HPLC法測定穿王消炎片中西瑞香素的含量

廣西桂林市食品藥品檢驗(yàn)所（541002）張治軍 覃曉

穿王消炎片為中藥復(fù)方制劑，由穿心蓮和了哥王兩位藥組成，收載于國家食品藥品監(jiān)督管理局國家標(biāo)準(zhǔn)WS-10487（ZD-0487）2002-2012Z，具有消炎解毒的功能，用于痰熱咳喘，腹痛，以及急慢性扁桃腺炎、咽喉炎、肺炎等功能[1]。現(xiàn)行穿王消炎片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測定中僅有脫水穿心蓮內(nèi)酯含量測定，對(duì)處方中的了哥王質(zhì)量尚無控制方法。了哥王的化學(xué)成分主要有香豆素類、木脂素類、黃酮類、蒽醌類等，西瑞香素是了哥王主要藥效成分之一，也是毒性成分之一，具有較好的抗炎、抗腫瘤作用[2][3][4][5]。本文采用高效液相色譜法建立測定了哥王中主要成分西瑞香素的定量方法，能更好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，報(bào)道如下。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀(島津2010，PDA檢測器，日本島津公司)，西瑞香素對(duì)照品（批號(hào)：111758-201101）購自中國食品藥品檢驗(yàn)研究院。穿王消炎片(批號(hào)141003、140815、131203，市售）。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇 Agilent ZORBAX SBC18(4.6mm×250mm，5μm)柱，以甲醇—0.1%磷酸水溶液(40∶60)為流動(dòng)相，西瑞香素獲得較好的分離，流速：1mL·min-1，檢測波長345nm西瑞香素，柱溫35℃，進(jìn)樣量：20μl，理論板數(shù)按西瑞香素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。在此條件下對(duì)照品、供試品在色譜中西瑞香素分離較好，陰性樣品在相應(yīng)保留時(shí)間無干擾(見附圖)。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取西瑞香素對(duì)照品9.865mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。取2mL，置10mL容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，混勻，既得。

2.3 供試品溶液制備 取穿王消炎片20片，除去包衣，研細(xì)，精密稱取3.0g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，超聲45分鐘，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，過0.45μm柱，既得。

2.4 陰性樣品溶液的制備 根據(jù)穿王消炎片處方比例，取缺了哥王藥材的原料，按照制備工藝制備陰性顆粒。按“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系 分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、l.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于10mL量瓶中，用甲醇分別稀釋至刻度，配制成不同濃度對(duì)照品溶液。各吸取20μL進(jìn)樣，測定峰面積，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果回歸方程為Y＝4613X+599.3（r=0.9994），表明西瑞香素進(jìn)樣濃度在4.9325～49.3250μg·mL-1,范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5.2 精密度考察 將“2.5.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，得西瑞香素峰面積RSD為1.23%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5.3 樣品穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，每隔一段時(shí)間進(jìn)樣測定其西瑞香素峰面積，RSD分別為1.47%，結(jié)果表明樣品提取液中西瑞香素在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批穿王消炎片（批號(hào)：141003），研細(xì)。精密稱取3.0g，共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。得峰面積后，計(jì)算含量，結(jié)果西瑞香素含量分別為0.4532、0.4478、0.4715、0.4664、0.4626、0.4511mg·g-1，RSD＝2.06%；表明本方法重復(fù)性好。

附圖 HPLC色譜圖。

附表1 回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

附表2 穿王消炎片中西瑞香素含量測定結(jié)果

2.5.5 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的同一批（批號(hào)：141003，含量0.1589mg·g-1）穿王消炎片6份，每份約3.0g，精密稱定，分別精密加上述對(duì)照品儲(chǔ)備液4、5、6ml，照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算回收率，并求出其平均值和RSD，結(jié)果見附表1。

2.6 樣品測定 取3個(gè)批號(hào)的穿王消炎片各2份，每份約3.0。照“2.3”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。得峰面積后，計(jì)算含量，結(jié)果見附表2。

3 討論

3.1 在樣品提取過程中，考察了提取時(shí)間，分別超聲提取了20min、30min、45min、60min、75min，發(fā)現(xiàn)提取30min不能提取完全，而提取45min、60min、75min所得含量基本一致，為了保證實(shí)驗(yàn)的提取充分和效率，我們在固定超聲頻率與功率的同時(shí)，選擇采用提取45min。

3.2 3批含量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同批號(hào)的樣品含量差異較大，可能和了哥王原料的品質(zhì)以及工藝穩(wěn)定性有較大的關(guān)系，由于西瑞香素是了哥王主要藥效成分之一，也是毒性成分之一，所以有必要對(duì)該產(chǎn)品中的了哥王的質(zhì)量進(jìn)行控制[6][7]。