高危型人乳頭瘤病毒E6/E7mRNA檢測在宮頸錐切術后患者隨訪中的應用價值

吳晶晶，蘇維娜，林清清

高危型人乳頭瘤病毒E6/E7mRNA檢測在宮頸錐切術后患者隨訪中的應用價值

吳晶晶，蘇維娜，林清清

目的探討高危型人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7mRNA檢測在宮頸錐切術后患者隨訪中的應用價值。方法對因CIN II～III接受宮頸錐切術的174例患者進行宮頸錐切術后3個月、6個月、12個月、18個月、24個月的定期隨訪，每次隨訪均同時行液基超薄細胞學檢測（TCT）、HPVE6/E7mRNA和HPVDNA分型檢測。如TCT≥非明確意義的不典型鱗狀細胞（ASCUS）或HPVE6/E7mRNA或HPVDNA三項中有一項陽性，進行病理學檢查。以病理學結果為“金標準”，與HPV DNA檢測相比較，評價HPV E6/E7mRNA檢測對宮頸錐切術后CINII～III診斷價值。結果以病理檢查結果為“金標準”，HPV E6/E7mRNA和HPV DNA分型兩種檢測診斷CINII～III的靈敏度均為82.35%，但HPVE6/E7mRNA的特異度為89.74%，高于HPVDNA（48.72%），差異有統計學意義（P＜0.01）；陽性預測值為77.78%，高于HPV DNA（41.18%），差異有統計學意義（P＜0.05）。結論高危型HPV E6/E7mRNA檢測對宮頸錐切術后患者隨訪中有一定的應用價值，可有效指導陰道鏡下宮頸活檢的合理使用。

乳頭狀瘤病毒，人；宮頸上皮內瘤樣病變；宮頸錐切術

近年來由于宮頸細胞學篩查的普遍應用，使宮頸癌和宮頸上皮內瘤變（CIN）得以早期發現和治療。宮頸錐切術是CINII～III病變主要的治療方法，但術后復發或病灶殘留的概率達5%～15%［1］，并多數發生在術后兩年內，且錐切術后20年，仍有發生浸潤性宮頸癌的危險。因此錐切術后長期隨訪并篩查出術后病變可能復發或殘留的高危患者至關重要。高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染是導致宮頸癌的最主要致病因素。目前國內宮頸錐切術后隨訪主要采用新柏液基超薄細胞學檢測（TCT）聯合HPV DNA分型檢測。HPV E6/E7是病毒癌基因，HPVE6/E7 mRNA體現了癌基因活性程度。本研究對170例因CINII～III在福建醫科大學附屬第二醫院接受宮頸錐切術的患者進行為期2年的隨訪，探討高危型HPVE6/E7 mRNA檢測在宮頸錐切術后患者隨訪中的應用價值。現將結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2013年1月至2014年4月在本院收治的174例住院接受宮頸錐切術的患者作為研究對象，年齡25～59歲，平均41.97歲，所有患者術前均在門診行宮頸活檢術并病理證實為CINII～III級病灶，所有患者均順利完成手術，術后病理回報切緣陽性4例，行全子宮切除術。其余170例患者均進行宮頸錐切術后3個月、6個月、12個月、18個月、24個月的定期隨訪。

1.2研究方法

1.2.1TCT檢查方法用標準宮頸刷采集宮頸上皮脫落細胞，采集樣本后的毛刷放入細胞保存液中，細胞標本用美國Cytyc公司生產的ThinPrep2000液基細胞儀自動制片機制片，制成直徑約2 cm的薄層細胞涂片，經95%酒精固定，巴氏染色，在光學顯微鏡下盲法閱片。宮頸細胞學診斷按照國際癌癥協會推薦的TBS（2001）分類法。

1.2.2高危型HPVE6/E7mRNA檢測采用TCT剩余標本，采用高危型HPV E6/E7mRNA檢測試劑盒（購自科蒂亞生物技術公司），嚴格按照試劑盒說明進行操作。采用QuantiVirusTM冷光儀檢測。檢測結果為光子數，經計算軟件轉換為拷貝數，≥1 copy/ml為陽性。

1.2.3HPVDNA分型檢測采用PCR反向點雜交技術。使用HPV深圳亞能生物技術有限公司的HPV專用毛刷、細胞保存液、試劑盒和儀器。運用HPV專用毛刷取材，將鱗柱上皮交界處和宮頸管采集的細胞刷洗在HPV專用取樣瓶中。嚴格按照試劑盒說明進行操作。

1.2.4隨訪方法每次隨訪均同時行TCT、HPV E6/E7mRNA和HPV DNA分型檢測。如TCT≥非明確意義的不典型鱗狀細胞（ASCUS）或HPV E6/ E7mRNA或HPVDNA三項中有一項陽性，進行陰道鏡檢查根據情況行宮頸活檢術及宮頸管內搔刮術。如陰道鏡下活檢病理結果正常繼續隨訪，如發現異常根據病理結果作相應處理。病理結果為CINII+（包括CINII、CINIII、浸潤癌），判定為殘留或復發。

1.3統計方法采用SPSS 17.0統計軟件進行統計學分析，計數資料及敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值比較采用2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1TCT、HPVE6E7mRNA、HPV DNA及病理檢查結果170名患者中，TCT結果正常126例（74.12%），≥ASCUS44例（25.88%）；HPV E6E7mRNA陽性18例（10.59%）；HPVDNA陽性34例（20%）。56例進行陰道鏡檢查根據情況行宮頸活檢術及宮頸管內搔刮術，根據病理結果分為正常～CINI組以及CINII+組，病理檢查結果與HPV E6/ E7mRNA、HPV DNA分型檢測結果關系見表1。

