市售不同產地辛夷中揮發油成分分析及木蘭脂素的含量測定

楊瓊梁，歐陽婷，楊仁義，張桃伏，呂琦，顏紅*（.湖南中醫藥大學藥學院，湖南長沙4008；.湖南中醫藥大學中西醫結合學院，湖南長沙4008）

市售不同產地辛夷中揮發油成分分析及木蘭脂素的含量測定

楊瓊梁1，歐陽婷1，楊仁義2，張桃伏1，呂琦1，顏紅1*（1.湖南中醫藥大學藥學院，湖南長沙410208；2.湖南中醫藥大學中西醫結合學院，湖南長沙410208）

目的分析比較市售湖南、廣西兩個不同產地辛夷中揮發油的化學成分，并對其木蘭脂素的含量進行測定。方法采用GC-MS聯用技術對湖南、廣西兩個產地的辛夷揮發油成分進行分析，采用HPLC對兩個產地辛夷中木蘭脂素含量進行測定。結果湖南、廣西產地的辛夷揮發油分別分離鑒定出62和64種化合物，主要成分為桉油精、β-蒎烯、2-茨酮、香葉基芳樟醇、α-松油醇等。采用HPLC測定辛夷中木蘭脂素的含量，結果顯示，木蘭脂素在2～256 μg/mL濃度范圍內與峰面積呈良好線性關系（r=0.999 96，n=6），平均加樣回收率為100.32%，RSD為0.04%（n=6）。木蘭脂素含量為：湖南產地（0.87±0.05）%、廣西產地（0.81±0.02）%。結論GC-MS法能快速、簡便、高效地檢測辛夷揮發油的化學成分，HPLC簡便可靠、重復性好，可用于辛夷中木蘭脂素的含量測定。

辛夷；GC-MS；HPLC；揮發油；木蘭脂素；含量測定

辛夷為木蘭科植物望春花Magnolia biondii Pamp.、玉蘭Magnolia denudata Desr.或武當玉蘭Magnolia sprengeri Pamp.的干燥花蕾［1］，性溫，味辛，微苦，入肺、胃經，具有疏風散邪，上行頭目，善通鼻竅，專治鼻淵之功效，是中醫治療各類鼻炎的常用中藥。辛夷的主要有效成分為揮發油、木脂素類和黃酮類化合物［2］?，F代研究表明［3］，辛夷中揮發油成分具有收縮鼻黏膜血管及抗組胺作用，主要成分木蘭脂素具有較好的抗炎、抗過敏作用［4］。本文采用GC-MS聯用技術對湖南、廣西兩個產地辛夷中揮發油成分進行分析，運用HPLC對辛夷的木蘭脂素含量進行測定，旨在探討產地對辛夷揮發油成分及木蘭脂素含量的影響，以期為我國辛夷藥材的資源開發提供參考，為辛夷中藥制劑研發提供實驗依據。

1　材料

1.1藥材

辛夷，湖南產地（購自湖南津湘制藥有限公司，批號：20160101）；廣西產地（購自湖南省弘華中藥飲片有限公司，批號：150105），經湖南中醫藥大學藥學院劉塔斯教授鑒定為木蘭科植物望春花Magnolia biondii Pamp.的干燥花蕾。

1.2儀器

島津GC-MS-QP2010型氣相色譜質譜聯用儀，GC-MS Solution色譜工作站，標準譜庫為美國NIST質譜檢索數據庫；Waters高效液相色譜儀（Waters 2489檢測器），Breeze 2色譜工作站；YP601N電子天平（上海恒平科學儀器有限公司）；KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AR11401C型電子天平（奧豪斯國際貿易有限公司）；揮發油測定器（上海玻璃儀器廠）；HDM-3000電子調溫電熱套（金壇市榮華儀器制造有限公司）。

1.3試劑

木蘭脂素（批號：LI90P40，百靈威化學技術有限公司）；無水硫酸鈉（江蘇強盛功能化學股份有限公司）；乙酸乙酯（國藥集團化學試劑有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純；其他試劑為分析純；重蒸水（自制）。

2　方法

2.1辛夷揮發油成分分析

2.1.1供試品溶液的制備取粉粹后的辛夷藥材200 g，按《中華人民共和國藥典》2015版四部通則2204項下揮發油提取甲法進行提取，蒸餾5 h，收集揮發油，無水Na2SO4脫水，得淺黃色透明的揮發油，以乙酸乙酯為溶劑稀釋即得供試液。

2.1.2GC-MS條件色譜柱：Rxi-5Sil MS毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣He；分流比50∶1；流速1.0 mL/min；進樣量1 μL；進樣口溫度230℃；柱溫60℃；升溫程序：起始溫度60℃，以10℃每分鐘升至280℃，保持5 min。質譜條件：電離方式為EI，電離能量為70 eV，倍增電壓0.8 kV，掃描質量范圍35 m/z～500 m/z，掃描間隔0.25 s，掃描速度2 000 amu/s。

