周孝瓊 李炳貴 陳慧芳
摘要:為比較不同劑量艾葉水煮醇提液對肉兔生長性能的影響,采用24只斷奶質量相當的哈爾濱白兔,研究不同劑量艾葉水煮醇提液對肉兔采食量、日增質量、料肉比等生長性能的影響。為探討其作用機理測定了每只肉兔免疫球蛋白IgG的含量,并比較各組肉兔空腸絨毛形態特征。與對照組相比,劑量為3.0 mL/只的末質量、平均日增質量、料肉比差異均極顯著(P<0.05),空腸絨毛高度差異顯著(P
關鍵詞:艾葉;水煮醇提液;肉兔;生長性能;免疫球蛋白
中圖分類號: S816.73 文獻標志碼: A 文章編號:1002-1302(2016)07-0295-03
艾草是菊科多年生草本植物,普遍生長于路旁、荒野、草地,易采集且價格低廉。艾葉是傳統中藥,其味辛溫,歸肝、脾、胃三經,具有理氣血、逐寒濕、調經、安胎、止血、防治多種疾病等功能[1]。現代醫學分析和開發研究表明,艾葉具有抗菌、抗病毒[2]、抗腫瘤[3-4]、抗炎、抗氧化[5]等藥理活性。艾葉不僅是人類的常用中藥,也是畜禽及水生動物良好的飼料和飼料添加劑,具有促進動物生長、提高生產性能、改善動物產品品質、防治疾病等作用。艾葉富含營養成分,粗脂肪含量4.4%、粗纖維含量19.3%、粗灰分含量7.4%、粗蛋白質含量13.6%[6]。氨基酸的組成比較全面,谷氨酸、賴氨酸、組氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、香鮮味氨酸占總氨基酸的75%~90%[7]。在蛋雛雞日糧中添加適量大蒜和艾葉可提高雞的質量、日增質量,并降低料肉比,在添加之初對蛋雛雞的質量和日增質量沒有明顯影響,之后影響逐漸增大[8]。在蛋種雞的基礎日糧中添加艾葉粉,可提高產蛋率、種蛋受精率、受精蛋孵化率、受精蛋健雛率[9]。艾葉在肉兔中的應用報道較少,僅限于粉劑在飼料中直接添加。本試驗研究艾葉水煮醇提液對肉兔生長性能的影響,并探討其作用機理,為中藥添加劑的現代化應用提供依據。
1 材料與方法
1.1 試驗動物
選取健康的30日齡斷奶哈爾濱白兔,雌雄各半,質量為(0.50±0.05) kg。1.2 主要試劑和藥品
艾葉購自安徽億源中藥飲片科技有限公司,批號20140901。兔免疫球蛋白G(IgG)、ELISA檢測試劑盒購自上海雅浦生物科技有限公司,批號2014/11(96T)。
1.3 主要儀器
VARIOSKAN FLASH型全自動多功能酶標儀(美國熱電公司),RE-52AA型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠),RM2015型輪轉式切片機(上海萊卡有限公司)。
1.4 艾葉水煮醇提液的制備
100 g艾葉經蒸餾水浸泡30 min后,分別用10、8、6倍量的蒸餾水煮3次,同時收集蒸餾液備用,將3次的水煎液混合,用4層紗布過濾,濃縮至100 mL。冷卻后醇提2次并調節pH值、過濾,加10 mL蒸餾成分,用蒸餾水稀釋至100 mL,使含藥量為1 g/mL。
1.5 生長性能試驗
將24只肉兔隨機分為A、B、C、D組,每組6只,公母各半。A、B、C組分別為艾葉水煮醇提液的高劑量組(4.0 mL/只)、中劑量組(3.0 mL/只)、低劑量組(2.0 mL/只),D組為對照組。A組每只每天通過灌胃方式直接灌服4.0 mL艾葉水煮醇提液,B組灌服3.0 mL艾葉水煮醇提液和1.0 mL生理鹽水,C組灌服2.0 mL艾葉水煮醇提液和2.0 mL生理鹽水,D組灌服4.0 mL生理鹽水。試驗期間使用配合飼料飼喂,籠養,每籠6只,每天定時加料2次,自由采食、飲水,每天傍晚定時給藥,連續30 d。試驗期內固定專人記錄試驗數據,觀察采食情況。每天定時記錄兔的質量和耗料量。試驗結束后,分別計算兔的平均日增質量、料肉比等。
1.6 免疫球蛋白檢測
