正交試驗(yàn)優(yōu)選五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的提取工藝

葉碧顏　彭小敏　鄧廣海

1.廣州市天河區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，廣東　廣州　510665；2.廣東省中醫(yī)院，廣東　廣州　518021

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正交試驗(yàn)優(yōu)選五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的提取工藝

葉碧顏1彭小敏2鄧廣海2

1.廣州市天河區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，廣東廣州510665；2.廣東省中醫(yī)院，廣東廣州518021

目的：考察五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的最佳提取方式。方法：采用正交試驗(yàn)優(yōu)選提取條件，應(yīng)用Kromasil 100-5-C18 色譜柱(250 mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(55∶45)，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm，柱溫為30℃。結(jié)果：采用50%甲醇的超聲處理40min，補(bǔ)骨脂素的溶出度最大；補(bǔ)骨脂素的線性范圍為83.39～1334.18μg(r=0.9997)，樣品的加樣回收率為103.36%，RSD為2.17%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便快速，回收率、重復(fù)性良好，可用于五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的提取與檢測(cè)。

五指毛桃；補(bǔ)骨脂素；正交試驗(yàn)；高效液相色譜法

五指毛桃又名土北芪、五指牛奶、南芪，為?？浦参锎秩~榕(FicushirtaVahl.)的干燥根。廣泛分布于廣東、廣西、云南等地，具有舒筋通絡(luò)、益肺止咳、健脾利濕的功效[1]，是嶺南常用藥之一。長(zhǎng)期以來，學(xué)者對(duì)五指毛桃的藥用歷史沿革、物種演化、生態(tài)環(huán)境、藥理活性、化學(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定等都進(jìn)行過研究，但研究不夠深入細(xì)致[2-4]，《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)五指毛桃的質(zhì)量控制僅限于性狀鑒別和TLC鑒別。為進(jìn)一步完善五指毛桃的基礎(chǔ)研究，實(shí)驗(yàn)對(duì)五指毛桃中補(bǔ)骨素的提取方式進(jìn)行優(yōu)化，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選出最佳的提取條件，為五指毛桃的開發(fā)利用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　儀器和材料

1.1儀器Agilent1260高效液相色譜(配備自動(dòng)進(jìn)樣儀)；BS110S萬分之一天平(賽多利斯)；BS200S-WEI千分之一天平(賽多利斯)；XP26百萬分之一天平(METTlER TOlEDO)；HWS28型恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司)。

1.2材料補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(批號(hào)：110739-200511，中國(guó)藥品生物制品檢定所 )。五指毛桃由廣東河源金源綠色生命有限公司提供。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取對(duì)照品溶液經(jīng)過Agilent 1260 DAD檢測(cè)器紫外全波長(zhǎng)掃描，補(bǔ)骨脂素在 246nm吸收比較強(qiáng)，作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2色譜條件色譜柱：Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(55∶45)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：246nm；柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μL。在此色譜條件下補(bǔ)骨脂素及五指毛桃樣品的色譜圖見圖 1～2 。

2.3對(duì)照品溶液的制備取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成250μg/mL的溶液，即得。2.4線性關(guān)系考察分別吸取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液0.5、1、2、4、8、12、165脂，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣，記錄對(duì)照品峰面積，X為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線：A=0.6867x+ 1.181，r=0.9997。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一樣品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，以補(bǔ)骨脂素峰面積積分值計(jì)算，峰面積的RSD依次為0.84%，表明該方法精密度良好。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品6份，分別按供試品制備方法制備6份樣品溶液，以峰面積積分值計(jì)算，補(bǔ)骨脂素峰面積的RSD依次為 2.28%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一樣品溶液，按上述色譜條件，在12h內(nèi)，分別于1、2、4、8、12h測(cè)定，測(cè)得補(bǔ)骨脂素峰面積的RSD分別為2.34%，表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取樣品6份，每份約0.25g，依次精密加入補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液(121ug/mL)1mL按樣品制備方法制備樣品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。補(bǔ)骨脂素平均加樣回收率分別為103.36%(RSD=2.17%),表明本方法準(zhǔn)確可靠。

