超高效液相色譜—電噴霧串聯質譜法測定芒果中的吡蟲啉和噻嗪酮

林靖凌　李胤均　徐志

摘要：采用超高效液相色譜-電噴霧串聯四級桿質譜儀，多反應監測（MRM）模式下建立了吡蟲啉和噻嗪酮在芒果（Mangifera indica L.）中的定性及定量分析方法。樣品經純水-乙腈漩渦振蕩提取，經分散固相萃取凈化，超高效液相色譜-電噴霧串聯質譜儀測定。結果表明，在0.001～0.1 μg/mL質量濃度范圍內，農藥峰面積與進樣質量濃度間均呈良好的線性關系（r>0.999），最小檢出量（LOD）為5 ng，最低檢測濃度（LOQ）為0.005 mg/kg，回收率在84%～101%之間，相對標準偏差（RSD，n=5）為1.9%～6.9%之間。該方法準確、簡單、靈敏度高，適用于芒果中吡蟲啉、噻嗪酮殘留的檢測。

關鍵詞：芒果（Mangifera indica L.）；吡蟲啉；噻嗪酮；超高效液相色譜-電噴霧串聯質譜

中圖分類號：O657.6 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）06-1545-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.06.046

吡蟲啉（Imidacloprid）是硝基亞甲基類內吸殺蟲劑，為煙酸乙酰膽堿酯酶受體的作用體，作用機制是干擾害蟲運動神經系統使化學信號傳遞失靈，可用于防治刺吸式口器害蟲，如蚜蟲、薊馬、飛虱等[1-4]。噻嗪酮（Buprofezin），雜環噻二嗪類昆蟲生長調節劑，作用機制是抑制昆蟲幾丁質合成和干擾新陳代謝，導致若蟲蛻皮畸形或翅畸形而緩慢死亡，觸殺作用強，對飛虱、葉蟬、粉虱及介殼蟲類害蟲有良好防治效果[5-7]。這2種農藥在生產上已被廣泛使用，目前在芒果（Mangifera indica L.）上應用的混劑登記的產品僅有1個，為38%吡蟲·噻嗪酮懸浮劑。目前，中國未明確規定芒果上吡蟲啉、噻嗪酮最大殘留限量，CAC與歐盟規定芒果上吡蟲啉最大殘留限量為0.2 mg/kg，噻嗪酮為0.1 mg/kg。

吡蟲啉的檢測方法主要有液相[4]、液質聯用[8，9]，噻嗪酮的檢測方法有液相[10]、氣相[11]、氣質[12]、液質[13]，涉及的基質有蔬菜、水果、糧食、水和土等，提取方法有勻漿、超聲、加速溶劑萃取等，凈化處理主要有固相萃取、分散固相萃取等[9-13]。本研究將農業行業標準761法和QuEChERS法結合，并加以改進與液質聯用，旨在建立1個準確、簡單、高靈敏度能同時測定芒果中吡蟲啉和噻嗪酮的檢測方法，為滿足日后檢測要求，保障消費安全，降低出口損失，客觀評價上述農藥的殘留水平提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

吡蟲啉、噻嗪酮標準品，純度99.0%，30 mg/瓶，德國Dr Ehrenstorfer GmbH公司；乙腈，色譜純，美國Fisher公司；無水硫酸鎂、氯化鈉，均為分析純，廣州化學試劑廠；分散固相萃取，Dispersive SPE 15 mL，PSA 150 mg-magnesium sulfate 900 mg，美國Agilent公司；PSA，40～63 μm，60 A，德國CNW公司；有機相針式濾器，13 mm/0.22 μm，上海安譜科學儀器有限公司。

1.2 主要儀器

超高效液相色譜系統，Acquity Ultra Performance；質譜系統，API4000；渦流混合器，XW-80A；勻漿機，IKA？誖T25；超純水機，Milli-Q；電子天平，METTLER TOLEDO PL303。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理 稱?。?.0±0.1） g的樣品于50 mL離心管中，樣品中加入5.0 mL超純水，加入乙腈10.0 mL，經渦流混合器提取2.0 min后，4 000 r/min離心5 min，上清液轉入裝有3.0 g氯化鈉的50 mL離心管中，劇烈振蕩120次，4 000 r/min離心5 min，轉移上清液10.0 mL于Dispersive SPE中，經渦流混合器萃取2.0 min后，8 000 r/min離心10 min，經0.22 μm濾膜過濾，待測。

1.3.2 標準溶液配置 稱取標準品，用甲醇定容成母液，吸取不同體積至容量瓶中，氮氣吹干，用經“1.3.1”處理后的樣品空白溶液定容，定容后濃度為0.001、0.005、0.01、0.25、0.1 μg/mL。

