產γ-氨基丁酸益生菌的篩選及其生物活性研究

徐毓琴，戴茜茜，唐慧琴，谷笑笑，潘康成,2,

(1.四川農業大學 動物醫學院，四川 成都 611130；2.動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130)

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產γ-氨基丁酸益生菌的篩選及其生物活性研究

徐毓琴1，戴茜茜1，唐慧琴1，谷笑笑1，潘康成1,2,*

(1.四川農業大學 動物醫學院，四川 成都 611130；2.動物疫病與人類健康四川省重點實驗室，四川 成都 611130)

為篩選具有生物拮抗活性和耐酸耐膽鹽能力的高產γ-氨基丁酸(GABA)的菌株，首先從待分離樣品中篩選出可疑菌株，然后利用紙層析和HPLC-MS進行定性和定量分析，篩選出高產γ-氨基丁酸菌株。通過細菌形態、生理生化特性并結合細菌16S rDNA序列對高產菌株進行鑒定，同時研究高產菌株對3株動物性病原菌的生物拮抗作用及其耐酸耐膽鹽試驗。結果表明，從泡菜中篩選出的菌株GA8為高產γ-氨基丁酸菌株，在含有1% L-谷氨酸鈉的GYP培養基中37℃培養48 h，產GABA量達3.50 g·L-1，經鑒定該菌株為植物乳桿菌；該菌株全菌液和上清液對雞白痢沙門氏菌、雞源大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，其菌體懸液無抑菌能力；該菌初始活菌數為108cfu·mL-1時，在pH 2.0的酸性環境中處理4 h后，活菌數能達到106cfu·mL-1以上；0.3%膽鹽處理4 h，活菌數達到103cfu·mL-1左右。表明所篩選出的產γ-氨基丁酸菌株GA8具有一定的抑菌性能和耐酸能力，但耐膽鹽能力不強。

益生菌；γ-氨基丁酸；生物拮抗；耐酸耐膽鹽

γ-氨基丁酸(GABA)是一種非蛋白質氨基酸，在谷氨酸脫羧酶催化下，由谷氨酸脫羧形成[1]，具有鎮靜安神、免疫調節、降血壓、抗疲勞、改善腦機能等多種生理功能，能參與體內多種代謝活動。Ali等[2]研究發現，給大鼠口服γ-氨基丁酸，可以改善順鉑引起的大鼠腎毒性副作用，而且不影響順鉑的治療效果。乳酸菌[3]、酵母菌[4]、紅曲霉菌[5]等都能利用自身合成的谷氨酸脫羧酶將谷氨酸轉化成GABA，并普遍應用于食品、藥品加工行業中，以提高人類的免疫能力，起到保健的作用。Ratanaburee等[6-7]將產GABA乳酸菌應用于食品和飲料中以改善口感，增強體質。Diana等[8]在西班牙奶酪中分離出產GABA的乳酸菌，發現該菌有調節血壓的作用。穆琳[9]在酸奶中添加GABA乳酸菌，提高了酸奶的發酵工藝與品質。

由于抗生素的大量使用，耐藥性、藥物殘留及環境污染等問題顯現出來，所以開發出替代抗生素的新型產品迫在眉睫，而益生菌作為功能性食品成為新的研究熱點。產γ-氨基丁酸益生菌優化與發酵方面的研究已經非常廣泛，但有關產γ-氨基丁酸益生菌生物拮抗作用及耐酸耐膽鹽方面的研究卻相對較少，本試驗旨在篩選出產γ-氨基丁酸益生菌并探討其抑菌效果及耐酸耐膽鹽能力。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

土壤和糞便采自四川農業大學雅安校區實驗農場，泡菜、酸奶、豆豉購自四川省雅安市吉選超市。雞白痢沙門氏菌CVCC533購自中國獸醫藥品監察所，雞源大腸桿菌和金黃色葡萄球菌由本實驗室保存。

γ-氨基丁酸標準品(SIGMA)，豬膽鹽(北京奧博星生物技術公司)，L-谷氨酸鈉和茚三酮(成都科龍化工試劑廠。電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)，高速冷凍離心機(SIGMA)，液相色譜質譜連用儀(AGILENT)，PCR儀(BIO-RAD)，凝膠成像系統(BIO-RAD)。

營養肉湯：牛肉膏5 g、蛋白胨10 g、氯化鈉5 g、蒸餾水1 L，pH 7.2，1×105Pa高壓滅菌15～20 min。如制備營養瓊脂，在上述成分中加入1.8%的瓊脂粉。