分別在給藥前(0 d)以及給藥后10、20、30 d的傍晚,每只兔心臟采血2 mL,靜置后以3 000 r/min離心5 min,取血清分別進行兔免疫球蛋白G(IgG)ELISA檢測。采用間接ELISA抗體檢測法,向預先包被兔免疫球蛋白G捕獲抗體的包被微孔中依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,進行溫育并徹底洗滌。采用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,并在酸的作用下轉化為最終的黃色,顏色深淺與兔免疫球蛋白濃度呈正相關。采用酶標儀在 450 nm 波長下測定吸光度,通過分光光度計測出D值,從而得到免疫球蛋白濃度。
1.7 空腸絨毛高度和隱窩深度測定
試驗結束,肉兔屠宰后迅速剖開腹腔,在生理鹽水中每只肉兔取一段空腸腸管,采用常規方法制作石蠟組織切片。從組織切片中選取完整、伸展良好的絨毛和隱窩各5個,分別在顯微鏡下測定絨毛高度和隱窩深度,并計算其比值。
1.8 數據分析
采用SPSS 18.0軟件對試驗數據進行方差分析,并對各組試驗數據的差異顯著性進行統計分析。
2 結果與分析
2.1 對肉兔生長性能的影響
肉兔的生長性能情況見表1。
由表1可知,A、B、C組的平均日增質量分別比D組提高11.51%、13.96%、4.90%。A組與D組差異顯著(P<005),B組與D組差異極顯著(P0.05)。結果顯示,3.0 mL/只對提高日增質量的效果最好。A組的料肉比為3.59 ∶ 1,B組的料肉比為325 ∶ 1,C組的料肉比為3.29 ∶ 1,D組的料肉比為 3.64 ∶ 1。可見,肉兔每增質量1 kg,A組比D組節省飼料 0.046 kg,B組、C組分別可節省0.38、0.34 kg。A、B、C試驗組分別比D組降低1.27%、10.55%、9.33%。結果顯示,3.0 mL/只 的藥量對降低料肉比的效果最好。
2.2 兔免疫球蛋白G(IgG)ELISA檢測
兔免疫球蛋白G(IgG)ELISA檢測結果見表2。用藥 30 d 后,A、B、C組的免疫球蛋白水平分別提高114.25%、167.59%、149.68%,而D組(對照組)的免疫球蛋白水平提高113.08%。與對照組相比,B組用藥10、20、30 d時差異顯著(P
2.3 空腸絨毛高度(VH)和隱窩深度(CD)
各組肉兔的空腸絨毛高度和隱窩深度測定結果見表3。
由表3可知,與對照組相比,3 mL/只濃度的空腸絨毛高度和隱窩深度差異極顯著(P
3 結論與討論
3.1 對生長性能的影響
黃賀儒研究發現,試驗組在基礎日糧中用艾葉粉替代20%稻谷糠,對照組飼喂基礎日糧,試驗組肉用兔的日增質量比對照組提高14.40%(P<0.01),飼料報酬提高11.10%(P0.05)。隨著艾葉水煮醇提液給藥量的增加,其對生長性能的提高呈正態分布,而不是線性分布。孫蓉等研究表明,艾葉可發揮鎮痛作用,與降低血中PGE水平、調節體內SOD及NO水平有關,但其發揮藥效作用的同時伴隨有肝毒副作用[10]。艾葉功效的發揮與毒性的表達、劑量、用藥時間密切相關[11];因此,使用艾葉時必須嚴格控制劑量。
3.2 對免疫球蛋白的影響
孔祥峰等進行了9種中藥提取物對雛雞新城疫抗體水平影響的研究,發現中草藥免疫增強劑對機體的細胞免疫和體液免疫功能具有增強或調節作用,可提高機體的抗病力和抵抗力,減少疾病的發生,進而促進生長[12]。李慧峰等研究表明,秦皮、黃連等具有提高機體免疫力的作用,可促進免疫細胞生長[13]。本試驗中,用藥30 d后A、B、C組的免疫球蛋白水平分別提高114.25%、167.59%、149.68%,而D組(對照組)提高113.08%。可見,艾葉水煮醇提液可提高肉兔的免疫球蛋白水平,進而提高機體抵抗力,減少疾病的發生,提高肉兔的生長性能。
3.3 對空腸絨毛高度和隱窩深度的影響
小腸是消化吸收的重要場所,小腸絨毛高度的增加有助于提高動物機體的消化吸收能力[14]。小腸絨毛高度與隱窩深度的比值是衡量小腸上皮細胞更新速度、小腸消化吸收能力的重要指標[15]。本試驗中,劑量為3.0 mL/只的B組與對照組相比差異極顯著,表明艾葉水煮醇提液可提高肉兔小腸絨毛高度和小腸上皮細胞的更新速度,有助于提高其消化吸收能力,從而提高家兔的生長性能。
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