澀柿樹皮單寧的純化及抗氧化活性

楊瓊瓊，李 東，屈 戀，張 強，劉雄民

（廣西大學化學化工學院，廣西 南寧 530004）

澀柿樹皮單寧的純化及抗氧化活性

楊瓊瓊，李 東，屈 戀，張 強，劉雄民*

（廣西大學化學化工學院，廣西 南寧 530004）

選用超聲波法從澀柿樹皮中提取單寧，溶劑法、大孔樹脂法純化粗提物，并考察了不同純度的單寧對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基和羥自由基（·OH）的清除作用。結果表明：澀柿樹皮單寧的超聲波提取率為5.6%；大孔吸附樹脂純化澀柿樹皮單寧的最佳工藝參數為：以HPD-500樹脂為吸附樹脂，上柱流速1.5 mL/min，上樣質量濃度1.2 mg/mL；洗脫流速1.5 mL/min，乙醇體積分數60%；粗提物、乙酸乙酯萃取物、大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經大孔樹脂純化后產物、乙酸乙酯萃取物經大孔樹脂純化后產物的純度分別為5.6%、11.5%、19.4%、47.4%、53.3%；當質量濃度為1 mg/mL時各純度單寧對DPPH自由基有最大清除率，清除率分別為69.07%、80.19%、92.96%、94.02%、94.05%；清除DPPH自由基的IC50值分別為0.68、0.52、0.13、0.12、0.11 mg/mL；當質量濃度為0.9 mg/mL時各純度單寧對·OH有最大清除率，清除率分別為43.04%、73.99%、83.00%、94.68%、96.23%。

單寧；純化；抗氧化活性

柿子（Diospyros kaki Thunb.）為柿科（Ebenaceae）柿屬（Diospyros L.）植物，分為甜柿和澀柿兩大類，廣泛分布在溫帶、熱帶和亞熱帶地區[1]。中國、西班牙、日本、韓國、美國等為主要栽培國家，其中中國在柿栽培面積和產量上均居世界第一位[2]。柿樹果實具有降血壓、解蛇毒、解酒、抗癌和抗病毒等多種功能[3]。澀柿樹皮即柿科植物的樹皮，《本草圖經》記載澀柿樹皮具有主下血和燙火傷的功效，是我國的一味中草藥之一，也是栲膠原料之一。澀柿樹皮含有豐富的柿單寧[4]。柿單寧是主要由兒茶素、棓兒茶素、兒茶素-3-棓酸和棓兒茶素-3-棓酸4 種單體組成的酚類物質[5]。

氧自由基活性極大，具有一個不配對電子，它能奪取與其相遇的分子中的一個電子與自己配對，這將致使人體內的正常生化過程受到干擾，毀壞正常細胞，對機體造成傷害。當體內氧自由基積累過多，就會引發心血管、皮膚老化、內分泌、新陳代謝以及各類癌癥等許多慢性疾病[6]。澀柿樹皮中含有豐富的多酚基抗氧化化合物（主要為單寧），該物質被證實通過使機體免于自由基介導損傷而減小慢性疾病的威脅[7]，而單寧被認為具有抗誘變、抗癌、抗氧化活性[8]。

關于柿單寧的研究情況國內外研究報道較多，就抗氧化性方面，國外學者Ahn[9]、Han[10]等發現柿種子和柿葉提取物具有自由基清除能力，并能抑制細胞中脂質過氧化。Gorinstein等[11]研究發現，柿皮和柿果肉對實驗小鼠具有顯著的抗氧化降膽固醇和降血脂功效。Katsubet等[12]研究發現柿單寧具有抗低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）氧化能力。國內學者顧海峰等[13]制備了不同分子質量的柿子單寧，并研究其抗氧化活性，發現高分子質量柿單寧具有較強清除自由基能力。我國對柿樹的開發利用僅局限于葉子和果實，從其樹皮中提取具有抗氧化及清除自由基功能的生物活性物質尚未見報道。澀柿樹皮資源在我國極為豐富，經過修剪丟棄的柿樹枝可作為長期大量的植物來源。若能把澀柿樹皮中的單寧提取出來，應用于抗氧化、降血壓、解蛇毒等方面，并進行合理開發利用，其應用前景廣闊，發展潛力較大。

單寧粗提物中含有大量的蛋白質、色素、脂類和糖等雜質，因此需要進一步分離純化。單寧的分離純化技術有有機溶劑萃取法、大孔樹脂法等。乙酸乙酯能夠溶解低聚的縮合單寧和多種水解單寧[14]。大孔吸附樹脂具有吸附量大、吸附速率快、選擇性好、方便再生處理等優點，被廣泛用于天然產物的初步分離純化[15]。

本研究采用超聲波輔助提取的方法對澀柿樹皮單寧進行了提取，分別采用乙酸乙酯萃取法、大孔吸附樹脂法、乙酸乙酯萃取法與大孔吸附樹脂法聯用分離純化澀柿樹皮粗提物，考察了不同純度的單寧清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基和羥自由基（·OH）的能力，評價了其抗氧化性能，為澀柿樹皮的開發利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

