金銀花尺蠖蛹粗多糖體外抗氧化活性

向玉勇，章志堅，殷培峰，張元昶

（滁州學院 生物與食品工程學院，安徽 滁州 239000）

金銀花尺蠖蛹粗多糖體外抗氧化活性

向玉勇，章志堅，殷培峰，張元昶

（滁州學院 生物與食品工程學院，安徽 滁州 239000）

為了解金銀花尺蠖Heterolocha jinyinhuaphaga蛹粗多糖的抗氧化活性，采用熱水浸提法提取了金銀花尺蠖蛹粗多糖，并測定其體外抗氧化活性。結果表明：金銀花尺蠖蛹粗多糖對二苯代苦味酰自由基（DPPH），羥基自由基（·OH）以及超氧陰離子自由基（O2-·）具有一定的清除作用，在其質量濃度為0.2 g·L-1時的清除率分別為39.32%，35.62%和26.75%。隨著多糖質量濃度的增大，對自由基的清除率也逐漸增加，當質量濃度上升到1.2 g·L-1時，清除率分別為74.93%，61.59%和47.84%，分別增加了35.61%，25.97%和21.09%，差異達顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質量濃度范圍內，清除率與粗多糖質量濃度之間呈顯著的線性關系。金銀花尺蠖蛹粗多糖具有較強的體外抗氧化活性，具有開發為抗氧化劑的潛力。圖4參20

昆蟲學；金銀花尺蠖；蛹粗多糖；自由基；抗氧化活性

生物體在有氧代謝過程中會不斷地產生自由基。自由基的產生和清除在正常情況下是動態平衡的，對機體傷害小，如果自由基的產生量超過生物體的清除能力，生物體就會出現相應的疾病［1］。如人體內主要的活性氧自由基，即羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·）可經過一系列反應生成其他氧自由基，累積過多就會損傷生物膜中的不飽和脂肪酸，引起脂質過氧化，從而導致機體衰老、心血管疾病及腫瘤的發生［2］，嚴重危害人體健康。因此，尋找合適的抗氧化劑來清除活性氧自由基，使機體免受損傷就顯得非常重要。多糖是由多個單糖分子失水、縮合而成的一類結構復雜的生物大分子，在動物、植物、微生物和海藻中普遍存在［3］。許多研究表明：多糖具有特殊的生物活性和藥理特性，能夠清除自由基，減少慢性疾病的發生，并且基本無毒副作用［4-7］，在醫藥衛生和食品行業具有很好應用價值，受到了人們的廣泛關注。因此，從生物體內篩選出具有很強抗氧化能力的多糖成分已成為當今的一個研究熱點。近年來，許多學者從植物和真菌中提取了多糖，并進行了抗氧化研究。對動物，特別是昆蟲源多糖的提取及抗氧化活性研究的報道也較多，如何釗等［8］研究了黃粉蟲Tenebrio molitor多糖體外抗氧化活性，結果表明：黃粉蟲多糖對二苯代苦味酰自由基（DPPH）清除率為50%時的質量濃度（IC50值）為0.65 g·L-1，在質量濃度為1.76 g·L-1時，對羥基自由基（·OH）的清除率達到99.3%，但在實驗范圍內，對超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率均在50%以下，效果較不顯著；武忠偉等［9］研究了冬蟲夏草Cordyceps sinensis與富硒蟲草多糖的抗氧化活性，認為冬蟲夏草和富硒蟲草多糖對羥基自由基（·OH），超氧陰離子自由基（O2-·）和 H2O2具有較好的清除作用，當 100 mg·L-1多糖溶液添加量分別高于 80，40，90 μL時，各組多糖對3種自由基的抑制率均高于50%；趙秋蓉等［10］對冬蟲夏草多糖進行純化和抗氧化活性研究，認為冬蟲夏草多糖質量濃度為0.5 g·L-1時，對羥基自由基（·OH）的清除率已經達55.56%，當質量濃度為3.0 g·L-1時，清除率為65.74%，在質量濃度為0.5 g·L-1時，對超氧陰離子自由基（O2-·）的抑制率為20.99%，當質量濃度為1.0 g·L-1時，抑制率為25.62%。這些研究結果表明：昆蟲種類不同以及多糖的提取方法不同，其多糖的抗氧化活性均存在一定差異。昆蟲是自然界中種類最多、數量最大的類群，是地球上尚未被充分開發利用的巨大生物資源。中國昆蟲種類繁多，占世界種類總量的10%［11］，尚有很多種類未進行相關研究。因此，進行昆蟲多糖的抗氧化活性研究對開發新藥源具有非常重要的意義。金銀花尺蠖Heterolocha jinyinhuaphaga屬鱗翅目Lepidoptera尺蛾科Geometridae昆蟲，別名拱腰蟲，是近年來新發現的金銀花Lonicera japonica主要食葉害蟲之一，在河南、山東、安徽等地已有報道［12-15］。該蟲常將金銀花葉片咬成缺刻或孔洞，甚至將葉片全部吃光，造成金銀花的大面積減產，給金銀花生產帶來嚴重損失。目前，國內對金銀花尺蠖的生物學特性及防治方面已有一些研究［12-16］，而有關其多糖抗氧化活性研究還未見報道。筆者已研究了金銀花尺蠖的一些生物學特性，初步建立了實驗室種群，現在前期研究的基礎上提取金銀花尺蠖蛹粗多糖，進行體外抗氧化活性研究，以期為從昆蟲中開發天然抗氧化藥物和功能食品提供科學參考，從而達到變害為寶的目的。

