HPLC 法測定羅氟司特含量的研究

倪輝，王淑玲，周玉香，蘇梅，韓承業

（南京柯菲平醫藥科技有限公司新藥研究部，江蘇南京210016）

·綜述·

HPLC 法測定羅氟司特含量的研究

倪輝，王淑玲，周玉香，蘇梅，韓承業

（南京柯菲平醫藥科技有限公司新藥研究部，江蘇南京210016）

目的建立一種高效液相色譜（HPLC）法測定羅氟司特片的含量。方法采用HPLC法，色譜柱為Inertsil ODS-3（4.6 mm×250.0 mm，5 μm），以0.01 mol/L甲酸銨緩沖液（pH 4.0）-乙腈（50∶50）作為流動相，檢測波長為215 nm，流速為1.5 mL/min，柱溫為25℃，測定羅氟司特的含量。結果羅氟司特濃度在7.496～44.973 μg/mL時線性關系良好，回歸方程Y=76.76X-4.53，相關系數（r）=1.000 00（n=6）；高、中、低3種濃度平均回收率為99.91%，相對標準偏差（RSD）為0.11%（n=3），中間精密度試驗的RSD為0.12%（n=6）。結論建立的HPLC法簡便、靈敏，結果準確，重復性和耐用性良好，可作為羅氟司特片含量的檢驗方法。

磷酸二酯酶抑制劑；色譜法，高壓液相；質量控制；羅氟司特

羅氟司特片由瑞士奈科明（Nycomed）公司及其美國合作伙伴Forest實驗室公司共同開發。2010年7月，歐洲藥品管理局（EMA）批準羅氟司特片上市，批準適應證：該藥作為支氣管擴張劑治療的添加藥物，用于有頻發急性加重史的成人患者慢性支氣管炎相關的重度慢性阻塞性肺疾病（COPD）的維持治療［1-3］。2011年2月，美國食品藥品管理局（FDA）也批準了羅氟司特片上市。羅氟司特片適用于有慢性支氣管炎和急性加重期重度COPD患者的治療［4-7］，以降低COPD急性加重的風險。本研究擬采用高效液相色譜（HPLC）法測定羅氟司特片的含量，建立該藥的含量測定方法。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器Agilent 1100型液相色譜儀（安捷倫科技有限公司，VWD紫外檢測器）；AL104型電子天平（梅特勒-托利多國際股份有限公司），AUW120D型電子天平［島津企業管理（中國）有限公司］；PB-10型精密pH計［賽多利斯（上海）貿易有限公司］。

1.1.2試劑羅氟司特對照品（自制，批號：110301，含量：99.93%）；羅氟司特片（自制，批號：110501、110502、110503）；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1色譜條件色譜柱：InertsilODS-3（4.6 mm×250.0 mm，5 μm，日本島津公司）。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.01 mol/L甲酸銨緩沖液（pH 4.0）-乙腈（50∶50）為流動相；檢測波長為215 nm；流速為1.5 mL/min；柱溫為25℃。

1.2.2溶液的制備

1.2.2.1對照品溶液取羅氟司特對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每毫升約含15 μg的溶液。

1.2.2.2供試品溶液取羅氟司特片30片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于羅氟司特1.5 mg）置于100 mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理，使羅氟司特片溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。

1.2.2.3空白對照溶液取缺羅氟司特其他組分，按處方工藝制成空白樣品，按1.2.2.2項下方法制成空白對照溶液。

1.2.3系統適用性試驗取1.2.2.1項下的對照品溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，連續進樣5次，考察理論板數、分離度、重復性。

1.2.4空白干擾專屬性試驗取1.2.2.3項下的空白對照溶液，精密量取20 mL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.5線性與范圍取1.2.2.1項下的對照品溶液，用流動相稀釋制成一系列濃度，在上述色譜條件下，分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以濃度（C）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標作圖，進行回歸計算，繪制回歸曲線，得出回歸方程。

1.2.6溶液穩定性試驗取同一供試品溶液（批號：110501），分別于0、2、4、6、8 h精密量取20 μL注入液相色譜儀，考察溶液的穩定性。

1.2.7精密度試驗

1.2.7.1重復性試驗按1.2.2.2項下方法制備供試品溶液。同法操作6份。同時制備羅氟司特對照品溶液。精密量取上述溶液各20 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.7.2中間精密度試驗按含量測定方法，由不同分析人員在不同時間分別測定其含量，考察隨機變動因素對精密度的影響。

1.2.8準確度試驗精密稱取羅氟司特對照品適量，按處方量加入空白輔料，分別制成低、中、高3個不同濃度的片劑（分別含羅氟司特80%、100%、120%），每個濃度分別制備3份進行含量測定。

