干擾素治療對慢性乙肝患者CD4+CD25+調節性T細胞水平的影響研究

薛海波　馬麗麗　林賢凡　吳金明

1.溫州醫科大學附屬第一醫院消化內一科，浙江溫州325000；2.溫州醫科大學附屬第一醫院風濕免疫科，浙江溫州325000

干擾素治療對慢性乙肝患者CD4+CD25+調節性T細胞水平的影響研究

薛海波1馬麗麗2林賢凡1吳金明1

1.溫州醫科大學附屬第一醫院消化內一科，浙江溫州325000；2.溫州醫科大學附屬第一醫院風濕免疫科，浙江溫州325000

目的探討慢性乙型肝炎患者在干擾素抗病毒治療中外周血調節性T細胞的變化及臨床意義。方法選擇2013年1月～2015年1月在我院行干擾素抗病毒治療的慢性乙肝患者60例及同時期體檢的健康成人20例，分別于治療前、治療后第12、24、36、48周及停藥后24周收集患者的外周血，比較外周血中CD4+CD25+調節性T細胞（Tregs）、血清HBV-DNA載量以及谷氨酸-丙酮酸轉氨酶（ALT）的變化。結果治療前，完全應答組、部分應答組以及無應答組外周血CD4+CD25+調節性T細胞比例、ALT含量以及HBV-DNA載量組間比較差異無統計學意義（P＞0.05），但均顯著高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）；治療后，完全應答組和部分應答組患者各時間段Tregs比例均較治療前顯著下降（P＜0.05）；在治療及停藥期間，完全應答組和部分應答組患者的Tregs比例一直在下降；治療期間HBV-DNA轉陰患者的Tregs比例逐步下降且顯著低于未轉陰的患者（P＜0.05）；治療期間血清學轉換的患者Tregs比例逐步下降且顯著低于未轉換的患者（P＜0.05）。結論慢性乙肝患者在接受干擾素抗病毒治療期間及治療后，其外周血調節性T細胞比例下降，且越早出現下降的患者其治療后血清轉陰的可能性越大。

乙型肝炎；干擾素；調節性T細胞；外周血

［Abstract］Objective To investigate the changes and clinical significance of peripheral blood regulatory T cells in chronic hepatitis B patients treated with interferon.Methods 60 patients with chronic hepatitis B who were treated with interferon and 20 healthy adults were selected from January 2013 to January 2015 in our hospital.Peripheral blood was collected before treatment and 12th weeks，24th weeks，36th weeks，48th weeks after treatment and 24 weeks after withdrawal，the changes of CD4+CD25+regulatory T cells（Tregs），serum HBV-DNA and glutamate pyruvate aminotransferase（ALT）in peripheral blood were compared.Results There were no significant differences in the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells，ALT content and HBV-DNA content between complete response group，partial response group and non response group before treatment（P＞0.05），but they were significantly higher than those in healthy control group，there were statistically significant differences between the groups（P＜0.05）；The proportion of Tregs in the complete response group and the partial response group after treatment were significantly decreased compared with that before treatment（P＜0.05）；The proportion of Tregs in patients of complete response group and partial response group had been declining during the treatment and withdrawal；Tregs ratio in patients with HBV-DNA negative were gradually decreased and were significantly lower than that of non negative patients during the treatment（P＜0.05）；Tregs proportion of seroconversion in converted patients during treatment were gradually declined and were significantly lower than nonconverted patients（P＜0.05）.Conclusion The peripheral regulatory T cells in patients with chronic hepatitis B by interferons antiviral treatment was decreased during treatment and after treatment，and the sooner the peripheral regulatory T cells declined the greater possibility of seroconversion after treatment.［Key words］Hepatitis B；Interferon；Regulatory T cells；Peripheral

