清亮飲對兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α表達的影響

高曉娟，朱寧云，回世洋

（1.遼寧中醫藥大學2013級碩士研究生，遼寧 沈陽 110032；2.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧 沈陽 110032）

清亮飲對兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α表達的影響

高曉娟1，朱寧云2，回世洋2

（1.遼寧中醫藥大學2013級碩士研究生，遼寧 沈陽 110032；2.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧 沈陽 110032）

目的：觀察清亮飲對兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α表達的影響.方法：將40只實驗兔隨機分為4組，A組10只為空白對照組，其余30只成功制造玻璃體積血模型后隨機分成3組各10只，B組為模型組，C組為中藥（清亮飲）組，D組為西藥（安妥碘）組。成功造模后于給藥4周及8周分別行玻璃體積血分級，各組治療8周后分別檢測玻璃體TNF-α、IL-6含量。結果：給藥8周后 C、D兩組玻璃體積血較前明顯減輕（P＜0.05），和A、B組比較差異均有統計學意義（P＜0.05）；B、 C、D三組中TNF-α、IL-6含量較A組明顯升高（P＜0.05），C組TNF-α、IL-6含量低于B、D組，組間比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論：清亮飲可促進兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α的吸收，對玻璃體積血后的視網膜具有保護作用。

玻璃體積血；兔模型；清亮飲；白介素-6 ；腫瘤壞死因子-α

玻璃體積血（vitreous hemorrhage）是眼外傷或多種視網膜血管性疾病的常見并發癥，因玻璃體內無血管，代謝緩慢，積血后很難吸收，后期可表現為視網膜表面和玻璃體內膜形成及過度增殖和纖維化， 導致增生性玻璃體視網膜病變 （proliferative vitreoretinopa-thy， PVR）等嚴重并發癥［1-2］。目前主要用玻璃體切割、抗凝、止血、超聲波等方法治療，效果并不理想，多年來我們根據中醫辨證論治及臨床經驗，自擬中藥方清亮飲治療玻璃體積血取得了滿意療效。我們通過檢測兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α含量，觀察清亮飲對促進玻璃體積血的吸收作用及機制，總結如下。

1　材料與方法

1.1材料

實驗動物。健康純種日本大耳白兔40只，由沈陽藥科大學實驗動物中心提供，兔齡2～3個月，雌雄各半，體質量1.5～2kg，適應性喂養1周，濕度適宜，動物分籠開架，保持通風，自由攝食飲水。經檢眼鏡、裂隙燈顯微鏡檢查眼前段及眼底均無明顯異常。

藥物。清亮飲組成為熟地、山藥、玄參、天花粉、黨參、黃芪、茺蔚子、白茅根，每劑藥煎好后濃縮至100mL放冰箱冷藏備用，藥物由遼寧省中醫藥大學附屬醫院制劑科經水煮醇沉濃縮為1.0g/mL。氯霉素滴眼液（8mL∶20mg），普羅碘銨注射液（安妥碘） 1支0.4g/2mL，復方托吡卡胺滴眼液（美多麗）1支10mL，1%丁卡因、氯胺酮、戊巴比妥鈉溶液等。

1.2方法

動物造模與分組。檢眼鏡、裂隙燈顯微鏡檢查眼前段及眼底均無明顯異常。造模前給予0.25%氯霉素滴眼液消炎3天，并將40只兔編號，隨機抽取10只為A組即空白對照組。其余30只造模：造模前生理鹽水清潔結膜囊，氯胺酮1mL/kg肌注麻醉或30g/L戊巴比妥鈉溶液（30mg/kg）作靜脈麻醉，美多麗充分散瞳，1%丁卡因滴眼行結膜表面麻醉，局部消毒后用1mL一次性注射器從兔耳緣靜脈取血0.5mL備用；迅速于距角鞏膜緣3mm處，經瞳孔直視下用7號針向著球心垂直刺入玻璃體腔，抽取玻璃體0.2mL后再注入自體血0.2mL，立即拔出針頭，輕壓針孔1min，點氯霉素滴眼液2滴。造模后3天繼續氯霉素滴眼液、美多麗滴眼液滴眼。24h后觀察眼底，對玻璃體積血進行分級，確認造模成功后再隨機分成3組，分別為B、C、D組。B組為模型組，C組為中藥（清亮飲）組，D組為西藥（安妥碘）組。

