正交法優化白芍炮制工藝的研究

張永豪

黔東南民族職業技術學院，貴州　凱里　556000

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正交法優化白芍炮制工藝的研究

張永豪

黔東南民族職業技術學院，貴州凱里556000

目的：通過正交設計實驗法優化白芍炮制工藝，篩選出最佳提取工藝。方法：采用正交試驗法，對乙醇提取白芍中芍藥內酯苷和芍藥苷的工藝條件進行研究，以芍藥內酯苷和芍藥苷含量為綜合考察指標；對炮制方法酒炙、蜜麩制、酒潤麩炒等主要影響因素進行考察，用HPLC法分析比較不同炮制法對白芍總苷(芍藥內酯苷和芍藥苷)含量變化的影響。結果：最終確定的較佳酒炙方法為：悶潤時間為60min，炮制酒量為15%(每100g藥材加15ml酒)，烘制溫度100℃，烘制時間60min；蜜麩炙白芍較佳，蜜麩比例為麥麩：蜂蜜：水=10∶5∶1；酒潤后麩炒白芍較佳，用酒量為12%。結論：優選出的炮制方法能有效保證白芍中指標性成分含量，為制定其飲片的質量標準以及臨床應用提供依據。

白芍；炮制；正交試驗；高效液相色譜法

白芍系毛莨科植物芍藥(PaeonialactifloraPall.)的去皮干燥根[1-3]，其性微苦，味苦酸[4]，具有養血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗的功能。其主要化學成分為單萜類、三萜類、揮發油類及黃酮類化合物等[5]。白芍的質量控制一般以其主要成分芍藥苷(Paeoniflorin)為指示成分，而芍藥苷也是主要藥效成分[6]。白芍炮制后有效成分的作用是目前臨床運用的研究熱點之一[7-11]。近年來，對白芍常用的生品、清炒品、麩炒品、酒炒品、醋炒品等炮制方法[12]，通過查閱文獻發現，對白芍中芍藥苷和芍藥內酯苷提取工藝研究報道較多[13-14]，為合理提取白芍有效成分提供了一定支撐。因此，研究擬以芍藥苷和芍藥內酯苷含量為綜合考察指標，采用正交試驗方法對炮制影響提取工藝的主要影響因素進行系統深入研究，以期獲得能夠同時兼顧化學和藥效學指標的工藝參數，為白芍藥材的深度開發利用提供一定的實驗基礎，同時也為其他中藥炮制品的提取工藝提供科學參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀(日本島津)；電子分析天平(AB204-S)；HS10260D型號超聲波清洗器(天津恒奧科技公司)；SKP-01型號烘箱(湖北黃石市醫療器械廠)。

1.2試藥芍藥苷對照品(批號：0736-201117，中國藥品生物制品檢驗所)；芍藥內酯苷對照品(批號：0532-201159，中國藥品生物制品檢驗所)；乙腈、甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水，紹興黃酒(浙江古越龍山紹興酒股份有限公司)，其余試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1樣品含量測定方法學考察2.1.1色譜條件色譜柱：Agilent-zorbax C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；檢測波長：230nm；柱溫：25℃；進樣量：10μL。對照品，樣品色譜圖見圖1～3。

2.1.2對照品溶液的制備精密稱取芍藥內酯苷及芍藥苷對照品適量，加甲醇制成20μg/mL的對照品溶液。

2.1.3供試品溶液的制備取白芍藥材粉末(過60目篩)約0.1g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加35mL稀乙醇，密塞，搖勻超聲處理30min，放冷，用稀乙醇定容至刻度，搖勻，濾過；取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。2.1.4線性關系考察分別精密吸取芍藥苷、芍藥內酯苷對照品溶液8μL、10μL、12μL、14μL、16μL，注入液相色譜儀，依法測定，以峰面積為縱坐標，芍藥苷、芍藥內酯苷濃度為橫坐標，繪制標準曲線，分別吸取芍藥苷對照品溶液8μL、10μL、12μL、14μL、16μL注入高效液相色譜儀，指標成分體積為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算得芍藥苷的回歸方程為：y=78491x+27847，R2=0.9992；在0.16～0.32μg范圍內呈良好線性關系。芍藥內酯苷的回歸方程：y=24590x+6374.2，R2=0.999；在0.48～0.96μg范圍內呈良好線性關系。

2.1.5精密度試驗分別精密吸取芍藥苷對照品和芍藥內酯苷對照品10μL，按上述色譜條件重復進樣6次，計算峰面積的積分值。芍藥內酯苷峰面積的RSD=0.67%；芍藥苷峰面積的RSD=0.83%。結果表明，儀器精密度良好。

2.1.6穩定性試驗取供試品溶液分別在2、4、6、8、10、12h時進樣10μL，測定峰面積積分值。芍藥內酯苷峰面積的RSD=0.95%，芍藥苷峰面積的RSD=1.77%，結果表明供試品溶液在12h內穩定性良好。2.1.7重復性試驗精密稱取同一樣品6份，每份約0.1g，按2.3項下方法制備，按上述方法測定。結果芍藥內酯苷峰面積的RSD=1.44%，芍藥苷峰面積的RSD=2.05%。表明此方法重復性良好。2.1.8加樣回收率試驗分別精密稱取白芍藥材粉末9份，每份約0.05g，按80%、100%、120%分別加入芍藥苷和芍藥內酯苷對照品溶液，按供試品溶液制備方法處理，按上述色譜條件測定；結果芍藥苷和芍藥內酯苷平均回收率分別為：102.87%、101.84%，RSD分別為：1.03%、1.08%。見表1、2。

