadherin的表達及臨床意義

俞婷婷, 劉　莉, 王若崢

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院, 1. 肺內科; 2. 頭頸放射治療科, 新疆 烏魯木齊, 830011)

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非小細胞肺癌組織中Snail、E-cadherin及N-cadherin的表達及臨床意義

俞婷婷1, 劉莉1, 王若崢2

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院, 1. 肺內科; 2. 頭頸放射治療科, 新疆 烏魯木齊, 830011)

目的探討指轉錄因子Snail、上皮細胞鈣粘蛋白(E-cadherin)及神經鈣黏素(N-cadherin)在非小細胞肺癌組織中的表達及其之間的相關性。方法采用免疫組化法檢測63例非小細胞肺癌(NSCLC)手術切除標本及30例癌旁組織中Snail、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表達，并分析相互間關系及其臨床意義。結果 與癌旁組織比較, NSCLC組織中E-cadherin表達顯著減少, N-cadherin和Snail表達明顯增加(P<0.01)。NSCLC組織中, Snail的表達與N-cadherin呈明顯的正相關(P<0.05,r=0.33), 與E-cadherin呈顯著負相關(P<0.05,r=-0.41), N-cadherinl的表達與E-cadheri也呈明顯負相關(P<0.05,r=-0.56)。Snail表達陽性率與TNM分期和有無轉移相關(P<0.05); E-cadherin表達陽性率與TNM分期和有無轉移相關(P<0.05); N-cadherin表達陽性率與組織學分型、TNM分期和有無轉移相關(P<0.05)。結論NSCLC癌組織中Snail、E-cadherin和N-cadherin表達水平與腫瘤的浸潤轉移密切相關，可作為臨床診斷和治療靶點的參考指標。

非小細胞肺癌; 鋅指轉錄因子; 上皮細胞鈣粘蛋白; 神經鈣黏素; 免疫

在中國，原發性肺癌是常見的惡性腫瘤，早期診斷困難和轉移率高導致其在發病率和死亡率居惡性腫瘤的首位，其中非小細胞肺癌(NSCLC)約占85%[1]。腫瘤的侵襲和轉移是造成NSCLC患者預后不良的重要原因。近年來，有研究[2-4]發現, EMT與多種上皮源性惡性腫瘤的侵襲轉移過程密切相關，即上皮細胞鈣黏蛋白(E-cadherin)表達下調的同時伴有神經鈣黏素(N-cadherin)表達的增高，即引發腫瘤細胞的侵襲和轉移。本研究通過檢測NSCLC患者Snail、E-cadherin及N-cadherin的表達，探討相互之間的關聯性及與臨床病理因素的關系。

1　資料和方法

1.1一般資料

選取2015年1月―2016年3月新疆醫科大學附屬腫瘤醫院收治的NSCLC患者63例，所有入組患者排除接受放療或化療治療。取63例患者的手術切除標本為實驗組，同時取癌旁組織標本30例為對照組(經病理檢驗均無癌細胞浸潤)。63例患者中男38例，女25例；患者年齡42～68歲，中位年齡52歲；腺癌29例，鱗癌34例；根據肺癌TNM臨床分期Ⅰ期14例, Ⅱ16例, Ⅲ期20例, Ⅳ13例; 有淋巴結轉移例36例，無淋巴結轉移27例。所有患者均知情同意，且本研究經倫理委員會批準。

1.2試劑和方法

1.2.1試劑：兔抗人Snail多克隆抗體、兔抗人E-cadherin多克隆抗體及兔抗人N-cadherin多克隆抗體(Abcam公司)，正常羊血清，DAB顯色試劑盒，蘇木素等。

1.2.2檢測方法: 4 μm石蠟切片放在(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APES)1∶50丙酮溶液中浸泡3 min, 晾干，將切片置于二甲苯中浸泡10 min, 2次。再入100%、95%、90%、80%、70%等各級酒精溶液中各3～5 min, 再放入蒸餾水中水化3 min。將切片進行抗原修復(標本置于煮沸的檸檬酸鈉緩沖液中浸泡30 min); 消除標本內源性過氧化物酶活性(于3%的H2O2溶液中浸泡15 min); 5%正常羊血清封閉90 min, 滴加一抗(陰性對照以PBS緩沖液代替一抗)在4℃孵育過夜。二抗及DAB顯色按照試劑盒說明書使用，蘇木素復染后將標本進行脫水最后封片。

