黃芪靈芝口服液對雛雞免疫功能的影響

周澤偉，劉浩，王凱，余崢嶸，殷冬來，韓玲玲，張雨梅，2

（1.揚州大學獸醫學院，江蘇揚州225009；2.江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協同創新中心，江蘇揚州225009）

黃芪靈芝口服液對雛雞免疫功能的影響

周澤偉1，劉浩1，王凱1，余崢嶸1，殷冬來1，韓玲玲1，張雨梅1，2

（1.揚州大學獸醫學院，江蘇揚州225009；2.江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協同創新中心，江蘇揚州225009）

為了研究黃芪靈芝口服液對雛雞免疫功能的促進作用，將180只7日齡雛雞隨機分成9組，1～3組為黃芪靈芝口服液高、中和低劑量組；4～6組分別是環磷酰胺（CY）+黃芪靈芝口服液高、中和低劑量組；7～9組分別為環磷酰胺組、陽性對照組及生理鹽水組。分別于用藥后5、10 d和15 d測定免疫器官指數、脾淋巴細胞增殖及血清中IL-2水平。結果表明，黃芪靈芝口服液高、中、低劑量組的胸腺指數顯著高于生理鹽水組，與環磷酰胺共處理各組的胸腺指數均顯著高于CY組（P＜0.05）。高、中劑量組的脾臟指數顯著高于生理鹽水組（P＜0.05）。高、中、低劑量組脾淋巴細胞增殖及IL-2水平顯著高于生理鹽水組；與環磷酰胺共處理組淋巴細胞刺激指數和IL-2水平顯著高于CY模型組（P＜0.05）。黃芪靈芝口服液對雛雞免疫功能具有促進作用，在一定程度上能有效拮抗環磷酰胺引起的免疫抑制，可望作為一種免疫增強劑。

黃芪；靈芝；雛雞；免疫功能；免疫增強劑

我國傳統的中草藥作為免疫增強劑已有上千年的歷史，分布廣闊，種類多達5 000余種，研究表明，具有肯定免疫增強作用的中藥有200多種［1］，并且隨著研究種類在不斷增加。中草藥免疫增強劑主要為補益類藥，能夠扶正固本，提高正氣驅除邪氣，如黃芪、靈芝、人參、枸杞子、五味子、何首烏、肉桂等。其中補益類藥黃芪和靈芝的主要有效活性成分分別為黃芪多糖和靈芝多糖，均具有抑菌抗病毒、抗腫瘤、抗應激及調節機體代謝等作用［2-4］，可作為免疫調節劑或促進劑。

黃芪靈芝多糖口服液，是由一定工藝提取的黃芪多糖和靈芝多糖復配而成的新制劑，有效成分為黃芪多糖和靈芝多糖。本研究采用環磷酰胺復制免疫抑制模型，通過測定免疫器官指數、脾淋巴細胞轉化率、血清中IL-2含量?？疾禳S芪靈芝口服液對雛雞免疫功能的促進作用。

1材料與方法

1.1試驗雞1日齡黃羽肉雞200只，以及飼料，均購自中國農業科學院家禽研究所（揚州），常規飼養，適應1周后用于試驗。

1.2藥品黃芪靈芝口服液，某動物保健品有限公司提供，有效成分為黃芪多糖（5.5 mg/mL）和靈芝多糖（0.5 mg/mL），批號20131222。注射用環磷酰胺（CY），200 mg/支，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司。黃芪精口服液，10 mL/支，為含6.5 mg/mL黃芪多糖的水溶液，批號13092402，江蘇聚榮制藥集團有限公司。

1.3主要試劑RPMI 1640培養基，美國Gibco公司；胎牛血清，HyClone公司；RPMI1640完全培養液內含200 IU/mL青霉素、200 μg/mL鏈霉素、10%胎牛血清。刀豆蛋白AⅣ，Sigma公司。淋巴細胞分離液（1.077±0.002），北京索萊寶科技有限公司；雞IL-2 ELISA試劑盒，杭州貝碩生物科技有限公司；其他試劑為國藥集團化學試劑有限公司。

1.4方法

1.4.1試驗分組7日齡黃羽肉雞，隨機分成9組，每組20只。試驗分組如下：黃芪靈芝口服液高劑量（10 mL/kg體重）、中劑量（5 mL/kg體重）和低劑量組（1 mL/kg體重）；80 mg/kg體重環磷酰胺組；環磷酰胺+黃芪靈芝口服液高、中和低劑量組；1 mL/kg黃芪精口服液陽性對照組，生理鹽水陰性對照組。黃芪靈芝口服液、陽性對照及生理鹽水灌服給予，每天1次連用5 d。環磷酰胺肌肉注射，每天1次連用3 d。分別于用藥后5、10、15 d隨機取6只雞，測定免疫器官指數、脾臟淋巴細胞轉化率及血清中IL-2水平。