1.2.9耐用性試驗精密稱取羅氟司特對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成每毫升含150 μg的溶液。量取羅氟司特溶液5 mL置于50 mL量瓶中，用流動相稀釋制成15 μg/mL的溶液。精密量取上述溶液各20 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

通過將色譜條件的流動相初始比例、pH值、流速、柱溫及色譜柱更換進行微小的變動，考察該色譜條件的耐用性。

1.2.10樣品含量測定取不同批號的樣品，分別按1.2.2.2項下方法制成供試品溶液，精密量取上述溶液各20 μL分別注入液相色譜儀，測定3批樣品羅氟司特的含量。

2　結果

2.1系統適用性試驗結果本系統理論板數按羅氟司特峰計算約為13 000.000，重復性良好。見表1。

表1　系統適用性試驗結果

2.2空白干擾專屬性試驗結果輔料在與供試品主峰保留時間相同處無色譜峰出現，不干擾本品的含量測定，表明該方法專屬性良好。

2.3線性與范圍羅氟司特的回歸方程為Y=76.759 93X-4.527 53，相關系數（r）=1.000 00，表明本品在7.496～44.973 μg/mL時線性關系良好。見圖1。

圖1　羅氟司特線性關系曲線

2.4穩定性試驗結果含量測定羅氟司特供試品溶液于量瓶中室溫放置8 h峰面積（A）無明顯變化，RSD為0.16%，提示該溶液穩定性良好。見表2。

表2　溶液穩定性試驗結果

2.5精密度試驗結果

2.5.1重復性試驗羅氟司特供試品的平均含量為99.86%，RSD為0.10%，表明該方法重復性良好。見表3。

表3　重復性試驗結果（n=6）

2.5.2中間精密度試驗結果不同分析人員在不同時間試驗結果的RSD為0.12%，表明該方法的中間精密度良好。見表4。

表4　中間精密度試驗結果

2.6準確度試驗結果采用HPLC法測定片劑中羅氟司特含量的平均回收率為99.91%，RSD為0.11%，表明該方法的準確度高、可靠性好。見表5。

表5　準確度試驗結果

2.7耐用性試驗結果對色譜條件進行微小變動，各變異條件下對本品含量檢測無明顯影響，提示該方法耐用性良好。見表6。

表6　耐用性試驗結果

2.8樣品含量測定測定3批羅氟司特片（110501、110502、110503）的含量分別為99.92%、100.11%、100.23%。

3　討論

目前國內有關羅氟司特含量測定的相關報道不多［8-10］。本研究建立了一種采用HPLC法測定羅氟司特片含量的方法，結果顯示，羅氟司特在7.496～44.973 μg/mL時線性關系良好（Y=76.759 93X-4.527 53，r=1.000 00），羅氟司特供試品的平均含量為99.86%，RSD為0.10%，表明該方法重復性良好；耐用性試驗對色譜條件進行了微小變動，各變異條件下對羅氟司特的含量檢測無明顯影響，表明該方法耐用性良好；且該方法準確性高，操作方便，能有效控制羅氟司特片的含量。根據實際3批樣品含量測定結果，將羅氟司特片含量測定標準暫定為含羅氟司特標示量的90.0%～110.0%。

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Study on HPLC method for determining roflumilast content

Ni Hui，Wang Shuling，Zhou Yuxiang，Su Mei，Han Chengye
（Department of New Drug Research，Nanjing Carephar Medical Science and Technology Co.，Ltd.，Nanjing，Jiangsu 210016，China）

ObjectiveTo establish a HPLC method for the content determination of roflumilast tablets.MethodsThe high-performance liquid chromatography（HPLC）method was adopted with the Inertsil ODS-3（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）as the chromatographic column.0.01 mol/L ammonium formate buffer solution（adjusting pH to 4.0）-acetonitrile（50∶50）served as the mobile phase，the roflumilast content was detected at the detection wavelength of 215 nm，the flow rate of 1.5 mL/min and the column temperature of 25℃.ResultsThe roflumilast concentration in the range of 7.496-44.973 μg/mL had a good linear relationship，the regression equation was Y=76.76X-4.53，r=1.000 00（n=6），the average recovery rate of high，middle and low concentrations was 99.91%，RSD=0.11%（n=3）；RSD in the intermediate precision test was.0.12%（n=6）.ConclusionThe established HPLC method is simple，sensitive and accurate in detection results with good reproducibility and durability，which is suitable for the content determination method of roflumilast tablets.

Phosphodiesterase inhibitors；Chromatography，high pressure liquid；Quality control；Roflumilast

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.20.015

A

1009-5519（2016）20-3139-03

倪輝（1984-），本科，主要從事藥物分析及藥物研發申報工作。

（2016-03-16

2016-07-05）