T淋巴細胞是來源于骨髓的多能干細胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到胸腺內，在胸腺激素的誘導下分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。而外周血調節T細胞是近年來新發現的與人體自身免疫功能相關的細胞，其在慢性乙型肝炎患者體內數目明顯增加。本文研究慢性乙型肝炎患者在進行干擾素抗病毒治療中其外周血調節性T細胞的變化及其臨床意義，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年1月～2015年1月在我院進行干擾素抗病毒治療的60例慢性乙肝患者以及同時期進行體檢的20例健康成人作為研究對象。納入標準［2］：符合慢性乙型肝炎感染診斷標準［乙型肝炎HBsAg和（或）HBV-DNA陽性6個月以上《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》］，臨床確診為慢性乙型肝炎；在參與本次研究前半年內未通過其他藥物進行抗病毒及免疫調節治療。排除標準：臨床資料不全；合并腫瘤、肝腎功能不全、自身免疫疾病、其他肝炎以及感染HIV者。分組標準：HBeAg、HBV-DNA陰轉、ALT復常的患者為完全應答組；HBeAg、HBV-DNA和ALT 3項指標中的1或2項達標為部分應答組；HBeAg、HBV-DNA和ALT均未達標為無應答組。所有患者均對本研究內容知曉，并簽署知情同意書。患者的性別、年齡組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

1.2方法

所有患者均在清晨空腹的條件下取全血，通過流式細胞儀（FC-500，美國COULTER公司）測定CD4+CD25+調節性T細胞頻率；采用全自動生化分析儀（AU5821，日本Beckman Coulter公司）測定ALT；采用實時熒光定量PCR測定HBV-DNA，具體檢測方法參照潘修成等［1］的研究。其中以血清ALT＜40 U/L為正常。

1.3統計學方法

采用SPSS17.0軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗或方差分析，計數資料以［n（%）］形式表示。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1治療前各組臨床觀察指標比較

完全應答組、部分應答組以及無應答組在進行干擾素抗病毒治療前外周血CD4+CD25+調節性T細胞比例、ALT含量以及HBV-DNA組間比較差異無統計學意義（P＞0.05），但均顯著高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2　治療前各組臨床觀察指標比較

2.2各時間段慢性乙肝患者Tregs比例比較

治療12周后，完全應答組患者的Tregs比例［（4.16± 0.62）%］顯著低于部分應答組患者［（4.98±0.63）%］和無應答組患者［（6.05±0.44）%］（P＜0.05），且部分應答組患者顯著低于無應答組患者（P＜0.05）；治療24周后，完全應答組患者Tregs比例［（3.88±0.71）%］顯著低于部分應答組患者［（4.51±0.52）%］和無應答組患者［（6.05±0.44）%］（P＜0.05），且部分應答組患者顯著低于無應答組患者（P＜0.05）；治療36周后，完全應答組患者和部分應答組患者Tregs比例分別為（3.71±0.52）%和（4.11±0.63）%，均顯著低于無應答組患者［（5.61± 0.42）%］（P＜0.05）；治療48周后，完全應答組患者和部分應答組患者Tregs比例分別為（3.44+0.37）%和（4.01+0.57）%，均顯著低于無應答組患者［（5.22±0.58）%］（P＜0.05）；停止干擾素治療24周后，完全應答組患者Tregs比例［（3.07±0.42）%］顯著低于部分應答組患者［（3.82±0.47）%］和無應答組患者［（5.31±0.47）%］（P＜0.05），且部分應答組患者顯著低于無應答組患者（P＜0.05）。此外，在使用干擾素治療期間以及干擾素停藥24周后，完全應答組及部分應答組患者各時間段Tregs比例均顯著低于治療前（P＜0.05）。見表3。

表1　患者一般資料

2.3各時間段慢性乙肝患者ALT達標情況比較

使用干擾素治療后12、24、36、48周以及停止干擾素治療24周后，完全應答組患者ALT達標患者比例分別為77.78%、100.00%、100.00%、100.00%和44.44%；部分應答組患者ALT達標患者比例分別為75.00%、83.33%、83.33%、83.33%和50.00%。見表4。