澀柿樹皮：2014年7月上旬采自廣西南丹縣，將修剪的枝干剝取樹皮去芯材部分得到樹皮，將樹皮60 ℃烘干后粉碎，40 目過篩后低溫保存備用。

DPPH 美國Sigma公司；AB-8、HPD-500、D-101型大孔樹脂 南開大學化工廠；兒茶素標準品（分析純） 中國藥品生物制品檢定所；甲醇、濃硫酸、香草醛、無水乙醇均為分析純。

1.2 儀器與設備

多用途恒溫超聲波提取儀 上海比朗儀器有限公司；UV-2550型紫外-可見分光光度計 日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 澀柿樹皮單寧的提取

將新鮮的澀柿樹皮在恒溫干燥箱中60 ℃烘干，將其粉碎過40 目篩，得到干燥的澀柿樹皮粉末原料。準確稱取100 g干燥澀柿樹皮粉末加2 000 mL石油醚在60 ℃、360 W、40 min的超聲提取條件下對原料進行脫脂，然后揮干石油醚得到干燥脫脂澀柿樹皮粉末。采用超聲波法在提取條件為料液比1∶20（m/V）、70 ℃、360 W條件下提取40 min得到粗提物。

1.3.2 單寧的定量分析[16]

采用香草醛-硫酸法進行，分別準確量取質量濃度為0.025、0.050、0.075、0.100、0.125、0.150、0.175、0.200、0.225 mg/mL的兒茶素標準溶液各0.5 mL于9 支10 mL的棕色容量瓶中，依次加入30 mg/mL香草醛-甲醇溶液、30%硫酸-甲醇溶液各2.5 mL，搖勻，30 ℃水浴條件下放置30 min。以甲醇和相應體積的試劑做參比液，以0.150 mg/mL兒茶素標準溶液及樣品溶液顯色后，在400～600 nm波長范圍內掃描，確定最大吸收波長，再在最大吸收波長處測定系列質量濃度標準溶液吸光度。以質量（X，mg）為橫坐標、吸光度（A500nm）為縱坐標，繪制標準曲線。取0.5 mL提取液，與標準樣品同樣方法測定其在工作波長處的吸光度，計算澀柿樹皮單寧的提取率。

1.3.3 澀柿樹皮單寧樣品的分離與純化

1.3.3.1 乙酸乙酯萃取

100 mL粗提液，用石油醚100 mL萃取1 次，收集水相，水相再用一倍體積的氯仿萃取3 次，收集水相，水相再用二倍體積的乙酸乙酯萃取6 次，合并6 次萃取的乙酸乙酯相，收集乙酸乙酯相和乙酸乙酯萃余相，分別在40 ℃旋轉蒸發，40 ℃恒溫烘干得到澀柿樹皮單寧的乙酸乙酯萃取物和乙酸乙酯萃余相純化樣品。

1.3.3.2 大孔樹脂的靜態篩選

稱取已預處理的AB-8、HPD-500、D-101型大孔樹脂各2 g，分別裝入250 mL三角瓶中，然后加入50 mL已知質量濃度的單寧粗提液，置于搖床中，設置溫度為30 ℃，振蕩速率為110 r/min，振蕩24 h后過濾，然后用體積分數為60%的乙醇50 mL洗脫樹脂，分別測定濾液及洗脫液中單寧的含量，計算樹脂的吸附率和解吸率，選出最佳大孔吸附樹脂。

1.3.3.3 HPD-500樹脂對澀柿樹皮單寧的分離工藝考察

量取15 mL已預處理的HPD-500大孔吸附樹脂，濕法裝柱。每次量取300 mL樣品溶液上柱，設定一定的流速，用分部收集器收集流出液。通過改變上樣液流速（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL/min）和上樣液質量濃度（0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg/mL）確定其最適上樣流速和上樣液質量濃度。

吸附完成后，通過改變洗脫流速（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL/min）和乙醇體積分數（20%、40%、60%、80%、90%、95%）的實驗，考察其最適洗脫流速和洗脫劑體積分數。

1.3.4 單寧抗氧化性的測定

1.3.4.1 ·OH的清除作用[17-19]

依次取10 mL容量瓶分別編號，各加入7.5 mmol/L鄰二氮菲溶液1.0 mL、pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered saline，PBS）2.0 mL和7.5 mmol/L FeSO4溶液l.0 mL，混勻后分別加入1.0 mL不同質量濃度的樣品溶液，再各加入0.1%的H2O2溶液l.0 mL，并加蒸餾水定容至10 mL。搖勻后，37 ℃水浴保溫1 h，在 510 nm波長處測定其吸光度A1，以蒸餾水代替試樣的吸光度A2，以蒸餾水代替試樣及H2O2的吸光度A0，以消除樣品本身影響，以抗壞血酸作為對照，以蒸餾水作參比液。自由基清除率可用以下公式計算。

