熒光法研究苯胺藍與人血清白蛋白的相互作用

董文娟， 侯曉莉， 董 川*

(山西大學環境科學與工程研究中心，山西太原 030006)

人血清白蛋白(HSA)是人體血漿中含量最豐富的蛋白質，占血漿總蛋白的60%，是維持血液膠體滲透壓的主要成分和運輸內源性及外源性物質的重要載體[1],能與許多內源及外源性化合物結合起到轉運的作用。蛋白質中存在著酪氨酸和色氨酸殘基，它們本身可發射熒光，這種內源熒光的猝滅過程是研究蛋白質和其他物質相互作用的重要方法。例如人們通過研究染料分子與蛋白質相互作用后的熒光特性變化，從而獲得有關蛋白質大分子結構和性能的相關信息。水溶性苯胺藍(AnB)是一種重要的三苯甲烷酸性染料，被廣泛的用于羊毛、蠶絲及羊毛混紡的染色，且它的染色技術在植物、動物和環境科學等領域都展現出很好的應用潛力[2]。同時它還曾用作酸堿指示劑、生物染色劑用于神經組織、細胞、結締組織的染色[3]。已有研究報道了利用水溶性苯胺藍的吸光光度法來測定人血清白蛋白[4 - 6]，還未見用熒光法來研究苯胺藍與蛋白質相互作用的報道。

本文采用熒光光譜法研究AnB與HSA的相互作用機制,研究二者相互作用的結合位點、結合常數，以及溫度對結合常數的影響,并從熱力學角度探討它們之間的主要作用力類型。這對于闡明AnB與HSA相互作用機理，以及AnB對活體生物組織染色時的作用機制具有一定的意義。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

CARY Eclipse熒光分光光度計(美國，VARIAN)(自帶恒溫裝置)；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；……