2.4各時間段慢性乙肝患者HBV-DNA低于500拷貝數/mL患者比例

使用干擾素治療后12、24、36、48周以及停止干擾素治療24周后，完全應答組患者HBV-DNA低于500拷貝數/mL的患者比例分別為44.44%、100.00%、100.00%、100.00%和44.44%；部分應答組患者ALT達標患者比例分別為25.00%、58.33%、58.33%、75.00%和25.00%。見表5。

2.5各時間段HBV-DNA轉陰與未轉陰、血清學轉換與未轉換患者Tregs比較

HBV-DNA轉陰組患者使用干擾素治療后及停藥后Tregs比例逐步下降且均顯著低于未轉陰組患者（P＜0.05）；血清學轉換組患者干擾素治療后及停藥后Tregs比例逐步下降且均顯著低于未轉換組患者（P＜0.05）。見表6。

表3　各時間段慢性乙肝患者Tregs比例比較（x±s，%）

表4　各時間段慢性乙肝患者ALT達標情況比較［n（%）］

表5　各時間段慢性乙肝患者HBV-DNA低于500拷貝數/mL患者比例［n（%）］

表6　各時間段HBV-DNA轉陰與未轉陰、血清學轉換與未轉換患者Tregs比較（x±s）

3　討論

調節性T細胞［3］（regulatory cells，Tregs）是一類控制體內自身免疫反應性的T細胞亞群，早期亦稱做suppressor T cells。調節性T細胞可分為天然產生的自然調節性T細胞（n T-regs）和誘導產生的適應性調節性T細胞（a T-regs或i T-regs），如Th3、Tr1，另外尚有CD8 Treg、NKT細胞等，與自身免疫性疾病的發生關系密切，其異常表達可導致自身免疫性疾病。

CD4+CD25+調節性T細胞［4-6］是一類最近才被認識的免疫調節細胞，起源于胸腺，發揮抑制性免疫調節作用，持續性表達IL-2Rα鏈（CD25），具有免疫抑制性和免疫無能性兩大特征，在自身免疫性疾病的治療、腫瘤的免疫治療以及移植耐受的誘導等方面具有潛在的應用價值。程翔等［7］人研究表明，慢性心力衰竭患者外周血CD4+CD25+調節性T細胞比例較正常人低，并且與慢性心力衰竭患者心功能存在相關性，說明CD4+CD25+調節性T細胞比例下降不僅與慢性心力衰竭發病有關，還與其疾病發展有關。此外，眾多研究還表明［8-10］，CD4+CD25+調節性T細胞與紫癜［11］、腫瘤免疫逃逸［12］以及糖尿病合并肺部感染等有關［13］。這主要是由于CD4+CD25+調節性T細胞是一種免疫調節細胞，其表達的多少將直接影響到機體的免疫水平，表達異常時會造成機體出現疾病［14-16］。Tregs不僅與疾病的發生發展密切相關，還與疾病的治療有密切聯系。李浩等［17，18］研究發現，對于慢性乙型肝炎患者進行干擾素抗病毒治療期間，隨著HBV-DNA載量的下降，Tregs比例也隨之下調。黃燕等［19，20］研究發現，慢性乙型肝炎患者體內外周血CD4+CD25+Tregs細胞升高，進行干擾素抗病毒治療后其比例下調。

本文研究發現，應答慢性乙型肝炎感染患者進行干擾素抗病毒治療，Tregs比例也隨之下調，且越早出現下降的患者治療后血清轉陰可能越大，而無應答慢性乙型肝炎感染患者的Tregs比例無顯著變化。

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Effect of CD4+CD25+regulatory T cell level of chronic hepatitis B during interferon theraping

XUE Haibo1MA Lili2LIN Xianfan1WU Jinming1
1.The First Department of Gastroenterology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325000，China；2.Department of Rheumatology and Immunology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical U-niversity，Wenzhou325000，China

R512.62

A

1673-9701（2016）24-0012-04

2016-04-13）

浙江省自然科學基金（LY12H03003）