1　材料與方法

1.1試劑

石油醚（60～90℃），正丁醇，氯仿，體積分數為95%乙醇，丙酮，葡萄糖，無水乙醇，苯酚，濃硫酸，碳酸氫鈉，三氯乙酸，三氯化鐵，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，鐵氰化鉀，二苯代苦味酰自由基（DPPH），鄰菲羅啉，硫酸亞鐵，過氧化氫，二乙基三胺五乙酸（DTPA），三羥甲基胺基甲烷，鹽酸，鄰苯三酚，標準抗壞血酸（Vc），均為國產分析純。

1.2主要儀器

人工氣候箱（RXZ-288A型，寧波江南儀器制造廠），索氏提取器（鄭州興華玻璃儀器廠），旋轉蒸發儀（RE-52AA型，上海亞榮生化儀器廠），循環水式多用真空泵（SHB-Ⅲ型，鄭州長城科工貿有限公司），800B型臺式離心機（上海市安亭科學儀器制造廠），高速萬能粉碎機（FW80型，天津市泰斯特儀器有限公司），HH-6數顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造廠），精密烘箱（20011243型，西班牙Selecta公司），85-2磁力加熱攪拌器（江蘇金壇紅凱儀器廠），723C可見分光光度計（上海欣茂儀器有限公司）。

1.3試驗方法

1.3.1供試昆蟲的飼養從安徽省明光市三界鎮野生金銀花上采集金銀花尺蠖幼蟲，放入罐頭瓶內，10 頭·瓶-1，然后放在人工氣候箱中用新鮮的金銀花葉片飼養，每天更換葉片，直至化蛹。人工氣候箱的光周期設置為光照期（L）∶暗期（D）=14∶10，相對濕度設置為（75±7）%，溫度設置為（25±1）℃。

1.3.2金銀花尺蠖蛹粗多糖的制備采用熱水浸提法［2］。取金銀花尺蠖蛹，經烘箱（45℃）干燥后粉碎，過40目篩。稱取金銀花尺蠖蛹粉末10.0 g，置于索氏提取器中，加入石油醚（沸點60～90℃）100.0 mL，70℃回流提取1 h脫脂，抽濾，濃縮回收溶劑，重復2次。將濾渣經45℃烘干后置于燒瓶中，加入10倍量的蒸餾水，在沸水浴中提取1 h，過濾，濾渣再用蒸餾水重復提取1次，將2次濾液合并。將濾液用旋轉蒸發儀（60℃）縮濃至一定體積，Sevage法除蛋白［17］，流動自來水透析24 h，再次濃縮，加入4倍體積的體積分數為95%乙醇，在4℃冰箱中過夜醇沉，離心10 min（4 000 r·min-1），沉淀用無水乙醇、丙酮各洗滌2次，低溫干燥至恒量，即得金銀花尺蠖蛹粗多糖。稱取一定量的粗多糖，用重蒸餾水溶解，并配制成不同濃度的試樣，待用。