3　正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝條件

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，為了獲得最佳工藝條件，利用正交試驗(yàn)法，以提取方式(A)、提取時(shí)間(B)及提取溶劑(C)作為3個(gè)考察因素，選取3個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)。采用L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，來確定超聲提取的最佳提取條件。見表1、2。

表1　五指毛桃提取方式考察正交試驗(yàn)因素水平表

表2　L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

由表2的極差分析結(jié)果可以看出，RC>RA>RB，3個(gè)因素對(duì)五指毛桃中的補(bǔ)骨脂素的影響大小依次為：提取溶劑>提取方式>提取時(shí)間。在試驗(yàn)設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，優(yōu)化得到五指毛桃的最佳提取工藝為A2B2C1，即50%甲醇，超聲處理40min，五指毛桃中補(bǔ)骨脂素溶出度最大。

4　討論

歸納前期化學(xué)成分所采用的提取方法[5]，采用正交試驗(yàn)對(duì)五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的提取方式進(jìn)行研究，并采用HPLC法測(cè)定其含量，為完善五指毛桃提的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本方法簡(jiǎn)便快速，回收率、重復(fù)性良好，可用于五指毛桃中補(bǔ)骨脂素的提取與檢測(cè)。

[1] 現(xiàn)代中藥學(xué)大詞典編委會(huì).現(xiàn)代中藥學(xué)大詞典[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2001:371.

[2] 溫玲,吳華碧,劉沙,等. 廣東不同地區(qū)野生或市售五指毛桃中補(bǔ)骨脂素含量的測(cè)定[J]. 藥物研究, 2008, 5(35): 29-30.

[3] 李明,陳志維,黎玉翠,等. HPLC法測(cè)定五指毛桃中補(bǔ)骨脂素和芹菜素的含量[J].中藥新藥與臨床藥理, 2009, 20(1): 52-4.

[4] 席萍,黃耀海,黃月純,等.五指毛桃藥材高效液相指紋圖譜的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(3): 572-3.

[5] 鐘兆健,宋粉云,李書淵,等.五指毛桃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2005, 11(5): 12-4.

(編輯：陶希睿)

In the Different Extracuion Methods on Five Fingers Wild Peach Scurfpea Fruit Contains Test Research

YE Biyan1PENG Xiaomin2DENG Guanghai2

1.Guangzhou Tianhe District Hospital of Traditiond Chinese Medicine,Guangzhou 510665,China;2.Thadituonal Chinese Medicine Hospital of Guangdong Province,Guangzhou 518021,China

Objective To investigate the best extraction method s of Psoralen in Radix Fici simplicissimae. MethodsThe Radix Fici Hirtae by Soxhlet extraction and heat reflux extraction and ultrasonic treatment in three ways to carry on the inspection, at the same time, the effects of the optimal extraction time, the best extraction solvent.Using 100-5-C18 Kromasil (250 mm x 4.6mm, 5 m) chromatography column, the mobile phase was methanol water (55∶45), the flow rate was 1 mL/min, the detection wavelength was 246nm, the column temperature was 30.Resultusing 50% methanol ultrasonic treatment for 40 minutes, the maximum dissolution of psoralen. The calibration range of psoralen was 83.39～1334.18μg (r=0.9997), the recovery rate of sample was 103.36%,RSDwas 2.17%。Conclusion This method is simple and rapid recovery, good reproducibility, can be used to analyze the content of Psoralen in Radix Fici simplicissimae.

Radix Fici Hirtae; Psoralen; Extraction; HPLC

2016-05-27

廣東省中醫(yī)藥管理局-五指毛桃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化的研究(20152144)。

葉碧顏，女，漢族，主管中藥師。

R284

A

1007-8517(2016)16-0027-02