采用美國NIST 11.lib和NIST 11s.lib標準譜庫進行檢索，結合相似度和參考相關文獻［5-8］，對樣品成分進行定性分析并根據峰面積歸一化法計算各成分的含量。

2.2辛夷木蘭脂素含量的測定

2.2.1對照品溶液和供試品溶液的制備對照品溶液：精密稱取木蘭脂素對照品0.010 4 g，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.04 mg/mL的對照品溶液。

供試品溶液［1］：取辛夷粗粉約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯20 mL，稱定重量，浸泡30 min，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液3 mL，加在中性氧化鋁柱（100～200目，2 g，內徑為9 mm，濕法裝柱，用乙酸乙酯5 mL預洗）上，用甲醇15 mL洗脫，收集洗脫液，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.2色譜條件色譜柱：Hypersil ODS2 C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流動相：乙腈-水（33: 67）；流速1.0 mL/min；柱溫35℃；進樣量6 μL；波長為278 nm；理論塔板數按木蘭脂素峰計算不低于9 000。

2.2.3系統適應性試驗分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各6 μL，按“2.2.2”項色譜條件分析測定。

2.2.4線性關系的考察分別精密移取上述對照品溶液適量，以甲醇稀釋成濃度分別為2、16、32、64、128、256 μg/mL的對照品溶液。分別取上述對照品各6 μL進樣，按“2.2.2”項下色譜條件測定。以峰面積積分值（y）為縱坐標，對照品濃度值（x）為橫坐標，繪制標準曲線，進行回歸分析。

2.2.5精密度試驗精密吸取上述木蘭脂素對照品溶液，分別在“2.2.2”項下色譜條件下測定RSD值：（1）日內RSD值：取上述對照品溶液，重復進樣6次，每次6 μL，計算對照品峰面積的RSD值；（2）日間RSD值：取上述對照品溶液，每天進樣1次，連續6 d，計算對照品峰面積的RSD值。

2.2.6穩定性試驗取待測同一批次辛夷供試品溶液，按“2.2.2”項下色譜條件進行測定，分別在0、2、4、6、8、12、24 h進樣，測定木蘭脂素的峰面積，計算供試品峰面積的RSD值。

2.2.7重復性試驗取待測同一批次辛夷粗粉約1.0 g，平行稱定6份，按供試品溶液制備項下方法處理，精密吸取供試品溶液6 μL，按“2.2.2”項下色譜條件分析測定，記錄峰面積，計算RSD值。

2.2.8加樣回收試驗精密稱取已知含量的辛夷粗粉6份，每份0.5 g，分別加入相同量的木蘭脂素對照品4.5 mg，按供試品溶液制備項下方法處理，按“2.2.2”項下色譜條件分析測定，記錄峰面積，計算平均回收率與RSD值。

2.2.9樣品測定取不同產地的辛夷，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.2”項下色譜條件進樣分析測定，記錄峰面積，計算樣品中木蘭脂素的含量。

3　結果與分析

3.1辛夷揮發油的成分

分別對兩種不同產地辛夷的揮發油進行了GC-MS分析，通過氣質聯用給出質譜數據和計算機檢索出的可能結構，并查閱有關文獻資料與標準品的質譜圖進行比較，共鑒定出81種化合物，GC-MS總離子流圖分別見圖1，化學成分及相對百分含量見表1。

由圖1可知，不同產地的辛夷在揮發油的成分組成與含量上均存在不同程度的差別。由表1可知，湖南、廣西辛夷的揮發油分別鑒定出62和64種成分，其中湖南產地主要成分為桉油精（11.31%）、香葉基芳樟醇（11.18%）、α-松油醇（5.23%）、τ-杜松醇（4.31%）、β-松油醇（20.00%）；廣西產地主要成分為桉油精（5.27%）、柑橘檸烯（14.56%）、香葉基芳樟醇（12.67%）、α-松油醇（6.56%）、β-蒎烯（5.61%）、α-水芹烯（5.35%）、（-）-4-萜品醇（4.39%）。上述結果與文獻報道的辛夷揮發油主要成分較一致，但成分種類及含量有差別，可能與采收季節、藥材貯存時間等因素有關。

圖1　兩種不同產地辛夷揮發油總離子流圖

3.2木蘭脂素的含量

3.2.1系統適應性結果系統適應性結果見圖2。木蘭脂素與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，拖尾因子在1.0～1.1，理論塔板數以各色譜峰計均在9 000以上。

3.2.2方法學考察結果經計算得到線性回歸方程y=3 139 x-2947.3（r=0.999 96）

結果表明木蘭脂素在2～256 μg/mL（n=6）進樣濃度范圍內線性關系良好。精密度結果表明，對照品峰面積的日內RSD值為0.03%（n=6），日間RSD值為0.18%（n=6），表明精密度良好。同一批次辛夷供試品24 h內峰面積RSD值為0.15%（n=6），表明木蘭脂素在24 h內穩定性良好。重復性試驗結果表明，供試品RSD值為0.01%（n=6），表明該測定方法的重現性良好。經計算平均回收率為100.32%，RSD值為0.04%（n=6），表明該測定結果準確可靠。