1.3.3金銀花尺蠖蛹粗多糖質量分數測定蛹粗多糖質量分數的測定采用苯酚-硫酸比色法［18］。葡萄糖標準曲線的測定：取分析純葡萄糖于105℃烘箱中干燥至恒量，精密稱取50.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，即配制成0.5 g·L-1的葡萄糖標準溶液。用移液管精密移取0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL的葡萄糖標準溶液，分別置于50.0 mL容量瓶中，加蒸餾水定容，并搖勻。精確吸取上述溶液2.0 mL，置于具塞試管中，加質量分數為5%的苯酚1.0 mL，搖勻，快速滴加濃硫酸5 mL，搖勻，放置10 min，置沸水浴中加熱20 min后取出冷卻，以蒸餾水作空白對照，在490 nm處測定吸光度值。以葡萄糖質量濃度（mg·L-1）為橫坐標，吸光度值D（490）為縱坐標，繪制葡萄糖標準曲線，并回歸出標準曲線方程。樣品中粗多糖質量分數測定：稱取干燥至恒量的蛹粗多糖樣品100.0 mg，置于100 mL容量瓶中，加水溶解，搖勻，定容。精確吸取該溶液4.0 mL至50 mL容量瓶中，加水稀釋，搖勻，定容。按照葡萄糖標準曲線的測定方法測定吸光度值。實驗重復3次，采用葡萄糖標準曲線線性回歸方程算出樣品中粗多糖的平均質量分數。

1.3.4金銀花尺蠖蛹粗多糖總還原力測定參考李潤豐等［6］的方法。取各質量濃度粗多糖樣品液2.5 mL置于具塞試管中，然后加入0.2 mol·L-1磷酸鹽緩沖液（pH 6.6）2.5 mL和質量分數為1%鐵氰化鉀溶液2.5 mL，蓋上塞子充分搖勻，在50℃水浴鍋中保溫20 min，取出后快速冷卻，加入質量分數為10%三氯乙酸2.5 mL，充分搖勻后離心10 min（4 000 r·min-1），取上清液2.5 mL，加入質量分數為0.1%三氯化鐵0.5 mL和蒸餾水2.5 mL，充分搖勻后靜止10 min，在700 nm處測定吸光度值D（700），將樣品液換成蒸餾水進行參比測定實驗，用同濃度的維生素C作陽性對照。

1.3.5金銀花尺蠖蛹粗多糖清除二苯代苦味酰自由基（DPPH）試驗參照趙愛云等［7］的方法，稱取金銀花尺蠖蛹粗多糖，用蒸餾水配制成0.2，0.4，0.6，0.8，1.0和1.2 g·L-1等6種質量濃度。稱取20.0 mg 的DPPH置于500 mL容量瓶中，用無水乙醇溶解，并定容為0.1 mmol·L-1的溶液。精確量取2.0 mL DPPH溶液放入10 mL具塞試管中，分別加入2.0 mL各質量濃度的樣品溶液，充分混勻并靜置30 min，在517 nm處測定溶液吸光度值。實驗重復3次，以蒸餾水作空白對照，以維生素C作陽性對照。按下面公式計算蛹粗多糖清除DPPH自由基的能力：DPPH自由基清除率（%）=［D0-（D2-D1）/D0］×100。其中：D0為2.0 mL DPPH溶液+2.0 mL蒸餾水的吸光度值；D1為2.0 mL乙醇+2.0 mL樣品溶液的吸光度值；D2為2.0 mL DPPH溶液+2.0 mL粗多糖溶液的吸光度值。

1.3.6金銀花尺蠖蛹粗多糖清除羥自由基（·OH）試驗參照單斌等［2］的方法，設空白組、對照組和樣品組。在各樣品管中分別依次加入1.0 mL不同質量濃度（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 g·L-1）蛹粗多糖溶液，再依次分別加入0.4 mol·L-1PBS緩沖溶液（pH 7.4）1.0 mL，2.5 mmol·L-1鄰菲羅啉溶液1.0 mL，2.5 mmol·L-1硫酸亞鐵溶液1.0 mL，20.0 mmol·L-1過氧化氫溶液0.5 mL；空白組中把樣品溶液換成1.0 mL蒸餾水；對照組中用1.5 mL蒸餾水代替過氧化氫溶液和樣品溶液。各管搖勻，在37℃恒溫水浴中準確反應1 h后，迅速在536 nm處測定吸光度值。以等質量濃度的維生素C為陽性對照，實驗重復3次。根據下列公式計算粗多糖樣品對羥自由基（·OH）的清除率［2］：羥自由基（·OH）清除率（%）=［（D2-D1）/（D0-D1）］×100。其中：D0，D1，D2分別為標準對照組吸光度值、空白組吸光度值和樣品組吸光度值。

