昆明龍膽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步探究

趙明智　張慶芝　趙萌萌　陳鈺沁 *

1.昆明醫(yī)科大學(xué)海源學(xué)院，云南　昆明　650106；2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南　昆明　650500；3. 黑龍江省傳染病防治院，黑龍江　哈爾濱　150500

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昆明龍膽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步探究

趙明智1張慶芝2趙萌萌3陳鈺沁1*

1.昆明醫(yī)科大學(xué)海源學(xué)院，云南昆明650106；2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500；3. 黑龍江省傳染病防治院，黑龍江哈爾濱150500

目的：為昆明龍膽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究提供參考依據(jù)。方法：按照藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，對昆明龍膽進行較為系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。結(jié)果：對昆明龍膽的植物來源、藥材性狀、顯微鑒別、理化鑒別及檢查進行描述。結(jié)論：初步制定昆明龍膽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

昆明龍膽；鑒別；檢查

龍膽，苦，寒，歸肝、膽經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉肝膽火的功效。用于濕熱黃疸、陰癢陰腫、帶下、濕熱瘙癢、肝火目赤、耳鳴耳聾、脅痛口苦、驚風(fēng)抽搐[1]。《中華人民共和國藥典》(2015年版)收載龍膽品種為：龍膽科植物條葉龍膽Gentianamanshurica. Kitag、龍膽Gentianascabra. Bge、三花龍膽Gentianatriflora.或堅龍膽gentianarigescens. Franch.的干燥根及根莖[1]。條葉龍膽、龍膽和三花龍膽主要分布在東北地區(qū)，以野生為主，兼有部分栽培品供應(yīng)市場。堅龍膽主要分布在云南、四川、廣西、湖南及貴州等海拔在1100～3000m的山坡草地、灌木叢、林下及山谷中。由于連年采挖，資源銳減，使得尋找堅龍膽資源的研究成為必要。

昆明龍膽與堅龍膽為同屬植物，為龍膽科Gentianaceae龍膽屬Gentiana植物昆明龍膽Gentianaduclouxii. Franch的干燥全草，分布于滇中山區(qū)。《中華人民共和國藥典》(2015年版)中規(guī)定堅龍膽含龍膽苦苷不得少于1.5%[1]。文獻報道昆明龍膽不同部位龍膽苦苷含量均大于2.4%[2]。可以初步為昆明龍膽作為堅龍膽的資源提供依據(jù)。為有效開發(fā)和利用昆明龍膽這一資源，特對昆明龍膽全草進行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為今后昆明龍膽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供詳盡的科學(xué)依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器RM 2235輪轉(zhuǎn)式切片機(德國Leica)、高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)、80i生物數(shù)碼攝影顯微鏡(日本Nikon)、HI1220熔片爐(德國Leica)、恒溫水浴鍋(深圳國華儀器廠)、101A-2電熱干燥箱(寧波自動化儀表廠)、KQ-3200B超聲波清洗器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)、CS101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶試驗設(shè)備廠)、ZHWY-103D 恒溫振蕩箱(上海智城分析儀器制造有限公司)、JJ1000型精密電子天平(常熟雙杰測試儀器廠)、BS224S 分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)、CS101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶試驗設(shè)備廠)、電阻爐(上海意豐電爐有限公司)、高效液相色譜儀(Dionex Ultimate 3000 系列，USA、色譜柱：依利特惠杰型 (4.6×250mm，5μm)、薄層層析硅膠G板(青島海洋化工廠)；

1.2材料龍膽苦苷對照品(批號：110770-200611，中國藥品生物制品檢定所)。甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。昆明龍膽見表1，由云南中醫(yī)學(xué)院張慶芝教授鑒定。

表1　昆明龍膽的來源

2　方法與結(jié)果

2.1植物來源標(biāo)本來源見表1，經(jīng)鑒定為龍膽科植物昆明龍膽GentianaDuclouxiiFranch.，標(biāo)本存于云南中醫(yī)學(xué)院標(biāo)本館。