GYP種子培養基：葡萄糖10 g、酵母粉10 g、蛋白胨5 g、醋酸鈉2 g、硫酸鎂0.02 g、硫酸錳0.001 g、硫酸亞鐵0.001 g、氯化鈉0.001 g、蒸餾水1 L，pH 6.8，1×105Pa高壓滅菌15 ～ 20 min。

GYP發酵培養基：GYP種子培養基中添加1%的L-谷氨酸鈉，pH 6.8，1×105Pa高壓滅菌15 ～ 20 min。

1.2方法

1.2.1菌株的分離與純化

分別稱取10 g土壤、泡菜、酸奶、豆豉及糞便樣品，加入帶玻璃珠的90 mL滅菌生理鹽水三角瓶中，37℃ 200 r·min-1振蕩1 h，無菌操作進行10倍遞進稀釋，取濃度10-4和10-5稀釋液0.1 mL分別涂布于營養瓊脂平板上，分別37℃恒溫需氧或厭氧培養2 d。挑取單菌落進行革蘭氏染色，將革蘭氏染色陽性菌進行反復劃線純化后，接種于斜面培養基中，4℃保存備用。

1.2.2產GABA菌株的初步篩選

將得到的菌株接種于100 mL GYP種子培養基中，30℃靜置或振蕩培養1 d，然后以5%的接種量接入100 mL GYP發酵培養基中，30℃靜置或振蕩培養2 d，對發酵液進行GABA定性和相對定量分析。

定性分析：采用紙層析法進行測定，展開劑(正丁醇∶冰醋酸∶水體積比為4∶1∶3)中含有4 g·L-1的茚三酮溶液便于顯色。取發酵上清液0.5 μL進行點樣，以5 g·L-1GABA標準樣品作為對照，當展開劑距層析紙前沿1 cm時，將層析紙放于70℃烘箱中顯色5 min，觀察是否有GABA斑點。

相對定量分析：將GABA標準品配成0.10，0.20，0.30，0.40，0.50，0.60，0.70，0.80，0.90，1.00 g·L-1的標準溶液。對標準溶液和上述待測發酵液進行點樣、展層等同定性分析，將標準溶液與待測樣品一致的斑點剪下，洗脫，洗脫液在分光光度計波長520 nm處測定吸光值。繪制GABA標準曲線并求出回歸曲線，將待測樣品的吸光值帶入公式，求出待測樣品的GABA含量。

1.2.3發酵液中GABA的精確定量分析

采用HPLC-MS法對上述獲得相對高產的產GABA菌株發酵液進行精確的定量分析，用50 g·L-1三氯乙酸稀釋上述相對高產菌株培養48 h的上清液至適當濃度，處理后的樣品送北京輝奧生物技術有限公司檢測GABA含量。

1.2.4高產γ-氨基丁酸菌株的初步鑒定

參考《伯杰細菌鑒定手冊》[10]測定，對產GABA菌株進行菌落、細菌形態和生理生化特性鑒定。同時參照文獻[11]對分離菌株進行需氧性試驗。

1.2.5菌株的16S rDNA序列同源性分析

按照參考文獻[12]的方法提取細菌基因組DNA，采用16S rDNA基因通用引物進行PCR擴增，PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察，若出現1.5 kb左右的單一條帶，則證明已成功擴增目標16S rDNA序列。將PCR產物送成都擎科梓熙生物技術有限公司測序。將得到的16S rDNA序列提交到NCBI核酸數據庫中進行BLAST在線對比，并在GenBank核酸數據庫中隨機選取部分細菌16S rDNA序列，用MEGA 5.2軟件進行多序列對比，構建系統發育樹，確定菌株的進化分類地位。

1.2.6高產GABA菌株對3株病原菌的生物拮抗試驗

將篩選出的高產GABA菌株和3株病原菌分別接種于營養肉湯中，病原菌置于37℃，150 r·min-1水浴振蕩24 h，產GABA菌株置于37℃，30 r·min-1水浴振蕩24 h。用滅菌生理鹽水分別對3株病原菌進行稀釋并調整菌液濃度為1×106cfu·mL-1。將高產GABA菌株培養物(全菌液)4 000 g離心10 min，上清液經濾膜過濾后得無菌上清液；同時將菌體沉淀物用滅菌生理鹽水洗滌3次后重懸，調整菌體濃度為2×108cfu·mL-1，即為菌體懸液，然后參照文獻[13]，每組3個重復，用牛津杯法分別進行全菌液、上清液和菌體重懸液對3株病原菌的生物拮抗試驗。

