住院患者Rh表型血清學分析及臨床應用

吳爭勝　江　濤

住院患者Rh表型血清學分析及臨床應用

吳爭勝江濤

目的 了解浙江地區住院患者Rh表型分布規律，建立Rh表型庫為本地區血液中心合理備血、建立稀有表型血源資料庫提供依據。方法 用Rh表型微柱凝膠分型卡測定Rh表型D、C、E、c、e。結果 經統計分析浙江地區住院患者有效數據29338例，D、C、E抗原的陽性率分別為99.54%、89.51%和47.56%，Rh陽性表型分布規律為CCDee＞ CcDEe＞ CcDee＞ ccDEE＞ ccDEe＞ CCDEe＞ CcDEE＞ ccDee＞CCDEE，Rh陰性表型分布規律為Ccdee＞ ccdee＞ CCdee＞ ccdEe＞ CcdEe。結論 掌握本地區住院患者的Rh血型系統表型的分布狀況，為血液中心及時提供Rh配型相合的血液，防止高頻抗體的產生，對保障合理、安全用血具有重要臨床意義。

住院患者 Rh表型 調查分析

在人類紅細胞血型系統中，Rh血型是目前國際輸血協會確認除ABO血型系統以外最具復雜性和重要性的血型系統，也是最具多態性和免疫原性的血型系統之一，具有重要的臨床意義。近年來，隨著現代輸血醫學理念的不斷更新，人們逐漸認識到除常規檢測的D抗原外，其余C/c、E/e抗原也具有較強的免疫原性，在臨床輸血中極可能引起嚴重的溶血性輸血反應，其現實意義也越來越受重視。據世界各國報道的RhE/e和RhC/c引起的免疫反應分別可達14.0%和10.7%［1］。因此在血液免疫學研究中，必須進行Rh表型分析和相容性輸注才能有效預防輸血反應的發生。現開展針對浙江地區住院患者Rh表型分型的統計，分析表型分布規律，為臨床合理儲備用血，建立稀有表型檔案，保證臨床輸血安全提供依據［2］。現將調查統計報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 本院自2013年6月至2014年1月記錄的入院患者共29338例，各留取EDTA-K2抗凝血標本2ml。其中男13811例，女15527例；年齡9d～103歲。均為漢族，屬地為浙江省且所有觀察對象彼此之間無血緣關系。

1.2試劑 安迪博特Rh血型分型卡由江陰利博醫藥生物技術有限公司生產，3批IgG 抗-D，抗-C、抗-c、抗-E、抗-e（效價均≥64）分別由德國Biotest和上海血液生物醫藥有限責任公司生產，篩選細胞（瑞士達亞美公司），氯仿（北京化工廠），上述試劑均經國家PP認證并在有效期內使用。

1.3儀器 樣本離心機（BASO 2005-1 CENTRIFUGE，BASO 2002-2）、RH表型離心機（LB-3000醫用低速離心機）、生物顯微鏡（CX31RTSF-2）、血型孵育振蕩器（澳大利亞 anthos Thermostar）、4℃冰箱［MBR-506D（H）］。

1.4血型血清學試驗 （1）Rh血型：采用微柱凝膠技術（MGT）進行操作，用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）真空抗凝采血管抽取受檢者靜脈血2ml，離心取壓積紅細胞制成2%～3%的紅細胞懸液，取50μl分別加入Rh表型凝膠卡中置于專用離心機內，離心10min后，取出微柱凝膠卡目測判讀。如果紅細胞沉積在微柱凝膠管底部，表明無相應的抗原抗體反應，為陰性；如果紅細胞聚集在微柱凝膠管上部，則表明有抗原抗體反應，為陽性結果。如果發生凝膠管拖尾現象，分別用單克隆抗-E、抗-C、抗-c、抗-e再次進行確認試驗。Rh陰性者分別用三批IgG抗D鑒定。（2）吸收放散試驗：用人源抗-c、抗-e分別做吸收放散試驗，以確認患者紅細胞上是否存在-c、-e抗原，采用37℃吸收60min，氯仿放散，放散液與篩選細胞用微柱凝膠卡檢測是否存在相應的抗體。

1.5統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

本次調查顯示，在浙江地區RhD陽性人群中，Rh表型分布規律為CCDee＞ CcDEe＞ CcDee＞ ccDEE＞ccDEe＞CCDEe＞ CcDEE＞ ccDee＞ CCDEE，頻率分別為41.50% 、36.77%、10.46%、5.83%、3.68%、0.93%、0.51%、0.31%和0.003%。RhD陰性人群中，Rh表型分布規律為Ccdee＞ ccdee＞ CCdee＞ ccdEe＞ CcdEe，頻率分別為45.52＞38.81＞5.97＞5.22＞4.48。