1.3檢測結果判定

結果根據免疫染色陽性率及其強度判斷：在顯微鏡下觀察，以細胞染色呈棕黃色為陽性，未著色則為陰性[5]。根據染色深淺強度計分：陰性為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，沈棕色且無背景著色為3分。按陽性細胞百分比評分：1%～10%為1分，10%～50%為2分，50%～80%為3分；80%以上為4分。然后將陽性細胞與染色強弱的乘積計積分，≥4分為陽性。

1.4統計學方法

數據采用SPSS 17.0軟件分析處理。計量資料采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，采用Spearman等級相關分析檢測Snail、E-cadherin和N-cadherin表達的相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　果

2.1Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白在NSCLC組織中的表達

63例NSCLC患者組織中，Snail與N-cadherin的蛋白表達主要位于細胞核，而E-cadherin的蛋白表達主要位于細胞膜。Snail與N-cadherin表達陽性率顯著高于對照癌旁組織，而E-cadherin的蛋白表達陽性率顯著低于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

2.2Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表達的相關性

采用Person相關性分析顯示Snail的表達與N-cadherin呈顯著正相關(P<0.05,r=0.33)，與E-cadherin呈負相關(P<0.05,r=-0.41)，N-cadherin的表達與E-cadherin的表達呈負相關(P<0.05,r=-0.56)。

表1　Snail、E-cadherin和N-cadherin的表達情況[n(%)]

與癌旁組織比較, **P<0.01。

2.3Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表達與臨床病理的關系

63例肺癌患者的臨床資料包括年齡、性別、病理類型、組織學分級、淋巴結轉移和臨床分期見表2。分析顯示, Snail在Ⅲ、Ⅳ期病例中陽性率38.10%(24/63), 明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期的17.46%(11/63)(P<0.05); 有轉移陽性率34.92%(22/63), 明顯高于無轉移病例20.63%(13/63)(P<0.05); E-cadherin在Ⅰ、Ⅱ期病例中陽性表達率33.33%(21/63), 高于Ⅲ、Ⅳ期病例的15.87%(10/63)(P<0.05), 有轉移E-cadherin陽性率3.17%(2/63), 顯著低于無轉移的22.22%(14/63)(P<0.05), E-cadherin的表達與組織學分型、臨床分期無相關性。N-cadherin表達陽性率在腺癌中為36.51%(23/63), 明顯高于鱗癌的11.11%(7/63) (P<0.05); Ⅲ、Ⅳ期病例中陽性率39.68%(25/63), 明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期的7.94(5/63)(P<0.05); 有轉移陽性率34.92%(22/63), 明顯高于無轉移病例12.70%(8/63)(P<0.05); 三者與性別年齡均無相關性。

表2　肺癌組織Snail、E-cadherin及N-cadherin蛋白表達與臨床病理的關系(n)

3　討　論

浸潤和轉移是腫瘤細胞獨有的生物學特性，這一特性的前提是腫瘤細胞需克服細胞間的黏連[6]。EMT使上皮細胞喪失極性，從上皮組織分離或脫落至其他位置，這是包括NSCLC在內的多種腫瘤細胞獲得侵襲轉移能力的重要機制[7]。隨著分子生物學的研究和發展，影響腫瘤細胞侵襲和轉移的細胞黏附分子已成為近年來研究的重點和熱點。