1.4.2免疫器官指數稱量體重、胸腺、腔上囊、脾臟的重量，分別計算胸腺指數、脾臟指數、腔上囊指數。

免疫器官指數=免疫器官鮮重（g）/體重（kg）1.4.3脾淋巴細胞增殖試驗雞脾淋巴細胞懸液制備，淋巴細胞轉化試驗及刺激指數計算同文獻［5］。1.4.4血清中IL-2測定按雞IL-2 ELISA試劑盒操作說明書進行，測定雛雞血清中IL-2水平。

1.5數據分析采用SPSS17.0軟件進行數據分析。采用單因素方差分析Duncan′s法進行統計分析。

2結果與分析

2.1黃芪靈芝口服液對雛雞免疫器官的影響不同劑量黃芪靈芝口服液對雛雞脾臟、胸腺及腔上囊指數的影響見表1。

表1不同劑量黃芪靈芝口服液對雛雞免疫器官指數的影響

由表1可以看出，環磷酰胺組脾臟、胸腺及腔上囊指數均顯著低于生理鹽水組（P＜0.05）。與環磷酰胺組比較，環磷酰胺+黃芪靈芝口服液各組脾臟指數雖增加，但差異不顯著（P＞0.05）；胸腺指數均顯著提高；給藥后15 d中劑量組腔上囊指數差異顯著（P＜0.05）。黃芪靈芝口服液高、中劑量組及陽性對照組雛雞脾臟指數顯著高于生理鹽水組（P＜0.05），高、中劑量組與陽性對照組無顯著性差異。與生理鹽水組比較，黃芪靈芝口服液高、中、低劑量組，胸腺指數差異顯著（P＜0.05），與陽性對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）；高、中、低劑量組腔上囊指數均高于生理鹽水組，但只有中劑量組差異顯著（P＜0.05）。

2.2黃芪靈芝口服液對雛雞脾淋巴細胞增殖的影響不同劑量黃芪靈芝口服液處理后，雛雞脾淋巴細胞刺激指數見表2。

表2不同劑量黃芪靈芝口服液對雛雞脾淋巴細胞刺激指數的影響

除了用藥10 d時高、低劑量組外，用藥5～

15 d，黃芪靈芝口服液各組脾淋巴細胞刺激指數均顯著高于生理鹽水組（P＜0.05）。環磷酰胺+黃芪靈芝口服液高、中、低各組脾淋巴細胞刺激指數均高于對應日齡的環磷酰胺組（P＜0.05），從對脾臟淋巴細胞增殖的影響，可以說明黃芪靈芝口服液可有效對抗環磷酰胺造成的免疫抑制。

2.3黃芪靈芝口服液對雛雞血清中IL-2水平的影響雛雞經不同處理后，ELISA法測定血清中

IL-2的數據見表3。

表3不同劑量黃芪靈芝口服液對雛雞血清中IL-2的影響（OD450）

由表3可以看出，環磷酰胺及生理鹽水對照組雞血清中IL-2水平無顯著差異（P＞0.05）。用藥15 d時黃芪靈芝口服液單獨處理或與環磷酰胺共處理各組，血清中IL-2的水平均顯著高于生理鹽水組和環磷酰胺對照組（P＜0.05），與陽性對照組無顯著性差異（P＞0.05）。用藥5～10 d時，除了用藥10 d時環磷酰胺組+黃芪靈芝口服液中劑量組顯著高于生理鹽水組和環磷酰胺組（P＜0.05）外，其他處理組差異均不顯著（P＞0.05）。

3討論

腔上囊、胸腺和脾臟是禽類的主要免疫器官，介導全身的體液免疫和細胞免疫。因此，對免疫器官的影響是評價其對機體免疫調節效果的重要指標。本試驗表明，不同劑量的黃芪靈芝口服液能促進免疫器官的發育，并能有效地拮抗環磷酰胺對脾臟和胸腺的免疫抑制，與以往研究報道相似［6-8］。

淋巴細胞轉化是評價機體免疫功能的重要指標之一。黃芪靈芝口服液能夠促進脾臟淋巴細胞增殖并能有效的拮抗環磷酰胺造成的免疫抑制，且具有一定的劑量效應。Chen等［9］報道，黃芪多糖能協同ConA刺激雞脾淋巴細胞的增殖，在40、80、160 μg/mL時增殖作用呈劑量依賴性增加。黃芪靈芝口服液一定程度上還能夠提高血清中IL-2含量，與類似研究結果一致［10］。

綜上所述，黃芪靈芝口服液能夠促進雛雞機體的免疫功能，可作為一種新型的免疫增強劑。

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S853.7

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0529-6005（2016）08-0059-03

2015-07-10

江蘇省高校優勢學科建設工程項目資助；揚州大學“新世紀人才工程”資助

周澤偉，男（1988-），碩士生，研究方向為獸醫藥理與毒理學，E-mail：dzwzhilu@163.com

張雨梅，E-mail：zym@yzu.edu.cn