MMP-13在骨性關節(jié)炎滑膜組織中的表達分析

包　剛，劉　永，劉亞麗，常　虹,劉　瑩

(1.吉林油田總醫(yī)院 骨一科，吉林 松原138000；2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 放射治療科)

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MMP-13在骨性關節(jié)炎滑膜組織中的表達分析

包剛1，劉永1，劉亞麗1，常虹1,劉瑩2*

(1.吉林油田總醫(yī)院 骨一科，吉林 松原138000；2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 放射治療科)

骨性關節(jié)炎(OA)為臨床中常見的一種非炎性、退行性、漸進性、慢性關節(jié)病變[1]。目前，骨性關節(jié)炎的發(fā)病機制還尚未明確。本文主要探討OA患者滑膜組織中MMP-13表達情況及意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取34例2014年3月-2015年5月在本院接受診治的OA患者為觀察組。男性10例，女性24例；年齡：19-70歲，平均(54.34±3.43)歲。選取同期在本院骨科接受治療的34例非OA患者作為對照組。男16例，女18例；年齡：20-70歲，平均(52.17±2.65)歲。在性別、年齡等一般資料比較上，2組患者無顯著性差異(P>0.05)。所有入選患者均在接受手術治療過程中獲取滑膜標本作為本次研究檢測對象。

1.2儀器及方法

北京中杉金橋生物技術有限公司生產(chǎn)的一抗MMP-13及相關試劑盒，由Dako公司生產(chǎn)的Envision試劑盒等，嚴格按照試劑盒具體說明實施相關操作。具體操作步驟表現(xiàn)如下：收集患者接受關節(jié)置換、膝關節(jié)鏡、截肢手術等，從髕上囊位置切除下來的滑膜組織。在術后60 min之內(nèi)，使用生理鹽水對標本進行3次反復沖洗，然后迅速取1/2的標本放置于液氮罐中，待實施Western blot蛋白提取操作時使用。使用濃度為10%的福爾馬林對另外1/2標本進行固定，再石蠟將其包埋，然后實施連續(xù)4 μm 切片。選用Envision法實施免疫組化染色，MMP-13一抗?jié)舛仍O置為1∶100，實施抗原經(jīng)高壓修復。按照試劑盒說明嚴格執(zhí)行Western blot實驗具體操作。

1.3結果判斷

陰性(-)：陽性細胞數(shù)≤10%；弱陽性(+)：11%≤陽性細胞數(shù)≤25%；陽性：25%<陽性細胞數(shù)<50%；強陽性(+++)：陽性細胞數(shù)≥50%。僅存在均勻或片狀黃染，或者未見顆粒者均視為陰性。

1.4統(tǒng)計學方法

研究結果通過SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料行t檢驗，計數(shù)資料行χ2分析處理，以P<0.05表示差異比較存在顯著性。

2　結果

在Western blot實驗結果方面：MMP-13蛋白在對照組滑膜組織中的相對表達量為0.263±0.431，在觀察組中的相對表達量為1.064±0.231，觀察組顯著高于對照組(P<0.05)，見表1。在免疫組化染色檢測方面：在對照組患者的滑膜組織僅見少部分MMP-13蛋白表現(xiàn)為陽性表達，觀察組患者滑膜組織中MMP-13蛋白陽性表達率明顯高于對照組，差異比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見圖1-4。

表1　2組患者MMP-13表達情況

注：與對照組比較，*P<0.05。

圖1對照組MMP-13表達

圖2觀察組MMP-13在胞漿中表達

圖3觀察組MMP-13在漿細胞胞漿中表達

圖4觀察組MMP-13在細胞間質(zhì)中表達

3　討論

有報道指出，MMPs參與OA病理過程中，關鍵酶主要為基質(zhì)降解素(MMP-3)和明膠酶3(MMP-13)。MMP-13的作用主要是將膠原分子中所存在的三維螺旋結構進行分解，其對Ⅱ型膠原蛋白的降解尤為突出[2]。由此可推測，在OA的發(fā)生及進展過程中，MMP-13可直接降解軟骨基質(zhì)，同時，在OA病理機制中某種蛋白通道的激活中也有可能與MMP-13存在密切相關性[3]。本次研究結果顯示，在OA患者的滑膜組織中存在MMP-13蛋白強陽性表達，其陽性率顯著高于非OA患者。Western blot操作結果顯示，MMP-13蛋白在OA患者中的表達量表現(xiàn)為明顯增高，與非OA患者表達量比較存在顯著性差異。研究顯示，MMP-13蛋白、MMP-3蛋白在OA患者滑膜組織中均表現(xiàn)為顯著高表達，Pearson相關分析，MMP-13蛋白與MMP-3蛋白的表達為正相關[4]。

[1]賞后來,郭亭,趙建寧.骨性關節(jié)炎實驗室診斷指標的意義及研究進展[J].醫(yī)學研究生學報,2012,25(02)：204.

[2]張明,劉立宏,郭文娟,等.實時熒光定量PCR檢測骨性關節(jié)炎病人膝關節(jié)液中miR-140的表達[J].中南大學學報(醫(yī)學版),2012,37(12):1210.

[3]劉揚.白細胞介素-24基因在膝關節(jié)骨性關節(jié)炎發(fā)病中的作用及意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2016,26(13): 63.

[4]賀占坤,沈杰威.MMP-2、MMP-3、MMP-9和TIMP-1評價膝關節(jié)骨性關節(jié)炎的臨床研究[J].重慶醫(yī)學,2013,42(32): 3872.

1007-4287(2016)09-1548-02

2015-09-22)