3.2.3樣品含量測定經測定，湖南、廣西產地辛夷中木蘭脂素的含量分別為（0.87±0.05）%、（0.81± 0.02）%（n=3）。由此可知，不同產地辛夷中的木蘭脂素含量有差異。

表1　不同產地辛夷揮發油成分分析

續表1

圖2　對照品與供試品HPLC圖譜

4　結論

藥材中揮發油成分穩定性較差，易受采收季節、加工方法、貯藏等條件的影響［5］。本試驗結果表明，市售湖南、廣西兩種不同產地辛夷的揮發油成分組成、含量及木蘭脂素含量均存在不同程度的差異，湖南、廣西辛夷的揮發油分別鑒定出62和64種成分，揮發油的主要成分為單萜、倍半萜類及其含氧衍生物和脂肪族類化合物，如桉油精、β-蒎烯、2-茨酮、香葉基芳樟醇、α-松油醇等，與文獻資料報道基本一致［6-8］，但成分種類及含量有較大差別，除了產地的影響，可能與采收季節、藥材貯存時間等因素有關。木蘭脂素在2～256 μg/mL濃度范圍內與峰面積呈良好線性關系（r=0.999 96，n=6），平均加樣回收率為100.32%，RSD為0.04%（n=6），本文建立的HPLC簡便可靠、重復性好，可用于辛夷中木蘭脂素的含量測定。兩個產地的木蘭脂素含量均達到《中華人民共和國藥典》2015版要求（按干燥品計算，辛夷粗粉中含木蘭脂素不得少于0.40%）。本實驗結果可為辛夷藥材的開發利用及相關制劑的研究提供實驗依據。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2015:182.

［2］馮衛生，王建超，何玉環，等.辛夷化學成分的研究［J］.中國藥學雜志，2015，50（24）:2103-2106.

［3］王永慧，葉方，張秀華.辛夷藥理作用和臨床應用研究進展［J］.中國醫藥導報，2012，9（16）:12-14.

［4］李小莉，張永忠.木蘭脂素抗炎，抗過敏作用的實驗研究［J］.中草藥，2002，33（11）:1014-1015.

［5］李佐軍，周玉婷，鄧雪姣，等.市售不同產地吳茱萸揮發油成分的氣相色譜-質譜分析［J］.時珍國醫國藥，2013，24（8）:1835-1837.

［6］齊天，楊光，胡志，等.加速溶劑萃取/氣相色譜-質譜法分析辛夷中揮發油成分［J］.廣東藥學院學報，2014，30（2）:184-189.

［7］楊柳，劉建，李艷福，等.4種不同方法提取辛夷揮發油成分研究［J］.河南工程學院學報（自然科學版），2016，28（1）:33-37.

［8］何娟，楊柳，李艷福，等.中藥材辛夷揮發油GC-MS指紋圖譜的建立［J］.分析測試學報，2008，27（4）:423-425，429.

（本文編輯蘇維）

《湖南中醫藥大學學報》2015年核心影響因子

據最新2016年版《中國科技期刊引證報告》（核心版）顯示：《湖南中醫藥大學學報》2015年核心影響因子0.425，核心他引率0.90，核心總被引頻次1139，核心影響因子比2014年提高0.1，在全國中醫藥大學學報綜合評價排名中比2014年上升了4位，排名第七。

Component Analysis of Volatile Oil of Flos Magnoliae and Assay of Magnolin Content from Different Producing Areas

YANG Qiongliang1，OUYANG Ting1，YANG Renyi2，ZHANG Taofu1，LV Qi1，YAN Hong1*
（1.School of pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410208，China；2.College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410208，China）

Objective To study the chemical component of volatile oil of Flos Magnoliae from Hunan and Guangxi，and the magnolin content was determined.Methods The volatile oil of the Flos Magnoliae in Hunan and Guangxi was analyzed by GC-MS，and the content of magnolin was determined by HPLC.Results 63 and 65 compounds were respectively separated and identified from Flos Magnoliae volatile oil that was collected from Hunan and Guangxi，mainly including eucalyptol，beta pinene，2-camphor，geranyl linalool，alpha terpineol etc.Magnolin presented a good linearity with peak area between the concentration of 2-256 μg/mL（r=0.99996，n=6）.The average recovery was 100.32%with the RSD of 0.04%.The content of Magnolia from the province of Hunan and Guangxi was 0.87%±0.05%and 0.81%±0.02%.Conclusion GC-MS can detect the composition of essential oil quickly and effectively.The analysis of magnolin with HPLC was simple，reliable and reproducible.

Flos Magnoliae；GC-MS；HPLC；volatile oil；magnolin；content assaying

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674-070X.2016.10.010

2016-05-09

湖南省大學生研究性學習和創新性實驗計劃項目（湘教通［2016］283號）；湖南省“中藥學”重點學科項目（湘教通［2011］76號）。

楊瓊梁，女，在讀碩士研究生，研究方向：中藥新劑型與新技術的研究。

*顏紅，女，副教授，碩士研究生導師，E-mail：yh8632@126.com。