表1　芍藥苷加樣回收試驗結果

表2　芍藥內酯苷加樣回收試驗結果

2.2酒炙正交實驗設計

2.2.1方法根據炮制工藝，傳統鍋炒法難以實現對溫度的控制，將傳統的鍋炒改用烘箱烘制，選擇可能影響酒炙白芍飲片質量的四個因素：悶潤時間、酒量、烘制溫度、烘制時間，選用L9(43)正交實驗，見表3。各組分取凈白芍片，實驗安排表依照《中國藥典》(2010版)酒白芍項下炮制。

表3　正交實驗因素水平表

2.2.2結果取上述酒炙正交試驗項下樣品按2.1.3項溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進樣10μL，測定峰面積，計算含量，結果見表4。

2.2.3結論經SPSS對下表數據分析知，因素B炮制酒量在水平3下對芍藥苷的含量存在統計學差異(P<0.05)。根據實驗結果分析，最佳的炮制方法為：悶潤時間為60min，炮制酒量為15%(每100g藥材用15ml酒)，烘制溫度100℃，烘制時間60min。酒炙后提高白芍有效成分的提取，通過正交試驗優選較佳酒炙白芍的炮制品，對提高藥物的療效具有一定意義。

2.2.4驗證實驗根據酒炙正交試驗得出最佳酒炙炮制條件為2.2.3項結論。取白芍生品按照最佳酒炙炮制條件進行處理，然后取樣品按2.1.3項溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進樣10μL，測定峰面積，計算含量，結果見表5。

表4　酒炙正交實驗結果

表5　酒炙正交實驗的驗證實驗結果

2.3蜜麩制白芍實驗

2.3.1方法先用麩∶蜜∶水為10∶10∶1、10∶5∶1、10∶2∶1制不同比例的蜜麩，取10%蜜麩(每100g藥材用蜜麩10g)，依照《中國藥典》(2010版)麩炒炮制項下進行炮制，用中火將炒鍋加熱至麩下煙起，即可投入藥材，迅速均勻翻動，炒至藥材表面黃色或深黃色，取出，攤開晾涼。

2.3.2結果取上述蜜麩炙實驗項下樣品按2.1.3項溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進樣10μL，測定峰面積，計算含量，結果見表6。

2.3.3結論從實驗結果可知，用10∶5∶1的蜜麩炒制白芍，其炮制品的芍藥內酯苷和芍藥苷含量較高，由此可優化和選擇白芍的炮制方式。

表6　蜜麩炙白芍實驗結果　(n=2)

2.4酒潤麩炒白芍實驗

2.4.1方法取白芍藥材，先將待炮制品分別用12%、15%黃酒悶潤60min，再用10%麥麩(每100g藥材用麥麩10g)照“麩炙法”項下進行炮制，即得。

2.4.2結果取上述酒潤后麩炒項下樣品按2.1.3項溶液的制備方法制成各供試品溶液。按上述色譜分離條件，進樣10μL，測定峰面積，計算含量，結果見表7。

2.4.3結論從實驗結果可知，用12%的酒量，使白芍在酒潤后麩炒后，其炮制品的芍藥內酯苷和芍藥苷含量最高；可多方面增加白芍的炮制方法，從中優選最佳方式。

表7　酒潤后麩炒白芍實驗結果　(n=2)

3　討論

實驗為使炮制溫度便于控制,采用烘箱進行炮制。供試品酒白芍中芍藥苷的提取方法按照《中國藥典》(2010版)超聲提取法進行提取；此外還可用回流提取方法，同時對一批樣品進行兩種提取方法制得兩組供試品溶液，經HPLC法測定，其芍藥苷和芍藥內酯苷含量各有差異，經過統計學處理提取率基本一致，根據提取工藝的復雜性，故選擇超聲提取法。本文通過正交試驗優化白芍炮制，優選炮制品，以提高藥物療效。試驗結果表明，為臨床選用蜜麩炒白芍及制定麩炒白芍飲片的質量標準提供了依據并確定了最佳炮制工藝方法；酒潤后麩炒白芍結合兩種輔料的優點，使炮制過后的白芍更有利于臨床使用；探討白芍的炮制方法，通過正交試驗設計進行驗證分析，優化出較佳炮制工藝，有利于提高白芍有效成分的提取；優選出的炮制方法能有效保證白芍中指標性成分含量，為制定其飲片的質量標準以及臨床應用提供依據。

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(編輯：陶希睿)

The research of radix paeoniea alba processing method

ZHANG Yonghao

Qiaodongnan National Polytechnic,Kaili 556000,China

Objective The orthogonal experimental method radix paeoniae alba was optimized processing technology, selected the best extraction process.By orthogonal test, the ethanol extract of paeonia lactiflora lactone and paeoniflorin in radix paeoniae alba process conditions were studied, with peony lactone glycosides and paeoniflorin content as a comprehensive indicator;Bran system for main processing method of wine, honey and wine embellish bran Fried is intended to explore the main influence factors, using HPLC analysis and comparison of different processing method on radix paeoniae alba total glycosides (paeonia lactiflora lactone and paeoniflorin content changes.Results Better wine for the final main method is: boring time for 60min, processing capacity of 15% (per 100g medicine plus 10ml wine), baking temperature of 100℃, bake time 60min;Honey bran main root of herbaceous peony better bran ratio of wheat gluten: honey: water = 10∶5∶1;After wine embellish bran Fried radix paeoniae alba better use alcohol is 12%.Conclusion Optimization of processing methods can effectively guarantee the major ingredient content in radix paeoniae alba, to develop its yinpian quality standards, and provide evidence for clinical use.

Radix paeoniae alba,Processing;The orthogonal experiment.High performance liquid chromatography

2016-05-21

張永豪(1987-)，男，苗族，在讀研究生，助教，研究方向為中藥學及民族藥苗提取，分析及產品開發等研究。E-mailL:501209935@qq.com

R284

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1007-8517(2016)16-0023-04