2.1ABO、RH表型的基本分布情況 見表1。

表1　ABO、RH表型的基本分布情況［n（%）］

2.2C、E表型分布與性別的關系 見表2。

2.3C、E表型分布與D抗原關系 見表3。

表3　C、E表型分布與D抗原關系［n（%）］

3　討論

Rh血型在已發現的30個紅細胞血型系統中是抗原數量最大和最具有復雜多態性的血型系統，包含國際輸血協會認證的Rh1～Rh57之間已發現的50個血型抗原［1］。其具有復雜核苷酸多態性的兩個基因編碼（5個）與輸血和新生兒溶血病相關的主要抗原：RHD編碼D（RH1）抗原，RHCE編碼C（RH2）、E（RH3）、c（RH4）和 e（RH5）抗原，以及其余45個低頻和高頻抗原［3］。用抗-D、抗-C、抗- c、抗-E、抗-e 能區分18個最常見表型。由于遺傳性狀、民族和地區的差異，其分布具有顯著的人種和地域差異［3，4］。Rh陽性人群中，浙江漢族人群具有所有9種Rh陽性表型，其中包含用吸收放散試驗證實的罕見的CCDEE型。CCDEE表型的基因型可為DCE/DCE或DCE/dCE。基因型的推斷依賴于相關人群中的單體型頻率。但不同人群的單體型頻率有較大差異，Rz（DCE）和ry（dCE）單體型在任何人群中均很罕見，有待PCR-SSP實驗基因檢測的進一步證實。在Rh陽性人群中，浙江漢族優勢表型是CCDee（41.5%）和CcDEe（36.77%），與文獻報道基本一致［4，5］。本資料中，Rh血型與性別分組、ABO血型系統分組之間無明顯差異。Rh陽性與Rh陰性的人群調查中表型的頻率分布差異有統計學意義（P＜0.01），Ccdee、ccdee為Rh陰性人群的高頻抗原，均是Rh陽性人群的低頻抗原，可為臨床輸血中稀有血型同表型輸注提供依據。

根據《臨床輸血技術規范》的要求，各基層醫院均開展了D抗原的檢測，但對C、E、c、e的常規檢測目前尚屬空白，其隨機輸注給這些因子提供了免疫機會，患者若接受這些抗原的血液，可刺激機體產生相應的不規則抗體。當患者再次接受含有此抗體的血液時，可引發遲發型溶血性輸血反應。在臨床隨機輸血引起的配血不合原因中，Rh血型系統的免疫抗體占50.75%（抗-D 除外），常見的Rh 系統免疫抗體有抗-E、抗-e、抗-C、抗-c 以及復合抗體抗-Ce 和抗-cE。從表1可以看出，CCee表型屬于高頻表型，反復輸血患者在隨機輸血中分別有57.73%、47.55%和46.50%的可能產生抗-c、抗-E或抗-c+ E 抗體，存在著高度引發輸血反應的潛在風險，需尋找與自身相同表型的安全血液輸注。但對于低頻表型ccEE 和極低頻表型CCEe、CCEE 的患者同表型輸血相當困難，病情緊急時，甚至危及生命。鑒于Rh表型的這種分布多態性決定了其在臨床輸血中的重要性和復雜性，因此建議采用計算機系統建立浙江地區人群Rh血型表型數據庫，并建立稀有表型檔案，以滿足特殊人群搶救用血需要。

［1］Koelewijn J M，VrijkotleR T G，Vander School CE.Effect of screening for red cell anti-bodies other than anti-D to detect hemolytic disease of the foetus and newborn. A postulation study in Netherlands. Transfusion，2009，48（5）：941～952.

［2］杜肖剛，王麗榮，武洪琳.長治地區住院患者ABO及Rh血型分布調查分析.長治醫學院學報，2013，27（3）：182～184.

［3］Pham BN，Peyrard T，Juszczak G.Analysis of RhCE variants among 806 individuals in France： considerations for transfusion safety，with emphasis on patients with sickle cell disease.Transfusi on，2011，51（6）：1249～1260.

［4］王愛梅，丁玉琴，馬鳳巧.豫西南地區漢族人群ABO及Rh血型分布調查.實用預防醫學，2005，12（3）：581～582.

［5］劉亞普.濮陽市人群ABO及Rh血型分布調查.臨床醫學，2003，23（3）：58.

Objective To study the distribution of Rh blood group system of Zhejiang area and build Rh phenotype library， helping local blood center to establish rare phenotype blood library， and guide clinical reasonable blood preparation. Methods Using micro column gel cards to detect transfusion patients' Rh phenotypes including D， C， E， c， and e. Results 29338 inpatients in Zhejiang area were effective and analysed， Data showed that positivity rate of D antigen was 99.54%， meanwhile C antigen was 89.51% and E antigen was 47.56%. The phenotype distribution in RhD positive was CCDee＞ CcDEe＞ CcDee＞ ccDEE＞ ccDEe＞ CCDEe＞ CcDEE＞ ccDee＞ CCDEE， however in RhD negative phenotype was Ccdee＞ ccdee＞ CCdee＞ccdEe＞ CcdEe. Conclusion We showed the distribution of Rh blood group system in Zhejiang area， to provide the data basis for reasonable blood usage and Rh matched blood supply in time， avoid the generation of high-frequency antibodies. These results have important clinical signifi cances for ensuring the reasonable and safety blood usage.

Hospitalized patients Rh phenotype Investigation and analysis

310014 浙江省人民醫院