1.2.7菌株的耐酸試驗

取pH為2，3，4的滅菌營養肉湯各4.5 mL，分別接入0.5 mL的高產GABA菌株菌懸液(菌濃度為1×108cfu·mL-1)，37℃恒溫培養0，2和4 h，每組3個重復，采用平板計數法檢測細菌活菌數。

1.2.8菌株的耐膽鹽試驗

取含豬膽鹽為0.1%，0.2%，0.3%和0.4%的滅菌營養肉湯各4.5 mL，分別接入0.5 mL的高產GABA菌株菌懸液(菌濃度為1×108cfu·mL-1)，37℃恒溫培養0，2和4 h，每組3個重復，采用平板計數法檢測細菌活菌數。

1.2.9試驗數據處理

試驗得到的數據均用Excel進行記錄、整理。

2　結果與分析

2.1產GABA菌株的初步篩選

將分離純化得到的菌株制備菌種后，轉接于GYP發酵培養基，30℃靜置或振蕩培養2 d后，采用紙層析對發酵液進行GABA的定性檢測，結果發現，分離純化的所有菌株中，有16株產GABA(圖1)。將這16株GABA顯色的斑點，經洗脫后，在波長520 nm處測定吸收值并帶入標準曲線(y = 0.1238x + 0.1353，R2= 0.996 9，y表示吸光度，x表示GABA濃度)，計算γ-氨基丁酸的量，結果見表1。結果顯示，GA8號菌株產GABA量最高，產量為3.915 g·L-1。

2.2HPLC-MS法精確定量

挑選產GABA產量較高的的GA4，GA6，GA8，GA9和GA11號菌株，經發酵后采用HPLC-MS法檢測分析，根據GABA標準品圖譜(圖2-A)，發現樣品均在相同時間出現峰值(圖2-B)。GA4，GA6，GA8，GA9和GA11號菌株產GABA量分別為2.78，2.90，3.50，2.62和2.12 g·L-1，其中GA8號菌株產GABA量最高，檢測結果與初步篩選結果一致。

圖1　GABA紙層析定性檢測Fig.1　Qualitative detection of GABA by paper chromatography

表1不同菌株產γ-氨基丁酸量的結果

Table 1The results of γ-Aminobutyric acid produced by different strains

菌株編號GABA量/(g·L-1)菌株編號GABA量/(g·L-1)GA11.138GA93.411GA21.130GA103.188GA32.622GA113.473GA43.210GA122.980GA53.125GA132.622GA63.600GA142.380GA73.107GA152.703GA83.915GA162.461

圖2　GABA標準品(A)和樣品(B)圖譜Fig.2　The HPLC-MS maps of GABA standard (A) and the sample (B)

2.3菌株的初步鑒定

將產量最高的GA8菌株接種于營養瓊脂培養基，37℃需氧及厭氧培養48 h，細菌菌落為乳白色、針尖大小、圓形凸起、邊緣整齊、濕潤，厭氧或兼性厭氧。革蘭氏染色為陽性，顯微鏡下觀察為桿狀，單個、成對或成鏈狀。參考《伯杰細菌鑒定手冊》，菌株GA8的生理生化特征見表2。

2.4菌株的16S rRNA序列分析

以提取的菌株基因組DNA為模板，采用細菌16S rDNA通用引物進行PCR擴增，擴增產物經瓊脂凝膠電泳檢測，得到一條長度約1.5 kb的條帶，將其回收、測序，測得其序列長度為1 449 bp。

表2菌株GA8的生理生化特征

Table 2Physiological and biochemical property of GA8 strain

項目GA植物乳桿菌a葡萄糖Glucose++乳糖Lactose++半乳糖Galactose++麥芽糖Maltose++蔗糖Sucrose++棉籽糖Raffinose++菊糖Synanthrin+NS鼠李糖Rhamnose--蜜二糖Melibiose++纖維二糖Cellobiose++果糖Fructose++水楊苷Salicin++山梨醇Sorbitol++甘露醇Mannitol++明膠Gelatin--吲哚Indole--接觸酶Catalase--硫化氫Hydrogensulfide--

注：a表示《伯杰細菌鑒定手冊》上植物乳桿菌生理生化特征；“+”為陽性，“-”為陰性，NS為未檢測。

圖3　菌株GA8的16S rDNA系統進化樹Fig.3　Phylogenetic tree of GA8 strain based on the 16S rDNA sequence

