基于液相色譜-串聯質譜技術的磷酸化蛋白質組學分析

朱秀娟， 李好雨， 郭 林， 趙曉璐

(病毒學國家重點實驗室，武漢大學生命科學學院，湖北武漢 430072)

蛋白質磷酸化修飾在生物體內普遍存在。真核生物中，磷酸化修飾主要發生在絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)殘基上[1]。磷酸化修飾參與調控多種細胞生命活動，如細胞增殖、發育與分化、受體介導的信號轉導、細胞凋亡及腫瘤發生等。其中，磷酸化修飾對抗病毒天然免疫信號通路的調控一直是生物醫學領域的一個研究熱點。天然免疫反應是機體抵御外界病原微生物入侵的第一道防線。當病毒入侵時，機體通過自身的模式識別受體(Pattern Recognition Receptors，PRRs)來識別病毒的病原相關分子模式(Pathogen-associated Molecular Patterns，PAMPs)，并通過一系列的信號轉導事件誘導干擾素(Interferon ，IFN)表達，進而抵御病毒入侵[2]。在抗病毒天然免疫信號通路活化的過程中，磷酸化修飾起著重要的調控作用[3]。因此，磷酸化蛋白及位點的鑒定對于更好地了解抗病毒天然免疫信號通路是十分必要的。

蛋白質組學主要研究特定生理或病理條件下細胞或組織中所有蛋白的動態變化。超高靜電場軌道阱傅里葉變換臺式質譜(Q Exactive HF )結合了提供母離子選擇的高性能四極桿和具有超高分辨率、高質量精度的超高靜電場軌道阱。在數據質量無任何損失的情況下，Q Exactive HF 以更快的檢測速度和更高的分辨率，在蛋白質組學領域有絕佳的表現[4]。蛋白質組學技術的飛速發展，使高通量對磷酸化蛋白進行相對定量分析成為可能。其中，穩定同位素雙甲基化標記技術因操作簡單而被廣泛采用[5]。……