1.3.7金銀花尺蠖蛹粗多糖清除超氧陰離子自由基（O2-·）試驗采用鄰苯三酚自氧化法［2］，取3 mmol·L-1DTPA溶液2.0 mL和150 mmol·L-1Tris-HCl緩沖液2.0 mL（pH 8.2）放入10 mL具塞試管中，分別加入0.5 mL各質量濃度（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 g·L-1）待測粗多糖溶液，經25℃恒溫水浴保溫20 min后，立即加入經25℃預熱的45 mmol·L-1鄰苯三酚溶液0.1 mL，迅速搖勻，在3.5 min內，隔30 s在325 nm處測定1次溶液的吸光度值，計算吸光度值隨時間的變化率。實驗重復3次，以等質量濃度的維生素C為陽性對照，并與空白溶液比較。根據下列公式計算粗多糖樣品對超氧陰離子自由基的清除率。超氧陰離子自由基清除率（%）=［（F0-Fx）/F0］×100。其中：F0為空白溶液吸光度值隨時間的變化率；Fx為被測溶液吸光度值隨時間的變化率。

2　數據統計

采用SPSS 11.5統計軟件進行數據處理和統計學分析，采用Duncan氏新復極差法在P＜0.05水平上進行差異顯著性檢驗。

3　結果與分析

3.1葡萄糖標準曲線及粗多糖含量

將所測定各質量濃度標準葡萄糖溶液的吸光度值D（490）為縱坐標，對應的葡萄糖質量濃度C（mg· L-1）為橫坐標繪制標準曲線，得出吸光度D（490）與葡萄糖標準品質量濃度 C關系的線性回歸方程為D （490）=0.069 3C-0.050 9，相關系數R2為0.992 2，說明葡萄糖在2.5～15.0 mg·L-1范圍內，其質量濃度與吸光度線性關系良好。此回歸方程可以很好地擬合試驗數據。按1.3.3方法步驟測得金銀花尺蠖蛹中粗多糖質量分數（干質量）為34.6 g·kg-1。

3.2金銀花尺蠖蛹粗多糖總還原力

在反應體系中，鐵氰化鉀與還原物質發生反應生成亞鐵氰化鉀，再與Fe3+反應生成普魯士藍，在700 nm處有特異性吸收，吸光度值越大，說明樣品的還原能力就越強。一般情況下，物質的還原能力越強，其抗氧化活性就越強。圖1顯示：金銀花尺蠖蛹粗多糖具有較強的還原能力，在2.0 g·L-1時的吸光度值為0.67，隨質量濃度的增加吸光度值也在增加。當質量濃度上升到10.0 g·L-1時，吸光度值增加到1.72，差異達顯著水平（P＜0.05），說明還原力隨粗多糖質量濃度的增加而增大，但各質量濃度下的還原力均低于維生素C，差異達顯著水平（P＜0.05）。在2.0～10.0 g·L-1的質量濃度范圍內，多糖的總還原力（y）與質量濃度（x）之間呈顯著的線性關系，擬合方程為y=0.133x+0.372，R2=0.994 0。

3.3金銀花尺蠖蛹粗多糖對二苯代苦味酰自由基（DPPH）自由基的清除作用

由圖2可知：金銀花尺蠖蛹粗多糖對DPPH自由基具有較強的清除作用，在0.2 g·L-1時的清除率為39.32%，隨著粗多糖質量濃度的增加，對DPPH自由基的清除率也逐漸增加。當質量濃度上升到1.2 g· L-1時，清除率已達到74.93%，增加了35.61%，差異達顯著水平（P＜0.05）。各質量濃度下的清除率均低于維生素C，差異達顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質量濃度范圍內，粗多糖對DPPH自由基的清除率（y）與質量濃度（x）之間呈顯著的線性關系，擬合方程為y=35.381x+32.215，R2=0.999 8。