將得到的序列與NCBI核酸數據庫中的基因序列進行BLAST比對，結果顯示，前100個序列相似性均為99%，其中確切命名為植物乳桿菌的就有77條序列，同源性達到99%。系統進化樹(圖3)顯示，菌株GA8的16S rRNA與已知的植物乳桿菌(Accession No.KJ779091)在一個分支上，相似性達100%。結合菌株GA8的菌落特征、細菌形態特征、生理生化特性與16S rRNA序列分析結果，確定菌株GA8為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)。

2.5菌株GA8對3株病原菌的生物拮抗作用

菌株GA8對3株病原菌的生物拮抗作用結果見表3。由表3可知，菌株GA8全菌液、上清液對雞白痢沙門氏菌、雞源大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，而菌體懸液對3株病原菌無抑制作用，表明菌株GA8對3株病原菌起抑制作用的不是細菌菌體而主要是上清液。

表3對致病菌的抑菌活性結果(Φ/mm)

Table 3The antibacterial activity against pathogenic bacteria (Φ/mm)

病原菌全菌液上清液菌體懸液雞白痢沙門氏菌16.10±0.2816.05±0.16—雞源大腸桿菌15.32±0.5011.48±0.20—金黃色葡萄球菌13.10±0.6613.10±0.32—

2.6耐酸試驗結果

胃液pH為3左右，且食物通過胃的時間一般為1～2 h，因此乳酸菌作為益生菌應該具有較好的耐酸性。從表4可以看出，菌株GA8初始活菌數為1.1×108cfu·mL-1，pH 2.0的環境中4 h后活菌數仍然在106cfu·mL-1以上，表明菌株GA8具有一定的耐酸性。

表4菌株GA8對酸的耐受性(lg cfu·mL-1)

Table 4The pH tolerance of strain GA8 (lg cfu·mL-1)

pH菌落數0h2h4h28.04±0.067.06±0.046.08±0.0738.04±0.068.10±0.128.61±0.0348.04±0.068.38±0.048.66±0.04

2.7菌株GA8耐豬膽鹽試驗

菌株通過胃液后會在小腸中遇到膽鹽，故菌株要有足夠的耐膽鹽能力才能在腸道內發揮作用。由表5可知，菌株GA8初始活菌數為1.1×108cfu·mL-1，0.1%膽鹽處理4 h活菌數能達到6.0×107cfu·mL-1以上，0.3%膽鹽處理4 h活菌數只能達到103cfu·mL-1左右，而0.4%膽鹽處理2 h后活菌數為0 cfu·mL-1，表明菌株GA8對膽鹽的耐受性不強。

表5菌株GA8對豬膽鹽的耐受性 (lg cfu·mL-1)

Table 5The bile salt-tolerance of Strain GA8 (lg cfu·mL-1)

豬膽鹽濃度/%菌落數0h2h4h0.18.04±0.067.78±0.027.84±0.040.28.04±0.064.64±0.093.94±0.130.38.04±0.063.10±0.143.10±0.140.48.04±0.0600

3　討論

3.1產GABA菌株的篩選

曾小群等[14]采用紙層析法從新疆酸馬奶中分離出產γ-氨基丁酸戊糖乳桿菌S5，在含1% L-谷氨酸鈉的MRS發酵培養基中培養，產γ-氨基丁酸量為1.61 g·L-1。Binh等[15]從朝鮮泡菜中分離出的短乳桿菌K203，發酵72 h后，可將60 g·L-1的L-谷氨酸轉化成γ-氨基丁酸，含量可高達44.4 g·L-1。謝芳等[16]從新鮮水牛乳中篩選出3株高產γ-氨基丁酸菌株G-24，G-25和G-29，鑒定為乳酸乳球菌乳酸亞種，在含有1%谷氨酸的MRS液體培養基中，產γ-氨基丁酸含量可達0.6 g·L-1。本試驗采用紙層析定性、HPLC-MS定量、生理生化檢驗和16S rDNA序列同源性分析篩選出一株產GABA菌株，命名為GA8，GABA產量為3.50 g·L-1，經鑒定為植物乳桿菌。菌株GA8產GABA量較高，為其他高產GABA益生菌的篩選和研究奠定了一定的基礎。各分離菌株產GABA量的不同，可能是樣品來源、菌株種類、發酵條件及L-谷氨酸鈉添加量的不同，造成GABA產量的不同。

