氣相色譜-質譜聯用法分析15N標記精氨酸發酵液中的氨基酸組分及其同位素豐度

侯　捷，雷　雯，杜曉寧 ，任　征，岳韓笑

(上海化工研究院　上海穩定性同位素工程技術研究中心，上海　200062)

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氣相色譜-質譜聯用法分析15N標記精氨酸發酵液中的氨基酸組分及其同位素豐度

侯捷，雷雯，杜曉寧*，任征，岳韓笑

(上海化工研究院上海穩定性同位素工程技術研究中心，上海200062)

建立了精氨酸、賴氨酸、絲氨酸、纈氨酸、亮氨酸等15種氨基酸的氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)檢測方法。以硅烷化試劑N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(MSTFA)為衍生化試劑對氨基酸進行衍生化，在優化的色譜-質譜條件下，15種氨基酸均達到基線分離。結合混合陽離子(MCX)固相萃取柱對氨基酸發酵液實際樣品進行凈化，將所建立的方法用于15N標記精氨酸發酵液中的氨基酸組成(包括亮氨酸-15N、脯氨酸-15N、精氨酸-15N4、谷氨酰胺-15N和賴氨酸-15N2)分析，并根據EI圖譜的離子碎片信息對15N標記精氨酸發酵液中的氨基酸同位素豐度進行計算。

氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)；衍生化；氨基酸；15N標記氨基酸；同位素豐度

穩定同位素15N標記的氨基酸作為一種安全、有效、方便的示蹤工具[1]，被用于醫學、定量蛋白質組學等領域。在蛋白質定量組學領域，穩定同位素15N標記的亮氨酸、精氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸等[2]常用作細胞培養穩定同位素標記技術(SILAC)[3]的內標試劑，SILAC技術具有標記穩定，可動態研究蛋白質組的變化情況等優點[4]。目前，15N標記的氨基酸主要采用生物發酵法生產。由于菌體復雜的代謝過程，采用發酵法生產目標氨基酸的同時難免會產生其它氨基酸。……