本品為多年生草本，高3～5cm。須根肉質(zhì)。主莖直立或平臥呈匍匐狀，淡黃褐色，長可達8～9cm，有分枝。葉大部分基生，呈蓮座狀，葉片匙形或矩圓狀倒披針形，先端鈍圓，基部漸狹，長1～4cm，寬0.5～1.2cm，邊緣微外卷，光滑，葉柄具狹翅，長1～4cm；莖生葉2～3對，與基生葉相似而略小，葉片長8～10mm，寬2.5～3mm，葉柄長1～10mm。花枝2～8個呈黃綠色，由葉腋中抽出，具1～3朵花，花簇生于枝端；無花梗；花萼呈狹倒錐形，長1～1.5cm，裂片小，呈三角形或鉆形，先端急尖，彎缺圓形或截形，長1～2mm；花冠呈薔薇色，漏斗形，冠檐具多數(shù)藍色斑點，長3～4cm，裂片卵狀三角形，長4～5mm，先端鈍，全緣，褶偏斜，長1.5～2mm，邊緣有整齊細(xì)齒；雄蕊不整齊，著生于冠筒下部，花絲線形，長10～14mm，花藥矩圓形，長1～1.3mm，子房呈線狀橢圓形，兩端漸狹，長1.2～1.5cm，柄長1～1.9cm，花柱線形，長3～4mm，柱頭2裂，裂片線形。蒴果，橢圓形，長1.7～2cm，柄長至2cm；種子矩圓形，淡黃色，有光澤，長約1mm，表面具蜂窩狀網(wǎng)隙。與文獻表述一致[3]。見圖1。

2.2藥材性狀根據(jù)應(yīng)用情況及擴大昆明龍膽應(yīng)用范圍，本品藥用部位選用全草。通過對新平磨盤山、峨山縣塔甸鄉(xiāng)、新化光頭山三個產(chǎn)地產(chǎn)昆明龍膽藥材的比較，性狀無明顯差異。根莖多直生，呈圓柱形，呈不規(guī)則結(jié)節(jié)狀，長約1～3cm，直徑約0.1～0.3cm。表面暗灰棕色或棕褐色，上有殘莖殘留，基部可見殘存麟葉，周圍和下端著生多數(shù)細(xì)長的根。根呈圓柱形，細(xì)長，稍彎曲，長5～9cm，直徑約0.1～0.3cm，有的外皮脫落。表面淡黃色或黃棕色，有縱皺紋及支根痕，質(zhì)堅硬，易折斷，斷面可見白色木心。葉大部分基生，呈蓮座狀，葉片匙形或矩圓狀倒披針形，先端鈍圓，基部長漸狹，邊緣微外卷，光滑，長1～4cm，寬0.5～1.2cm，中脈在上面不明顯或凹下，在下面稍突起，葉柄長1～3.5cm，具狹翅；莖生葉2～3對，與基生葉相似而略小，葉片長8～10mm，寬2.5～3mm，葉柄長1～10mm。氣微味苦。與文獻表述一致[4]，見圖2。

2.3顯微鑒別

2.3.1根橫切面復(fù)表皮由2列細(xì)胞組成，細(xì)胞壁在角隅處增厚。皮層為3～8列細(xì)胞，細(xì)胞類圓形或切向延長成長圓形。內(nèi)皮層細(xì)胞明顯，類方形或長方形，每個細(xì)胞被縱向壁分割為2～5個子細(xì)胞。韌皮部較寬廣，有散在的篩管群。外側(cè)細(xì)胞較大，呈多角形，內(nèi)側(cè)細(xì)胞較小，呈類方形，韌皮部細(xì)胞排列緊密。形成層不明顯。木質(zhì)部排列呈環(huán)狀；導(dǎo)管呈放射狀緊密排列，內(nèi)側(cè)導(dǎo)管大小相近，較整齊。射線細(xì)胞1到多列不等。髓部較寬廣，有眾多散在的髓維管束。與文獻表述一致[4]。2.3.2根莖橫切面木栓層數(shù)列，外側(cè)易脫落,可見根跡維管束。皮層為3～8列細(xì)胞，細(xì)胞類圓形或切向延長成長圓形。內(nèi)皮層細(xì)胞明顯，長方形或類方形，每個細(xì)胞被縱向壁分割為2～5個子細(xì)胞。維管束4個，韌皮部寬廣，有散在的篩管群。韌皮部細(xì)胞排列緊密。束中形成層較明顯，束間形成層不明顯。導(dǎo)管呈放射狀緊密排列，內(nèi)側(cè)導(dǎo)管較小，外側(cè)導(dǎo)管較大，較整齊。髓部寬廣，有眾多散在的髓維管束。皮層韌皮薄壁細(xì)胞及髓部薄壁細(xì)胞中均含有細(xì)小的草酸鈣棱晶及針晶。見圖3。

