麻疹、風疹、脊髓灰質炎IgG抗體檢測及影響因素分析

李淑杰 靳鳳珍

【摘要】目的：為了了解適齡兒童接種麻疹、風疹、脊髓灰質炎疫苗后IgG抗體產生情況，評價該地區不同人群免疫規劃工作質量和水平，及時發現解決免疫規劃工作中存在的問題。方法：根據《呼倫貝爾市兒童免疫效果監測實施方案》，2013年、2014年分別對莫力達瓦達斡爾族自治旗（以下簡稱莫旗）21個鄉鎮的0～15歲適齡兒童進行了麻疹、風疹、脊髓灰質炎IgG抗體的檢測，利用酶聯免疫吸附試驗（間接ELISA）法。結果：2013年共檢測4763人，2014年共檢測3553人，麻疹IgG陽性率2013年是84.1%，2014年是73.0%；風疹陽性率2013年91.7%，2014年87.6%；脊髓灰質炎陽性率2013年85.4%，2014年88.7%。經過x2檢驗，2013年麻疹、風疹、脊髓灰質炎IgG抗體檢測結果陽性率各年齡組均有差異，2014年麻疹、風疹IgG抗體陽性率各年齡組有差異，脊髓灰質炎IgG抗體陽性率各年齡組無差異。討論：差異存在的主要原因是兩年的抽樣數量差距大，還有樣品采集和處理、試劑的使用、方法的選擇、環境溫濕度的控制、儀器的使用、人員操作技術、樣品采集的對象的免疫史不同也是主要影響。在以后的抽樣、樣品處理、方法的選擇、實驗的操作等加強管理和合理安排，提高專業人員業務技能、做好實驗室的內部質量控制，確保檢測結果的準確可靠；計劃免疫醫生查遺補漏，加強疫苗的接種的及時率和覆蓋率，減少或杜絕少種和漏種的現象發生。

【關鍵詞】IgG抗體；檢測；麻疹；風疹；脊髓灰質炎；酶聯免疫吸附試驗

1 研究資料與方法

使用ELISA麻疹/風疹/脊髓灰質炎IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）。

1.1 樣品的采集

用一次性采血針采集末梢血（手指血或耳垂血）用一次性采血管吸取20ul，加到預先盛有180ul的生理鹽水帶蓋的離心管中，待血球自然沉降到管底后便可直接取上清液檢測。

1.2 實驗步驟

按照麻疹、風疹、脊髓灰質炎IgG抗體檢測試劑盒使用說明書的檢測方法進行檢測。

1.3 儀器

酶標儀Thermo Multiskan MK3型，Wellwash4、MK2洗板機，微量移液器。

1.4 試劑

2013、2014年均使用同一個廠家同一名稱的麻疹、風疹、脊髓灰質炎IgG抗體檢測試劑盒，批號不同。

2 結果

麻疹、風疹、脊髓灰質炎病毒IgG抗體通過計算CUT OFF（CO）值判定結果。麻疹a空白孔OD值不大于0.07；b陽性對照A值大于0.5；c陰性對照A值小于0.15，實驗成立。風疹、脊髓灰質炎：陰性對照OD值≤0.15，陽性對照OD值≥陰性對照OD的2.1倍，實驗成立。所有實驗均符合內部質量控制要求，實驗全部成立。

經過x2檢驗，2013年麻疹、風疹、脊髓灰質炎IgG抗體檢測結果陽性率各年齡組均有差異，2014年麻疹、風疹IgG抗體陽性率各年齡組有差異，脊髓灰質炎IgG抗體陽性率各年齡組無差異。2013年和2014年麻疹、風疹、脊髓灰質炎IgG抗體檢測結果陽性率均有統計學意義。（按α=0.05水準）。

3 討論

1）樣品數量，樣品采集量少，抽樣誤差較大，陽性率較低，比如2013年0～2歲年齡組，樣品量不足300人，這個年齡組的陽性率普遍較低。還有2013年采集樣品4763人，2014年采集樣品3553人，同比2013年陽性率高于2014年陽性率；2）個體差異，這是主要原因，采集的個體不同，疫苗接種次數不同，2013年兒童麻疹的免疫次數大多是兩三次甚至四次，2014年麻疹的免疫次數大部分是一兩次，風疹免疫次數2013年大部分兩次甚至三次，2014年大部分一兩次，甚至有些沒有免疫史，免疫次數少或者沒有免疫史造成抗體的產生量不足，陽性率也低；3）同一個體不同時間采集，抗體量也不同，隨著時間的延長，抗體消減，2012—2014年內蒙古自治區消除麻疹行動方案，力爭麻疹2014年發病率控制在1/100萬以下，2014年消除麻疹，2012年、2013年對8月齡至14歲以下兒童開展麻疹風疹的疫苗查漏補種，對2013年的抗體檢測陽性率的提高有很大作用；4）檢測的環境條件，溫度控制在18～25℃，濕度控制在30%～80%之間，2013年檢測的平均溫度23.5℃，濕度68%，2014年平均18℃，濕度69%，2014年的檢測室內環境溫度較低，影響了酶標記物與樣品的結合以及顯色劑的顯色反應；5）樣品的采集和制備，溶血的樣品對檢測的吸光度有很大影響，溶血樣品中的蛋白量增加，吸光度值偏大，造成假陽性，2013年溶血的樣品較2014年的溶血的樣品數多，假陽性也增加。

綜上所述，排除或減少了影響因素，保證使用間接ELISA法檢測IgG抗體的結果的準確可靠，應加強實驗室的科學管理，在工作中逐步改進設施和實驗條件，依據試劑盒和相關操作文件，制定本實驗的標準操作規程，嚴格對實驗條件、試劑、人員進行監督和質量控制，減少實驗的誤差降低不確定度，增加檢測數據的可信度；另外疾控機構加強計劃免疫的監督和指導，督促防疫工作者經常深入基層調查了解適齡兒童的疫苗接種情況，管理好流動兒童的疫苗接種，定期查遺補漏，盡量做到所有兒童均能按時按程序接種疫苗，以確保抗體水平逐年上升，以切實保證計劃免疫兒童有效預防相應傳染病，為計劃免疫的疫苗接種的效果評價提供依據。

參考文獻

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