3.4金銀花尺蠖蛹粗多糖對羥自由基（·OH）的清除作用

圖1　蛹粗多糖的總還原力Figure 1　General reducing ability of pupae raw polysaccharide

圖2　蛹粗多糖對DPPH的清除作用Figure 2　Clearing effects of pupae raw polysaccharide on DPPH

由圖3可知：在體外，金銀花尺蠖蛹粗多糖能明顯地清除羥自由基（·OH），在0.2 g·L-1時，即顯示較強清除能力，清除率達35.62%，其清除作用隨著粗多糖質量濃度的升高而逐漸加強，當質量濃度上升到1.2 g·L-1時，清除率已達到61.59%，增加了25.97%，差異達顯著水平（P＜0.05），各質量濃度下的清除率均低于維生素C，差異達顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質量濃度范圍內，粗多糖對羥自由基（·OH）的清除率（y）與質量濃度（x）之間呈顯著的線性關系，擬合方程為y=26.787x+29.907，R2=0.995 9。

3.5金銀花尺蠖蛹粗多糖對超氧陰離子自由基（O2-·）的清除作用

由圖4可知：金銀花尺蠖蛹粗多糖在體外對超氧陰離子自由基（O2-·）具有一定的清除作用，具有直接清除超氧陰離子自由基的抗氧化活性。在0.2 g·L-1時，對超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率為26.75%，隨著多糖質量濃度的增加，對超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率也逐漸增加，當質量濃度上升到1.2 g·L-1時，清除率達47.84%，增加了21.09%，差異達顯著水平（P＜0.05），各質量濃度下的清除率均低于維生素C，差異達顯著水平（P＜0.05）。在0.2～1.2 g·L-1的質量濃度范圍內，粗多糖對超氧陰離子自由基（O2-·）的清除率（y）與質量濃度（x）之間呈顯著的線性關系，擬合方程為y=21.037x+23.101，R2= 0.986 4。

圖3　蛹粗多糖對羥自由基（·OH）的清除作用Figure 3　Clearing effects of pupae raw polysaccharide on hydroxy radical

圖4　蛹粗多糖對超氧陰離子自由基（O2-·）的清除作用Figure 4　Clearing effects of pupae raw polysaccharide on superoxide anion radical

4　討論

昆蟲體內多糖豐富，是開發多糖資源的良好材料。目前，有關昆蟲多糖抗氧化活性研究已有較多的報道［8-10］。筆者在室內提取了金銀花尺蠖蛹粗多糖，并測定了其體外抗氧化活性。結果表明：金銀花尺蠖蛹粗多糖在體外均能明顯地清除DPPH自由基、羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·），并且清除作用隨著多糖質量濃度的增加而不斷增強，呈明顯的線性關系。這表明金銀花尺蠖蛹粗多糖具有較強的抗氧化作用，能夠清除機體內產生的氧自由基，因而在抗氧化、防衰老方面具有一定的作用，是一種很有開發潛力的資源昆蟲，在醫學及人類保健事業上具有潛在的開發利用價值。

何釗等［8］的研究表明：在試驗范圍內，黃粉蟲多糖對DPPH自由基、羥自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2-·）的清除能力隨質量濃度的增加而增強，存在一定的量效關系，但沒有呈線形關系，當上升到一定質量濃度時，清除率趨于穩定。筆者的研究則表明：在試驗范圍內，金銀花尺蠖蛹粗多糖對這3種自由基的清除作用與多糖質量濃度之間呈明顯的線性關系。這說明金銀花尺蠖蛹粗多糖對自由基的清除能力比較穩定，顯示了持續的抗氧化效果。武忠偉等［9］和趙秋蓉等［10］的研究也顯示：冬蟲夏草對自由基具有一定的清除作用，但都沒有做陽性對照試驗。筆者的研究表明：金銀花尺蠖蛹粗多糖對3種自由基的清除作用均低于維生素C，這與何釗等［8］的研究結果一致。作為一種酸性多羥化合物，維生素C是通過逐級供給電子來清除活性氧自由基的［19］，可能由于金銀花尺蠖蛹粗多糖供電子能力不及維生素C，所以對自由基的清除作用低于維生素C。

本試驗只是研究金銀花尺蠖蛹粗多糖的體外抗氧化活性，不能代表其體內清除自由基的實際情況，今后還需進行動物活體試驗，以進一步明確其粗多糖抗氧化活性。本試驗中金銀花尺蠖蛹粗多糖對3種自由基的清除活性不同，這可能與多糖中不同組分所起的作用不同有關［20］。今后還需對金銀花尺蠖蛹粗多糖的各組分進行分離純化，研究其分子結構與生物活性之間的構效關系，探討其抗氧化的藥理作用，并且還需研究金銀花尺蠖人工大量繁殖技術，為進一步開發利用提供科學依據。

［1］MARX J L.Oxygen free radicals linked to many diseases［J］.Science，1987，235（4788）：529-531.