1.3.3 儀器條件

1）色譜條件。色譜柱：Acquity UPLC？誖BEH C18色譜柱（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）；柱溫：35 ℃；流動相：A-水，B-乙腈；流速：0.25 mL/min；梯度洗脫條件：0～0.2 min， 90%A；0.2～4.5 min，10%A；4.5～5.0 min， 10%A；5.0～5.5 min， 90%A；5.5～6.0 min， 90%A；進樣量：5.0 μL。

2）質譜條件。離子源：電噴霧離子源ESI；掃描方式：正離子源；碰撞氣：6 psi；氣簾氣：20 psi；霧化器Gas1：50 psi；霧化器Gas2：50 psi；離子噴霧電壓：5 500 V；離子源溫度600 ℃；檢測方式：多反應監測（MRM）如下表1所示。

2 結果與分析

2.1 樣品前處理

2.1.1 提取溶劑的選擇 在5.0 g空白樣品中加入標準溶液，濃度0.05 mg/kg，重復2次，比較了乙腈（10.0 mL）提取、水-乙腈（5.0 mL∶10.0 mL）提取2種方法。加水后的芒果在乙腈更易分散，提高提取率，具體結果見表2。

2.1.2 勻漿方法的選擇 加入提取溶劑后，對比了勻漿機（18 000 r/min勻漿2 min）和渦流混合器（渦流混合2 min）2種提取方式。使用純乙腈提取時，由于芒果含糖量高（不同品種和成熟度有差異），樣品在溶劑中分散程度較差，使用渦流混合器提取效果較差，勻漿機刀頭破碎效果好，因此提取效果較好；提取溶劑為水-乙腈時，由于預先加入水進行潤濕，樣品在乙腈中分散度好，二者提取效果相近，均能滿足要求。但勻漿機的使用過程需要清潔刀頭，增加了勞動量，另外噪音大，因此選擇渦流混合器進行提取。具體提取結果見表2。

2.1.3 凈化方法的選擇 在具塞試管中加入標準溶液，吹干后加入10.0 mL空白樣品提取液，定容后濃度為0.025 μg/mL，轉移至分散固相萃取劑中，重復5次，共兩組，比較了A、B兩種分散固相萃取劑的凈化效果：A（Dispersive SPE，15 mL，PSA 150 mg-magnesium sulfate 900 mg，Agilent），和現配現用的分散固相萃取劑B（150 mg，PSA 40～63 μm，60A）+無水硫酸鎂（900 mg），二者凈化雜質效果相近。綜合比較，A價格略貴，但可節省大量勞動力，重現性較好，8 000 r/min離心后，分散固相不易重新散開，因此選擇A作為凈化方法。具體結果見表3。

2.2 方法的線性相關性

采用外標法峰面積定量，用乙腈配制吡蟲啉、噻嗪酮標準貯備液。為消除基質效應，移取不同體積的母液，氮氣吹干溶劑后，用經“1.3.1”條件處理后的樣品空白定容，定容后濃度為0.001、0.005、0.01、0.025、0.1 μg/mL，注射標準工作系列溶液，繪制標準曲線，吡蟲啉保留時間為2.13 min，噻嗪酮保留時間為5.19 min。結果表明，在該條件范圍內，儀器響應值與進樣量呈良好的線性關系，具體結果見表4，標準譜圖見圖1。

2.3 方法的回收率、精密度

在芒果果肉中，添加吡蟲啉、噻嗪酮標準溶液0.005、0.050、0.200 mg/kg，每個濃度設5個平行。吡蟲啉在芒果果肉中的回收率為86%～102%，相對標準偏差1.9%～4.3%，噻嗪酮在芒果果肉中的回收率84%～101%，相對標準偏差3.3%～6.9%，該方法的準確度和精密度符合農藥殘留試驗準則要求（表5）。

3 小結

本研究建立了芒果中吡蟲啉和噻嗪酮的超高效液相色譜法-電噴霧串聯質譜檢測方法，前處理方法將農業行業標準761法和QuEChERS法結合并加以改進，在一定程度上簡化了操作過程，減輕了工作量，結合液質聯用，能夠對芒果中吡蟲啉和噻嗪酮同時進行準確的定性定量分析，以基質校正曲線進行定量，消除基質影響，線性范圍為0.001～0.1 μg/mL，該方法的定量限為0.005 mg/kg，該方法的回收率和精密度符合試驗要求，可滿足日常快速檢測，為客觀評價吡蟲啉和噻嗪酮在芒果上的殘留水平提供參考。

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