3.2對病原菌的抑制效果

本試驗運用牛津杯法進行抑菌試驗，發現菌株GA8的全菌液和上清液有抑菌能力，而菌體懸液無抑菌效果，由此可以看出，菌株GA8具有一定的抑菌性。陳光明等[17]對內蒙古地區不同來源的乳酸菌進行抑菌試驗時發現，菌株代謝產物有較強抑菌活性而菌體本身并無抑菌活性，且對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用最強，對沙門氏菌抑菌作用較弱。李清等[18]從豆醬中分離的植物乳桿菌DJ-04對大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌都有不同程度的抑制作用。熊濤等[19]從豬糞中篩選出的羅伊氏乳桿菌發酵全菌液有較強的抑制作用，這與本研究不盡相同。本研究中菌株GA8全菌液和上清液對致病菌有較好的抑制作用，菌體本身則對致病菌無抑制作用，可能是上清液中的乳酸、某種酶或細菌素起到了抑菌作用，也可能上清液中還含有其他的抑菌物質，具體是哪種物質還需進一步研究。

3.3耐酸耐膽鹽效果

靳志強等[20]從飲料中篩選出的植物乳桿菌在pH 3環境中培養4 h后活菌數在106cfu·mL-1左右，可以在0.5%膽鹽中生長，有較好的耐膽鹽能力。Kabore等[21]從猴面包樹種子發酵產物中分離出的乳酸菌分別在pH 2.5和0.3%膽鹽中培養4 h后均有存活。本研究中菌液在pH 2時，培養4 h仍有存活，活菌數能達到106cfu·mL-1以上；在0.1%豬膽鹽中培養4 h后，活菌數能達到107cfu·mL-1以上，0.3%豬膽鹽中培養4 h后活菌數只能達到103cfu·mL-1左右，而在0.4%豬膽鹽中培養2 h后菌株不生長。表明本研究篩選出的產GABA植物乳桿菌有一定的耐酸能力，但耐膽鹽能力不強，可能是菌種性能不同所造成的。若作為微生態制劑應用于實際生產中，可使用包被等手段進行處理，以提高其在胃腸道中的存活率，充分發揮其作用。

[1]ROBERRTS E，FRANKEL S.γ-Aminobutyric acid in brain:Its formation from glutamic acid [J].Journal of Biological Chemistry，1950，187(1):55-63.

[2]ALI B H，AL-SALAM S，ZA’ABI M A，et al.Renoprotective effects of gamma-Aminobutyric acid on cisplatin-induced acute renal injury in rats [J].Basic &Clinical Pharmacology &Toxicology，2014，116(1):62-68.

[3]賢乾隆.產γ-氨基丁酸乳酸菌的篩選及其功能性發酵酸奶的研制[D].柳州:廣西科技大學，2013.

[4]蔣冬花，李杰，后家衡，等.水果表面高產γ-氨基丁酸酵母菌菌株的篩選、鑒定和發酵條件優化[J].浙江農業學報，2008，20(6):396-401.

[5]張圓林，王昌祿，陳勉華，等.高產γ-氨基丁酸的紅曲霉菌株篩選及發酵條件優化[J].食品科學技術學報，2014，32(5):35-40.

[6]RATANABUREE A，KANTACHOTE D，CHARERNJIRATRAKUL W，et al.Enhancement of γ-aminobutyric acid in a fermented red seaweed beverage by starter culture Lactobacillus plantarum DW12 [J].Electronic Journal of Biotechnology，2011，14(3):1.

[7]RATANABUREE A，KANTACHOTE D，CHARERNJIRATRAKUL W，et al.Enhancement of γ-aminobutyric acid (GABA) in Nham (Thai fermented pork sausage) using starter cultures of Lactobacillus namurensis NH2 and Pediococcus pentosaceus HN8[J].International Journal of Food Microbiology，2013，167(2):170-176.

[8]DIANA M，TRES A，QUILEZ J，et al.Spanish cheese screening and selection of lactic acid bacteria with high gamma-aminobutyric acid production [J].LWT-Food Science and Technology，2014，56(2):351-355.

[9]穆琳.產γ-氨基丁酸乳酸菌的研究與應用[D].杭州:浙江大學，2008.

[10]布坎南，吉本斯.伯杰.細菌鑒定手冊[M].北京:科學出版社，1984.

[11]ABE Y，UMEMURA S，SUGIMOTO K I，et al.Effect of green tea rich in γ-aminobutyric acid on blood pressure of Dahl salt-sensitive rats[J].American Journal of Hypertension，1995，8(1):74-79.

[12]黃銳之.細菌DNA的一種大量提取方法[J].微生物學通報，1991(1):47-50.