［2］單斌，張衛國，趙強，等.苦瓜多糖抗氧化活性的研究［J］.安徽農業科學，2009，37（1）：182-183，229. SHAN Bin，ZHANG Weiguo，ZHAO Qiang，et al.Study on the antioxidant activity of polysaccharide from Momordica Charantia L.［J］.J Anhui Agric Sci，2009，37（1）：182-183，229.

［3］姚新生.天然藥物化學［M］.2版.北京：人民衛生出版社，2001：53-65.

［4］李爾春，丁紅軍，金曉輝.天然植物多糖的結構及活性研究進展［J］.食品與藥品，2007，9（4）：51-53. LI Erchun，DING Hongjun，JIN Xiaohui.Research advance on structure and biological activities of natural plant polysaccharides［J］.Food Drug，2007，9（4）：51-53.

［5］林桂蘭，許學書，連文思.食用菇多糖提取物體外抗氧化性能研究［J］.華東理工大學學報：自然科學版，2006，32（3）：278-281，317. LIN Guilan，XU Xueshu，LIAN Wensi.Antioxidant activity of edible mushroom polysaccharide extracts in vitro［J］.J East China Univ Sci Technol Nat Sci Ed，2006，32（3）：278-281，317.

［6］李潤豐，刁華娟，彭友舜，等.板栗多糖的提取及抗氧化活性研究［J］.食品研究與開發，2011，32（8）：21-25. LI Runfeng，DIAO Huajuan，PENG Youshun，et al.Study on the antioxidant activity of polysaccharide from chestnut ［J］.Food Res Dev，2011，32（8）：21-25.

［7］趙愛云，胡博路，杭瑚，等.部分植物抗氧化活性的初步研究［J］.天然產物研究與開發，2000，12（3）：42-44. ZHAO Aiyun，HU Bolu，HANG Hu，et al.The primary study on antioxidant activity of some plants［J］.Nat Prod Res Dev，2000，12（3）：42-44.

［8］何釗，馮穎，孫龍，等.黃粉蟲多糖響應面法提取及抗氧化活性［J］.食品與生物技術學報，2011，30（5）：641 -647. HE Zhao，FENG Ying，SUN Long，et al.Optimization of extraction process by using response surface methodology and antioxidant activity of polysaccharide from yellow mealworm［J］.J Food Sci Biotechnol，2011，30（5）：641-647.

［9］武忠偉，許桂芳，曹蓬勃，等.蟲草與富硒蟲草多糖的體外抗氧化活性［J］.食品科學，2011，32（9）：76-78. WU Zhongwei，XU Guifang，CAO Pengbo，et al.Antioxidant activity of intracellular and extracellular polysaccharides from regular and Se-rich Cordyceps sinensis in vitro［J］.Food Sci，2011，32（9）：76-78.

［10］趙秋蓉，李建平，吳迪，等.冬蟲夏草中多糖提取、純化及抗氧化性能的研究［J］.中國農學通報，2012，28 （15）：238-242. ZHAO Qiurong，LI Jianping，WU Di，et al.Studies on the extraction，purification of the polysaccharides in Cordyceps sinensis and its autoxidation［J］.Chin Agric Sci Bull，2012，28（15）：238-242.

［11］彩萬志，龐雄飛，花保禎，等.普通昆蟲學［M］.北京：中國農業大學出版社，2001∶8.

［12］張文冉，高殿滑，劉愛華.金銀花尺蠖的發生與氣象條件的關系［J］.氣象與環境科學，2007，30（4）：60-62. ZHANG Wenran，GAO Dianhua，LIU Aihua.Relationships between honeysuckle geometrid occurrence and meteorological condition［J］.Meterol Environ Sci，2007，30（4）：60-62.

［13］王廣軍，張國彥，王江蓉.金銀花尺蠖的發生規律與防治技術［J］.中國植保導刊，2005，25（3）：22-23. WANG Guangjun，ZHANG Guoyan，WANG Jiangrong.Occuring rules of Heterolocha jinyinhuaphaga and its control measures［J］.Chin Plant Prot，2005，25（3）：22-23.

［14］姜敏，邵明果，趙伯林.金銀花尺蠖的生物學特性及防治技術［J］.山東林業科技，2005（1）：62-63. JIANG Min，SHAO Mingguo，ZHAO Bolin.Biology characteristic of Heterolocha jinyinhuaphaga and its control methods［J］.J Shandong For Sci Technol，2005（1）：62-63.

