正交試驗優選清寧丸的提取工藝

劉麗花　翟來超

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【實驗研究】

正交試驗優選清寧丸的提取工藝

劉麗花翟來超

目的優選清寧丸的提取工藝。方法采用正交試驗對提取工藝進行優選，以大黃素、大黃酚和干膏量為指標考察加水量、提取次數、加水倍數對提取工藝的影響，最終確定最佳水提工藝。結果最佳提取工藝為加10倍量水，提取30min，提取2次。結論為提取工藝的確定和下一步的研制工作提供了科學依據。

清寧丸；正交試驗；提取工藝

本制劑為《中國藥典》2010年版第一部收載至品種。由大黃、綠豆、車前草、炒白術、黑豆、半夏(制)等組成，諸藥相伍，清熱瀉火，通便。用于火毒內蘊所致的咽喉腫痛，口舌生瘡，頭暈耳鳴，目赤牙痛，腹中脹滿，大便秘結[1]。

1　試驗材料與儀器

1.1儀器日本島津LC-2010CHT高效液相色譜儀；SPD-M10AVP二極管陣列檢測器、CTO-10ASVP柱溫箱，Shimadzu CLASS-VP色譜工作站，Sartorius CP225D分析天平。

1.2試藥藥材飲片購于禹州藥王藥業，經鑒別均符合2010版藥典規定。大黃素對照品(批號110756-200110)、大黃酚對照品(批號110796-200716)購自中國藥品生物制品檢定所。所用乙腈、甲醇為色譜純，水為自制純水，其他為分析純。

2　方法與結果

2.1提取正交試驗設計[2]大黃、綠豆、車前草、炒白術、黑豆、半夏(制)以水回流提取，采用正交試驗考察加水量(A)提取時間(B)和提取次數(C)。正交表見表1。

2.2大黃素的含量測定方法

2.2.1色譜條件及系統適用性試驗色譜柱：C/N 5020-39103 S/N.OJ8701-16柱(5(m)；流動相：甲醇-0.1%磷酸(85:15)；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長254nm；保留時間15min，進樣量：5μL見圖1。

表1　正交試驗水平表

圖1　大黃素、大黃酚液相色譜圖

2.2.2精密稱取大黃素對照品1.39mg，大黃酚對照品2.78mg置50ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻。精密吸取5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻(每1mL含大黃素0.00556mg，含大黃酚0.01112mg)，作為對照品溶液。

2.2.3線性關系考察精密吸取對照品溶液(大黃素0.00556mg·mL-1，含大黃酚0.01112 mg·mL-1)2，4，5，6，8，10μL，分別注入液相色譜儀，按上述實驗條件及方法進行測定，以大黃素，大黃酚的進樣量為縱坐標，其吸收峰峰面積為橫坐標，計算回歸方程和相關系數，結果表明大黃素在0.01112～0.0556μg范圍內線性關系良好，大黃酚在0.02224～0.1112μg范圍內線性關系良好。

2.2.4供試品溶液制備按處方比例稱取藥材共9份，按表1正交表加水回流提取，濾過，合并濾液，備用。精密量取上述溶液適量置水浴蒸干，轉移至10mL容量瓶，甲醇定容，0.45μm濾膜濾過，取續濾液，進樣10μL。

2.2.5陰性對照溶液的制備按處方稱取藥材(缺大黃)，按“2.2.3”項下方法制備，即得陰性對照溶液。

2.3方法學考察

2.3.1精密度試驗取大黃素、大黃酚對照品溶液，分別按照各自液相方法重復進樣6次，每次10μL，測定峰面積，RSD分別為0.75%、1.35%，表明儀器精密度良好。

2.3.2穩定性試驗取同一供試品溶液分別于0、1、2、4、8h各進樣一次，每次10μL，測定峰面積，RSD分別為0.38%、0.65%，表明供試品溶液在8h內穩定。

2.3.3重復性試驗取同一供試品溶液6份，分別按照“2.2.1”項下色譜條件進行測定，結果RSD分別為0.78%、1.25%，表明方法重復性良好。

2.3.4加樣回收試驗稱取3份已知含量的供試品溶液，分別精密加入大黃素和大黃酚對照品溶液按“2.2.4”項方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，計算的大黃素平均回收率為100.1%，RSD為1.85%，大黃酚平均回收率為98.5%,RSD為2.25%。

2.4正交試驗安排及結果工藝評價目標通過指標性成分，提取物來反映，指標性成分通過大黃素、大黃酚2個指標來反映，根據本方配伍規律，確定以上指標的優先順序為：大黃素>大黃酚>干膏量。首先指標性成分比干膏轉移率重要的多，大黃素記5分，大黃酚記3分，干膏量記2分，總分10分[3]。見表2，結果分析見表3。

表2　試驗安排及結果

表3　方差分析結果

F0.05(2,2)=19.00

3　驗證試驗

按處方量稱取藥材3份，按選定的最佳提取工藝提取，測定各指標成分含量。結果見表4。

表4　驗證試驗結果

4　討論

從以上試驗結果來看，第8組綜合得分最高，即最佳工藝為加10倍量水，提取30min，提取2次[4]。

原方制備工藝較為復雜，本實驗采用水提工藝優化工藝參數起到了事半功倍的效果，大黃素和大黃酚雖為弱水溶性，但含量較高，為方中君藥，故做為該考核指標，結果表明本工藝簡單，穩定性好，適用于工業化生產。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：286.

[2]程詠梅,陳仁華.小檗堿提取工藝的研究[J].時珍國醫國藥,2007,18(6),1445-1447.

[3]馬鵬生.六盤山大黃主要成分兩種提取方法比較研究[J].醫學信息,2009,22(9),1915-1916.

[4]李紅霞,王坤杰.大黃最佳提取方法的比較研究[J].安徽農業科學,2008,36(29),12753-12754.

Optimization on Extraction Technology of Qingning Pill by Orthogonal Experiment

LIU LihuaZHAI Laichao

(Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM, Henan, Zhengzhou 450000, China)

ObjectiveTo optimize the extraction technology of Qingning pill. MethodsThe orthogonal experiment was used to optimize the extraction technology. Taking emodin, rhubarb and dry paste volume as index, affect of water added, extraction times and adding water multiples on extraction technology was observed, and finally the best water extraction technology was determined. ResultsThe best extraction technology is adding 10 times water quantity, extraction for 30min and 2 times. ConclusionIt provided scientific basis for extraction process and the next research work.

Qingning pill; Orthogonal experiment; Extraction technology

河南中醫學院第一附屬醫院藥學部(鄭州 450000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.17.019

1003-8914(2016)-17-2494-03

(本文校對：馮菲2014-10-21)