鈣黏附素家族是一組存在于細胞膜上的介導同種細胞間相互黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，其表達量的變化直接與腫瘤的侵襲和轉移密切相關[8]。E-cadherin是鈣黏蛋白家族中第一個被發現的成員，一類依賴鈣離子的細胞間黏連跨膜糖蛋白分子，主要表達于細胞膜，其表達量下調與EMT過程密切相關。與正常組織相比，常見人類腫瘤細胞的E-cadherin表達下調或喪失，影響細胞間的黏連[9]。N-cadherin作為鈣黏附素家族另一個重要成員，其表達能直接介導腫瘤細胞由上皮向間葉轉化，加強腫瘤的侵襲作用，影響腫瘤細胞的擴散[10-11]。N-cadherin在腫瘤組織中也呈膜表達。Khan等[12]研究發現，腫瘤細胞從良性到惡性轉化的過程中N-cadherin表達逐漸增強，可見N-cadherin表達與細胞的惡性進程及侵襲轉移能力有關。鋅指轉錄因子Snail為EMT強誘導子, De Craene等[13]研究發現，腫瘤細胞Snail蛋白表達可影響腫瘤EMT，促進腫瘤細胞間質浸潤和轉移。

本研究結果顯示NSCLC組織中E-cadherin的蛋白表達陽性率顯著低于癌旁組織，其陽性率與TNM分期和有無轉移有關(P<0.05)；提示其表達下調，細胞間黏附力減弱，增加了腫瘤細胞轉移的能力，在NSCLC進程中起到一定的作用。而N-cadherin蛋白的表達陽性率顯著高于癌旁組織，與組織學分型、TNM分期和有無轉移有關(P<0.05)，腺癌中N-cadherin陽性表達率明顯高于鱗癌，此發生機制還需加大樣本量完善研究；且與E-cadherin的表達呈負相關，提示N-cadherin表達的增加對腫瘤的侵襲和轉移有促進作用，抑制N-cadherin的表達可以作為腫瘤治療的新靶點。同時, NSCLC組織中Snail表達也顯著增高, Snail表達陽性率與TNM分期和有無轉移有關

(P<0.05)，與N-cadherin呈明顯的正相關，與E-cadherin呈負相關，提示Snail高表達可能對E-cadherin的表達有抑制作用。

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Expression of Snail，E-cadherin and N-cadherin in tissues of non-small cell lung cancer and its clinical significance

YU Tingting1，LIU Li1，WANG Ruozheng2

(1.DepartmentofPulmonaryDisease; 2.DepartmentofHeadandNeckRadiotherapy,CancerHospitalAffiliatedtoXinjiangMedicalHospital,Urumchi,Xinjiang, 830011)

ObjectiveTo explore the expression of Snail, epithelial-cadherin (E-cadherin) and nerve-cadherin (N-cadherin) in the tissues of non-small cell lung cancer (NSCLC) and their relationships. MethodsImmunohistochemical method was used to detect the levels of Snail, E-cadherin and N-cadherin protein expression in surgically resection tissue samples from 63 patients with NSCLC and para-cancerous tissues was obtained from 30 patients, and the relationships among them and their clinical significance were analyzed. ResultsCompared with para-cancerous tissues, NSCLC tissues had evidently decreased E-cadherin expression and notably increased expression of N-cadherin and Snail (P<0.01). In NSCLC tissues, the expression of Snail was in positive association with that of N-cadherin (P<0.05,r=0.33) and in negative connection with that of E-cadherin (P<0.05,r=-0.41), whereas expression of N-cadherinl was negatively related with that of E-cadheri (P<0.05,r=-0.56). The positive expression rates of Snail and E-cadherin were in close association with TNM staging and whether there was metastasis (P<0.05), whereas that of N-cadherin had close association with histological classification, TNM staging and whether there was metastasis (P<0.05). ConclusionThe expression levels of Snail, E-cadherin and N-cadherin in NSCLC cancerous tissues are associated with tumor infiltration and metastasis, so they can be used as reference indexes for the clinical diagnosis and therapeutic targets.

non-small cell lung cancer; Snail; epithelial-cadherin; nerve-cadherin; immunity

2016-05-13

中國高校醫學期刊臨床專項資金(11522488)

王若崢, E-mail: 38804632@qq.com

R 734.2

A

1672-2353(2016)17-029-03

10.7619/jcmp.201617009