［15］向玉勇，劉克忠，殷培峰，等.安徽金銀花尺蠖的生物學特性［J］.滁州學院學報，2010，12（5）：35-37. XIANG Yuyong，LIU Kezhong，YIN Peifeng，et al.The biological characteristics of honeysuckle geometrid in Anhui Province［J］.J Chuzhou Univ，2010，12（5）：35-37.

［16］倪云霞，劉新濤，劉玉霞，等.金銀花尺蠖的藥劑防治［J］.河南農業科學，2006（12）：78-79. NI Yunxia，LIU Xintao，LIU Yuxia，et al.Pesticide control to Heterolocha jinyinhuaphaga Chu［J］.J Henan Agric Sci，2006（12）：78-79.

［17］劉玲，安家彥，金鳳燮.蛹蟲草多糖除雜蛋白的方法［J］.大連輕工業學院學報，2002，21（1）：33-37. LIU Ling，AN Jiayan，JIN Fengxie.Method of protein removal in cordyceps polysaccharide［J］.J Dalian Inst Ligh Industry，2002，21（1）：33-37.

［18］王文平，郭祀遠，李琳，等.苯酚-硫酸法測定野木瓜中多糖含量的研究［J］.食品科學，2007，28（4）：276-279. WANG Wenping，GUO Qiyuan，LI Lin，et al.Assay study on content of polysaccharides in Stanuntonia chinensis by phenol-sulfuric acid method［J］.Food Sci，2007，28（4）：276-279.

［19］譚榀新，葉濤，劉湘新，等.植物提取物抗氧化成分及機理研究進展［J］.食品科學，2010，31（15）：288-292. TAN Pinxin，YE Tao，LIU Xiangxin，et al.Research advances in antioxidant composition of botanical extracts and their action mechanisms［J］.Food Sci，2010，31（15）：288-292.

［20］孫玉軍，陳彥，王松華，等.胡蘿卜多糖體外抗氧化活性研究［J］.熱帶作物學報，2011，32（3）：403-406. SUN Yujun，CHEN Yan，WANG Songhua，et al.Study on antioxidant activity of polysaccharide from carrot（Daucus carota var.sativa）in vitro［J］.Chin J Trop Crop，2011，32（3）：403-406.

Antioxidant activity of raw polysaccharides from Heterolocha jinyinhuaphaga pupae in vitro

XIANG Yuyong，ZHANG Zhijian，YIN Peifeng，ZHANG Yuanchang
（School of Biology and Food Engineering，Chuzhou University，Chuzhou 239000，Anhui，China）

To understand the antioxidant activity of raw polysaccharides from the Heterolocha jinyinhuaphaga pupae，and provide scientific reference for development of natural antioxidant drugs and performance foods，raw polysaccharides from the pupae was extracted in the laboratory by the hot water extraction method.Then，its antioxidant activity was studied in vitro by spectrophotometric method.Its clearing rate on 2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl（DPPH），·OH and O2-.was tested with 3 replications，and vitamin C was used as control.Results showed that with a dosage of 0.2 g·L-1，the clearing rate of raw polysaccharide was 39.3%on DPPH，35.6%on·OH，and 26.8%on O2-.With a 1.2 g·L-1dosage，the clearing rate increased to 74.9%for DPPH，61.6%for·OH，and 47.8%for O2-.From 0.2 to 1.2 g·L-1，the clearing rate showed a linear connection to the dosages.Thus，the pupae polysaccharide of H.jinyinhuaphaga had a high antioxidant activity，which could potentially be exploited.［Ch，4 fig.20 ref.］

entomology；Heterolocha jinyinhuaphaga；raw polysaccharides of pupae；free radicals；antioxidant activity

S763.42；Q964

A

2095-0756（2016）05-0862-07

10.11833/j.issn.2095-0756.2016.05.019

2015-10-28；

2015-11-20

安徽高等學校自然科學研究項目（KJ2012B123）；安徽省高等學校優秀青年人才基金資助項目（2009SQRZ147）；國家級大學生創新創業訓練計劃項目（201210377006）

向玉勇，副教授，博士，從事資源昆蟲學及害蟲防治研究。E-mail：xyy10657@sohu.com

浙 江 農 林 大 學 學 報，2016，33（5）：862-868

Journal of Zhejiang A＆F University