2.3.3葉橫切面上下表面呈波狀。①上下表皮由1列細(xì)胞組成，外被角質(zhì)層，排列較整齊。上表皮細(xì)胞較大。下表皮細(xì)胞較小，氣孔少見。②柵欄組織由1～3列長柵狀細(xì)胞組成，不通過主脈。海綿組織排列疏松。③主脈維管束雙韌型，呈圓形。側(cè)脈維管束8個，雙韌型，左右對稱，大小交替排列。與文獻表述一致[4]。2.3.4粉末特征黃綠色，氣味微苦。①花粉粒常見，單個或數(shù)個存在，直徑3～20μm。②導(dǎo)管常見具緣紋孔導(dǎo)管及螺紋導(dǎo)管。具緣紋孔導(dǎo)管直徑8～35μm，螺紋導(dǎo)管直徑10～15μm。③內(nèi)皮層細(xì)胞類方形或長形，細(xì)胞壁念珠狀增厚。④韌皮薄壁細(xì)胞類圓形或類方形，細(xì)胞壁較厚，可見細(xì)胞間隙，直徑40～70μm。⑤葉下表皮細(xì)胞形狀不規(guī)則，細(xì)胞壁波狀彎曲，氣孔不等式，副衛(wèi)細(xì)胞3～4個。⑥可見大量油滴，直徑2～25μm。⑦葉上表皮細(xì)胞呈多角形、類圓形、類方形，直徑約50～110μm。細(xì)胞壁薄，呈念珠狀增厚。見圖4。

2.4理化鑒別取不同產(chǎn)地、不同部位藥材粉末約1g，加甲醇10mL，超聲處理45min，放置室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，濃縮至5mL，作為供試品溶液，另取龍膽苦苷對照品5.0mg加甲醇溶解，定容至10mL，制成0.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，照《中華人民共和國藥典》(2015年版四部通則0502薄層色譜法)進行試驗，吸取上述溶液各5μL，分別點于同一硅膠G板薄層板上，以三氯甲烷：甲醇 (5∶1)為展開系統(tǒng)，展開后，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇溶液顯色，在105℃加熱至半點顯色清晰。結(jié)果表明，供試品溶液與對照品龍膽苦苷溶液在相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。見圖5。

2.5檢查

2.5.1水分按照《中華人民共和國藥典》(2015年版四部通則0832水分測定法第二法)測定各產(chǎn)地昆明龍膽藥材水分含量，結(jié)果見表2。平均值為10.16%。根據(jù)測定情況結(jié)合一般養(yǎng)護經(jīng)驗，水分限量不超過12.0%。

2.5.2總灰分及酸不溶性灰分按照《中華人民共和國藥典》(2015年版四部通則2302灰分測定法)測定各產(chǎn)地昆明龍膽藥材總灰分(表3)及酸不溶性灰分(表4)。

由于本品產(chǎn)地不同，及采收時間稍有差異，灰分限量確定為不超過9.0%，酸不溶性灰分限量確定為不超過5.0%。

2.5.3重金屬檢查按照《中華人民共和國藥典》(2015年版四部通則0821重金屬檢查法第二法)對昆明龍膽藥材進行重金屬檢查，昆明龍膽藥材五個批次供試品溶液顏色均比對照品溶液顏色淺，說明五個批次昆明龍膽藥材中重金屬不超過10ppm，檢查結(jié)果符合規(guī)定。表明昆明龍膽重金屬檢查合格。