[13]劉冬梅，李理，楊曉泉，等.用牛津杯法測定益生菌的抑菌活力[J].食品研究與開發，2006，27(3):110-111.

[14]曾小群，盛姣鈴，潘道東，等.新疆酸馬奶中產γ-氨基丁酸乳酸菌的篩選與鑒定[J].中國食品學報，2013，13(10):191-196.

[15]BINH T T T，WAN-TAEK J，WOO-JIN J，et al.Optimization of γ-amino butyric acid production in a newly isolated Lactobacillus brevis[J].Biotechnology Letters，2014，36(1):93-98.

[16]謝芳，曾慶坤，楊承劍，等.水牛乳中高產γ-氨基丁酸乳酸菌的篩選與鑒定[J].中國釀造，2015，34(4):102-105.

[17]陳光明，于晨龍，楊曉宇，等.內蒙古地區不同來源乳酸菌對病原菌的體外抑菌試驗研究[J].黑龍江畜牧獸醫，2014，15(8):5-9.

[18]李清，王英，劉小莉，等.一株廣譜抑菌活性乳酸菌的篩選及特性研究[J].微生物學通報，2015，42(2):332-339.

[19]熊濤，鄧耀軍，廖良坤，等.羅伊氏乳桿菌NCU801的鑒定及抑菌性能研究[J].食品與發酵工業，2015，41(2):24-29.

[20]靳志強，王延祥，李平蘭，等.植物乳桿菌耐酸耐膽鹽的體外試驗及其降膽固醇作用[J].中國食品學報，2009，9(5):24-28.

[21]KABORE D，SAWADOGOLINGANI H，DICKO M H，et al.Acid resistance，bile tolerance and antimicrobial properties of dominant lactic acid bacteria isolated from traditional “maari” baobab seeds fermented condiment [J].African Journal of Biotechnology，2012，11(5):1197-1205.

(責任編輯侯春曉)

Screening of γ-aminobutyric acid-producing probiotics and characterization of its biological activity

XU Yu-qin1，DAI Xi-xi1，TANG Hui-qin1，GU Xiao-xiao1，PAN Kang-cheng1，2，*

(1.College of Veterinary Medicine，Sichuan Agricultural University，Chengdu 611130，China;2.Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province，Chengdu 611130，China)

The purpose of the present study was to screen a high γ-aminobutyric acid (GABA) -producing probiotics，which had the ability of biological antagonism and tolerance of acid and bile salt.The suspicious strains which producing GABA were analyzed qualitatively and quantitively by paper chromatography and high performance liquid chromatography and mass spectrometry (HPLC-MS).Combining the morphological，physiochemical properties with 16S rDNA sequencing analysis，a high GABA-producing bacterium was identified.Then the inhibition of this high GABA-producing strain against three pathogen bacteria from animal and the tolerance of acid and bile salt were performed.The results showed that the strain GA8 which isolated from pickle had high yield of GABA;it was cultured in GYP medium containing 1% L-glutamate at 37℃ for 48 h，the yield of GABA reached 3.50 g·L-1;it was identified as Lactobacillus plantarum.The bacteria liquid and supernatant of GA8 strain culture had some inhibitory effect on Salmonella pullorum，Escherichia coli and Staphylococcus aureus，and GA8 strain had no bacteriostasis ability.When the initial concentration of living bacteria was 108cfu·mL-1，the living bacteria could reach more than 106cfu·mL-1after cultured on medium with pH 2.0 for 4 h and 103cfu·mL-1after cultured on medium contained bile salt 0.3% for 4 h.The results indicated that the strain GA8 had some antibacterial properties and acid resistance，but bile salt resistant ability was not prominent.

probiotics;γ-aminobutyric acid;bioantagonism;acid and bile salt tolerance

浙江農業學報Acta Agriculturae Zhejiangensis，2016，28(3):502-508http://www.zjnyxb.cn

徐毓琴，戴茜茜，唐慧琴，等.產γ-氨基丁酸益生菌的篩選及其生物活性研究[J].浙江農業學報，2016，28(3):502-508.

10.3969/j.issn.1004-1524.2016.03.23

2015-08-03

“教育部長江學者和創新團隊發展計劃”創新團隊(IRT0848)；四川農業大學教學改革研究項目(X2011008)

徐毓琴(1990—)，女，四川眉山人，在讀碩士研究生，研究方向為動物微生態。E-mail:xuyuqinflavor@163.com

，潘康成，E-mail:pankangcheng71@126.com

S667.4

A

1004-1524(2016)03-0502-07