Tf-USPIO納米微粒的合成及TfR轉基因神經干細胞過表達的研究

楊志軍　白妙春　張業森　郭永坤　戴宜武

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·論著·

Tf-USPIO納米微粒的合成及TfR轉基因神經干細胞過表達的研究

楊志軍白妙春張業森郭永坤戴宜武

目的合成Tf-USPIO納米微粒以及建立穩定表達TfR的神經干細胞。方法利用慢病毒轉染神經干細胞，通過流式細胞儀篩選出穩定表達TfR的神經干細胞，運用WB檢測其表達水平。將Tf與USPIO進行偶聯，合成Tf-USPIO納米微粒，通過DLS方法測出USPIO和Tf-USPIO的直徑分別為(36±0.7)nm，(43.5±0.08)nm。結果慢病毒成功的轉染神經干細胞，通過流式細胞儀器篩選出穩定表達的神經干細胞，并用WB證實了TfR的過表達；通過偶聯的方法合成了穩定的Tf-USPIO微粒。結論成功構建了TfR神經干細胞系，合成出穩定的Tf-USPIO納米微粒。

超小超順磁性氧化鐵；轉鐵蛋白受體；慢病毒載體；干細胞；磁共振成像

研究證實神經干細胞移植可改善因神經元損傷而出現的臨床癥狀[1]。但到目前為止，未能實現在活體內長期動態觀察干細胞的遷移和分化，因此需要一種能夠達到長期示蹤目的的干細胞。轉鐵蛋白受體(transferring receptor,TfR)在內皮細胞等大量存在，其主要作用是將細胞外的鐵向細胞內轉移，是鐵代謝的重要過程，其配體轉鐵蛋白(Tf)可透過血腦屏障(BBB)。同時, 研究發現腦內很多疾病的發生都和鐵代謝失調有關。TfR報告基因在磁共振(MR)分子成像中受到高度重視和廣泛關注。目前應用較多的 TfR 探針有轉鐵蛋白-單晶體氧化鐵顆粒(Tf-MION)[2]和轉鐵蛋白-超順磁性氧化鐵納米粒(Tf-SPION)[3]兩種,其在體內外均能MR成像。本文利用慢病毒(pLenti6.3-TfR-IRES-EGFP和pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP)轉染神經干細胞(NSCs)，通過流式細胞篩選出穩定表達TfR的神經干細胞系，并通過蛋白印記(Western blotting)證明其過表達；……