表2　昆明龍膽含水量測定結(jié)果

表3　昆明龍膽總灰分測定結(jié)果

表4　昆明龍膽酸不溶性灰分測定結(jié)果

2.5.4浸出物按照《中華人民共和國藥典》(2015年版四部通則2201浸出物測定法)測定熱水浸出物結(jié)果見表5；冷水浸出物結(jié)果見表6；熱醇浸出物結(jié)果見表7；冷醇浸出物結(jié)果見表8。

表5　水溶性浸出物(熱浸法)測定結(jié)果

表6　水溶性浸出物(冷浸法)測定結(jié)果

表7　醇溶性浸出物(熱浸法)測定結(jié)果

表8　醇溶性浸出物(冷浸法)測定結(jié)果

由于本品產(chǎn)地、采收時間等對藥材質(zhì)量有影響，適當(dāng)下浮來設(shè)定限度較符合情況，因而限量確定為熱水浸出物不少于24.0%；冷水浸出物不少于21.0%；熱醇浸出物不少于24.0%；冷醇浸出物不少于18.0%。

4　討論

龍膽始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代醫(yī)書都有重要記載，傳統(tǒng)認(rèn)為，龍膽具有清熱燥濕、瀉肝膽火的功效，主治濕熱黃疸、陰腫陰癢、帶下、濕疹瘙癢、目赤、耳聾、脅痛、口苦、驚風(fēng)抽搐等癥。其主要成分龍膽苦苷具有抗炎[5]、鎮(zhèn)痛[6]、保肝[7]、健胃[8]作用。另外，有文獻報道，龍膽苦苷可抑制人肝癌細(xì)胞的增殖[9]、對人肺腺癌細(xì)胞株A549有一定的抑制作用[10]、能增加膽汁分泌量[11]、具有抗菌和清除自由基作用[12]、有一定的體外抑菌效果[13]及對胃腸平滑肌有松弛作用[14]。

昆明龍膽為龍膽科龍膽屬植物，此屬植物大都具有清熱利濕的功效是治療黃疸、肝炎、頭痛發(fā)燒的主藥，經(jīng)理化鑒別及薄層色譜鑒別，均證明昆明龍膽含有龍膽苦苷成分，采用高效液相色譜法對昆明龍膽進行含量測定，結(jié)果表明昆明龍膽中龍膽苦苷的含量超過《中華人民共和國藥典》(2005年版)對龍膽藥材1.0%的含量限度要求[16]，可以為有效開發(fā)昆明龍膽這一資源提供依據(jù)。

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 莊緒會，張超，張慶芝.昆明龍膽不同部位龍膽苦苷的含量測定[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2010,31(1):55,58.

[3] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會．《中國植物志》[M].北京：科學(xué)出版社，2006.

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[5]陳雷，王海波，孫曉麗，等．龍膽苦苷鎮(zhèn)痛抗炎藥理作用研究[J]．天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2008,20(5):903-906.

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[7] 劉占文，陳長勛，金若敏，等．龍膽苦苷的保肝作用研究[J].中草藥,2002，33(1)：74-77.

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(編輯：陶希睿)

The Preliminary Study on Quality Criterion ofGentianaDuclouxii.Franch

ZHAO Mingzhi1ZHANG Qingzhi2ZHAO Mengmeng3CHEN Yuqin1*

1.Kunming Medical University Haiyuan College, Kunming 650106,China；2.Yunnan University of TCM,Kunming 650500，China；3.Heilongjiang Hospital for Prevention and Treatment of Tuberculosis, Harbin,150500,China

Objective to provide reference for the establishment of quality criterion ofGentianaDuclouxii.Franch. MethodBy According to the requirement of the quality standard of the medicinal , has been systematically investigated the quality of Gentiana Duclouxii.Franch. Result To describe Plant origin、Medicinal properties、Microscopic identification、Physical and chemical identification、Physicalchemical identification and inspect ofGentianaDuclouxii.Franch. Conclusion preliminary formulate the quality criterion ofGentianaDuclouxii.Franch.

GentianaDuclouxii.Franch; Identify; Inspect

2016-06-29

趙明智(1984-)，男，助教，碩士研究生。

陳鈺沁，E-mail:cyq379@126.com

R282.5

A

1007-8517(2016)16-0033-05