給藥方法。A、B組不給藥。C、D組造模24h后開始給藥，C組予清亮飲，按6mL/kg灌胃，每日2次。D組予安妥碘肌肉注射，每次0.125g，每日1次。

指標檢測。各組治療4周后觀察眼底行玻璃體積血分級，先以1% 阿托品滴眼散瞳，然后用檢眼鏡檢查并按Forrester 五級分類法記錄積血變化［3］。Ⅰ級為玻璃體完全不透明；Ⅱ級為有輕微光反射，但觀察不清眼底；Ⅲ級為可見部分眼底；Ⅳ級為玻璃體中央透明，周圍見少量不透明物，大部分眼底清楚；Ⅴ級為清晰玻璃體，眼底清晰可見。治療8周后，觀察眼底行玻璃體積血分級后收集玻璃體及眼球壁標本， 玻璃體積血分級方法同上。從玻璃體組織中檢測TNF-α、IL-6含量。抽出玻璃體液0.5mL予5000r/min離心5min后，立即貯存于-70℃待統一檢測，TNF-α、IL-6采用放射免疫分析方法。

統計學分析。采用SPSS17.0統計軟件進行統計學分析，計量資料以均數加減標準差（）表示，多組間比較用單因素方差分析，組間兩兩比較用最小顯著差（LSD）法，等級資料采用秩和檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

各組給藥4周玻璃體積血程度分級比較見表1。

表1　各組給藥4周玻璃體積血程度分級比較

各組給藥8周玻璃體積血程度分級比較見表2。

表2　各組給藥8周玻璃體積血程度分級比較

各組給藥8周TNF-α、IL-6含量比較見表3

表3　各組給藥8周TNF-α、IL-6比較（）

表3　各組給藥8周TNF-α、IL-6比較（）

注：與空白組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與西藥組比較，cP＜0.05。

組別眼數T N F -α（n g / m L） I L -6（p g / m L）A（空白組）2 0 1 . 6 0 1 ± 0 . 4 9 1 1 6 0 . 0 3 ± 3 2 . 9 7 B（模型組）2 0 2 . 8 6 6 ± 0 . 4 2 2a2 9 0 . 6 9 ± 3 1 . 0 5aC（中藥組）2 0 2 . 2 6 3 ± 0 . 5 5 9abc2 0 0 . 4 3 ± 3 4 . 0 8abcD（西藥組）2 0 2 . 4 0 5 ± 0 . 4 7 4ab2 5 6 . 3 1 ± 4 1 . 4 5

由上表所示，B、C、D各組TNF-α、IL-6含量均較A組增高（P＜0.01），說明玻璃體積血可導致炎癥介質TNF-α、IL-6的大量釋放，從而促使PVR的發生；C、D兩組TNF-α、IL-6含量均低于B組（P＜0.05），說明清亮飲及安妥碘均可促進炎癥介質TNF-α、IL-6的吸收，從而促進玻璃體積血吸收而保護視網膜；C、D兩組間TNF-α、IL-6含量比較差異有統計學意義（P＜0.05），其中C組TNF-α、IL-6降低更顯著，說明清亮飲組對促進兔玻璃體積血中TNF-α、IL-6的吸收優于安妥碘組。將TNF-α、IL-6兩組數據行Pearson相關性分析，得出r=0.599，P＜0.05，提示玻璃體積血與炎癥介質TNF-α、IL-6的釋放呈正相關，二者協同促進玻璃體積血中纖維增殖、機化，從而引發PVR。

3　討論

玻璃體積血是一種嚴重的玻璃體病變，病因復雜［4］，多因外傷和眼底血管病變引起，也可因全身疾病引起，大量的玻璃體積血可影響眼底的觀察，如果積血長時間不吸收，會引起纖維增殖、機化膜形成，?？蓪е翽VR的發生而致盲［5］，其中炎癥介質TNF-α、IL-6在PVR的發生、發展及演變中起重要作用［6］，Karthikeyan等也研究發現IL-6、TNF-α 等細胞因子在PVR發生的各時期均有不同程度的高表達，其與PVR的發生有相關性［7］。玻璃體內TNF-α在PVR的啟動和調控中起重要的作用，且IL-6可誘導PVR發生，在PVR初期起著免疫和炎癥反應的放大作用。實驗結果顯示B、C、D各組兔模型在8周后玻璃體組織中TNF-α、IL-6的含量均明顯高于空白組，故促進兔玻璃體積血中炎癥介質TNF-α、IL-6的吸收對玻璃體積血的治療及預后至關重要，清亮飲和安妥碘均可促進TNF-α、IL-6的吸收，且清亮飲組促進此二者吸收作用較安妥碘組顯著（P＜0.05），說明清亮飲促進玻璃體積血吸收及防治PVR發生效果顯著。