表1　病檢結果與HPV E6E7mRNA、HPV DNA檢測結果例

2.2HPV E6/E7mRNA、HPV DNA兩種檢測方法對CINII+的診斷價值以病理檢查結果為“金標準”，兩種方法檢測診斷CINII+的靈敏度均為82.35%，但HPV E6/E7mRNA的特異度為89.74%，高于HPV DNA（48.72%），差異有統計學意義（X2=14.06，P＜0.01）；陽性預測值為77.78%，高于HPVDNA（41.185），差異有統計學意義（X2=6.34，P＜0.05）；陰性預測值為92.11%，也高于HPV DNA（86.36%），但差異無統計學意義（X2=0.07，P＞0.05）。見表2。

表2　兩種方法檢測CINII+的靈敏度、特異度、陽性預測值及陰性預測值比較%

3　討論

高危型HPV持續感染是宮頸癌及癌前病變CIN發生發展的首要因素，基于不少研究發現，單獨TCT等細胞學檢查在CIN術后隨訪中存在較多的假陰性率和假陽性率［2-3］。目前對國內宮頸錐切術后隨訪主要采用TCT聯合HPV DNA檢測。但HPV DNA檢測只是病因檢測，無法判斷病毒的活動程度，不能對宮頸病變的進展進行風險評估。本研究對CIN術后隨訪中發現異常的56例患者行宮頸活檢病理檢查，HPV DNA檢測CINII+具有較高的敏感度（82.35%）和陰性預測值（86.36%），但其特異度（48.72%）及陽性預測值（41.18%）較低，與Broccolo等［4］研究相符。進行HPVDNA檢測可能導致過多患者進行不必要的陰道鏡及宮頸活組織檢查，給患者造成不必要的傷害和負擔。

HPV E6/E7mRNA是病毒癌基因，與宿主細胞的抑癌基因P53和Rb相結合，導致細胞周期控制失常發生癌變。宮頸病變惡性進展的關鍵因素是E6E7的過表達，許多研究者提出對E6E7癌蛋白表達過程中反映其轉錄活性的E6E7mRNA進行檢測可能更能預測病情的進展［5-6］。本研究發現HPV E6/ E7mRNA檢測與HPV DNA檢測CINII+比較，靈敏度、陰性預測值差異無統計學意義（P＞0.05），特異度為89.74%，明顯高于HPVDNA檢測的48.72%，陽性預測值為77.78%，也高于HPV DNA檢測的41.18%，與Persson等［7］研究相符。高特異性在一定程度上可降低假陽性率，提高準確度縮短診斷時間，減少陰道鏡轉診率，避免過多隨訪中的過度診斷和過度治療等不必要的損害及經濟費用，可減輕患者心理負擔和痛苦。高危型HPVE6/E7mRNA檢測與HPVDNA分型檢測相當的敏感度也保證了對CINII+具有較高的辨別能力，使其漏診的風險并不高于HPVDNA檢測。2006年，歐洲生殖器感染及腫瘤研究組織已取得共識，認為HPVE6/E7mRNA檢測應作為篩查宮頸癌的一個重點研究對象［8］。目前已有多個國家開始進行宮頸HPVE6/ E7mRNA大規模篩查，并積累臨床資料。

因此，本研究認為高危型HPV E6/ E7 mRNA檢測在宮頸錐切術后患者隨訪中有一定的應用價值，可有效指導陰道鏡下宮頸活檢的合理使用。由于本研究涉及樣本量較小，HPV E6/E7mRNA與組織病理診斷上宮頸病變嚴重程度的關系尚未證實，尤其是對于HPVDNA和HPV E6/E7mRNA均陽性而病理檢查正常的患者更需進行隨訪觀察。

［1］曹澤毅.中華婦產科學［M］.3版.北京:人民衛生出版社，2014:2108.

［2］JainS，TsengCJ，HorngSG，etal.Negative predictive value of human papillomavirus test following conizationof the cervix uteri［J］.Gynecol Oncol，2001，82（1）:177-180.

［3］Paraskevaidis E，Koliopoulos G，AlamanosY，et al.Humanpapillomavirustesting and the outcome of treatment forcervical intraepithelialneoplasia［J］.Obstet Gynecol，2001，98（5）:833-836.

［4］BroccoloF，FusettiL，RosiniS，etal.ComparisonofoncogenicHPVType-specificviral DNAloadandE6E7mRNAdetectionin cervical samples:Results from a multicenter study［J］.JournalofMedicalVirology，2013，85（3）:472-482.

［5］Argyri E，Tsimplaki E，Daskalopoulou D，et al.E6E7mRNA expression of high-risk HPV types in 849 Greek women［J］.Anticancer Research，2013，33（9）:4007-4011.

［6］TjalmaWA，DepuydtCE.Cervical cancer screening:whichHPV test should be used L1 or E6/E7［J］？European Journal of Obstetrics&Gynecology and Reproductive Biology，2013，170（1）:45-46.

［7］PerssonM，BrismarWendel S，LjungbladL，et al.High-riskhuman papillomavirus E6/ E7mRNAandL1DNAasmarkersofresidnal/recurrent cervical intraepithelial neoplasia［J］.Oncol Rep，2012，28（1）:346-352.

［8］Cuschieri K，Wentzensen N.Human popillomavirus mRNA and p16 detection as biomarkers for the improved diagnosis of cervicalneoplasis［J］.CancerEpidemiology Biomarkers&Prevention，2008，17（10）:2536.

（本文編輯：姜曉慶）

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.09.041

R737.33

A

1671-0800（2016）09-1204-03

泉州市科技計劃項目（Z20130219）

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林清清，Email：qzwjj1979 @163.com

2016-07-10