玻璃體積血在中醫古籍中早有認識，在古典醫有“暴盲”、“云霧移睛”、“血灌瞳仁”、“目血灌瞳仁”、“血貫瞳神”、“血灌瞳人外障”等不同名稱?！妒備洝分^：“目屬肝，肝受血而能視，則目之瞻視，必資血。茍因物損傷，致血脈散亂，則敗血侵睛，灌注瞳仁，害于瞻視，不早治或致喪明，故謂之血灌瞳仁?！薄蹲C治準繩·血灌瞳神證》謂：”視瞳神不見其黑瑩，但見一點鮮紅，甚則紫濁色也，病至此亦甚危且急矣?！薄躲y海精微》謂：“血灌瞳人者，因毒血灌入金井瞳人水內也，猶如水流入井中之狀，清濁相混，時痛澀，紅光滿目，視物蒙蒙，如隔絹看物，若云霧中然。”玻璃體積血的治療，一要行，即活血利水祛瘀散結等法，是目前臨床上廣泛應用的治療方法；二要養，即益氣滋陰養血等法，此法在臨床應用比較局限，常因個人經驗不同斟酌應用。清亮飲行而不傷氣，清熱祛瘀而不傷正。實驗充分證實清亮飲治療玻璃體積血效果顯著。

［1］ 陶然，柯根杰.玻璃體積血成因分析及分期治療［J］.實用防 盲技術，2012，7（1）： 33-37.

［2］ 王建民，馬景學，葉存喜，等.非外傷性玻璃體大量積血的病因分析［J］.中國實用眼科雜志，2006（24）：100-103.

［3］ Forrester J V， Edger W， Millar W，et al. Enhancement of itreous clotly-sis by urokinase： made of action［J］. Exp Eye es，1982，34：895.

［4］ 羅文彬，游志鵬.玻璃體積血1263例病因分析［J］.中國現代醫學雜志，2014，22（4）： 66-70.

［5］ Goff MJ， Mcdonald HR，Johnson RN， et al. Causes and treatm ent of vitreous hemorrhage［J］. Compr Ophthalmol Update，2006，7（3）：97-111.

［6］ 劉蓓，鄭曰忠，趙秉水，等.增生性玻璃體視網膜病變眼玻璃體液白細胞介素和腫瘤壞死因子的研究［J］. 中華眼底病雜志，2005，12（5）：327-328.

［7］ Karthikeyan B，Kalishwaralal K，Sheikpranbabu S，et al. Gold nanoparticles downregulate VEGF-and IL-1beta-induced cell proliferation through Src kinase in retinal pigment epithelial cells［J］.Exp Eye Res，2010，91（5）：769-778.

Objective：To observe the effect of Qingliangyin on the expression of IL-6， TNF-α of vitreous hemorrhage in rabbits. Method： 40 rabbits were randomly divided into 4 groups. 10 rabbits were group A （blank control group） while the remaining 30 rabbits after the successful production of vitreous hemorrhage were randomly divided into 3 groups， 10 rabbits in each group，group B the model group， group C Chinese medicine group（Qingliangyin group）， group D western medicine group（Prolonium iodide group）. It was detected in each group respectively after 8 weeks treatment that the content of TNF-α， IL-6 in vitreous. Result：After 8 weeks of administration， vitreous hemorrhage was significantly reduced in group C and group D compared with that of pretreatment（P＜0.05）and compared with that in group A and group B （P＜0.05）. The content of TNF-α， IL-6 in group B，group C and group D was significantly higher than that in group A （P＜0.05）. The content of TNF-α， IL-6 in the group C was less than that in group B and group D （P＜0.05）. The difference among groups was statistically significant （P＜0.05）. CONCLUSION： Qingliangyin could promote the absorption of IL-6，TNF-αin vitreous hemorrhage and has protective effect on retina of vitreous hemorrhage of rabbits.

Vitreous hemorrhage；Qingliangyin；Interleukin- 6 （ IL- 6） ，Tumor necrosis factor-α

R289.5

B

1004-2814（2016）02-0105-02

2015-08-15

沈陽市科技局，沈陽市科技創新專項資金-應用基礎研究專項項目（F13-316-1-50）

朱寧云