1.3.4.2 DPPH自由基的清除作用[20]

配制濃度為2h10－4mol/L的DPPH自由基-無水乙醇溶液。取樣品溶液2 mL和2 mL DPPH自由基溶液，搖勻，放置30 min，以提取溶劑無水乙醇調零，在517 nm波長處測定吸光度記為Ai，2 mL無水乙醇加入2 mL DPPH自由基溶液，搖勻，測定吸光度Ac，2 mL樣品溶液加入2 mL無水乙醇，搖勻，測定吸光度Aj。每個濃度平行測3 次，取平均值。以抗壞血酸（VC）作陽性對照，依照上述方法測定，根據下式分別計算樣液和VC對DPPH自由基的清除率。

式中：Aj為樣品自身吸光度；Ac為DPPH自由基本身吸光度；Ai為樣品對DPPH自由基作用后的吸光度。

2 結果與分析

2.1 單寧的定性與定量分析

2.1.1 單寧定性分析結果

圖1 兒茶素、粗提物溶液的紫外-可見吸收光譜Fig.1 Uv-visible absorption spectra of catechin and the crude extract

由圖1可知，澀柿樹皮中的單寧與兒茶素的光譜特征相似，說明樣品中含有單寧。

2.1.2 單寧定量分析結果

經香草醛-硫酸法顯色后，兒茶素標準溶液在500 nm波長處有最大吸收，以吸光度A500nm和兒茶素質量X得到回歸方程為：A500nm=6.185 1X+0.006 6（R2=0.999 5）。由此可得澀柿樹皮單寧的提取率為5.6%。

2.2 澀柿樹皮單寧分離純化工藝的確定

2.2.1 大孔樹脂的篩選

表1 3 種大孔樹脂對樣品中單寧的靜態吸附和解吸結果Table 1 Adsorption and desorption efficiency of tannin using three types of resins

以樹脂對單寧的吸附能力與解吸能力為指標，通過樹脂靜態吸附與解吸實驗選擇樹脂類型，結果如表1所示。在實驗條件下，HPD-500型樹脂對澀柿樹皮中單寧的吸附作用最好，吸附率達 70.95%，解吸率為95.66%。D101型樹脂解吸率雖然最高，達97.44%，但吸附率比HPD-500型樹脂稍低。綜合比較這兩種樹脂，選用HPD-500型大孔樹脂進行動態吸附實驗。

2.2.2 吸附流速對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧的影響

由圖2可知，樹脂的吸附率隨著流速的增加而降低。當上柱流速在0.5～1.5 mL/min時吸附率均達到86%以上且差別不大，之后流速加大吸附率降低顯著，這是因為上柱流速過大，大量單寧還來不及被樹脂充分吸附便流出樹脂柱。雖然較低的流速對吸附率大，但流速過低，耗時長，工作效率低，經綜合考慮確定，以1.5 mL/min的流速進行上柱較為適宜。

圖2 不同流速對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧效果的影響Fig.2 Effect of sample loading flow rate on adsorption efficiency of tannin

2.2.3 上樣質量濃度對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧的影響

圖3 樣液質量濃度對HPD-500樹脂吸附澀柿樹皮單寧效果的影響Fig.3 Effect of sample concentration on adsorption efficiency of tannin

如圖3所示，HPD-500型大孔樹脂的吸附量隨單寧質量濃度的升高而增大，吸附率隨單寧質量濃度增大而降低。雖然單寧質量濃度為0.4 mg/mL時吸附率最大，但其吸附量僅為5.77 mg/g，樹脂吸附能力未得到充分發揮。質量濃度為1.2 mg/mL時，吸附率為88.74%，樹脂吸附量已達10.51 mg/g，吸附率和吸附量均較高。綜合考慮，選擇質量濃度為1.2 mg/mL比較適宜。

2.2.4 不同解吸流速對澀柿樹皮單寧洗脫的影響

如圖4所示，樹脂的解吸率隨著流速的增加而降低。當流速在0.5～1.5 mL/min時吸附率均達到94%以上且差別不大，之后流速加大解吸率降低顯著，這可能是因為流速過快，洗脫劑未能與被吸附的單寧充分作用而將其從大孔樹脂的吸附位點上置換出來。雖然較低的流速解吸率大，但流速過低，耗時長，工作效率低，經綜合考慮確定，以1.5 mL/min的流速進行解吸較為適宜。

圖4 不同洗脫流速對澀柿樹皮單寧解吸的影響Fig.4 Effect of elution flow rate on desorption efficiency

2.2.5 不同洗脫劑體積分數對澀柿樹皮單寧洗脫的影響

澀柿樹皮單寧類化合物經樹脂柱吸附后，再將其從樹脂上洗脫下來才能達到分離純化的目的。水和乙醇溶液的洗脫效果較好[21]。考慮到澀柿樹皮一般應用在中藥行業中，本實驗選用無毒性的乙醇-水作解吸劑，研究乙醇體積分數對解吸率的影響，其結果如圖5所示。由于單寧化合物能與大孔樹脂間產生強烈的氫鍵作用，所以吸附在樹脂上的單寧類物質不會被水洗脫下來。澀柿樹皮單寧的性質不同與大孔樹脂之間的吸附作用強度也不同。體積分數較低的乙醇只能使少部分單寧洗脫下來，并且隨著乙醇體積分數的增加，樹脂的解吸率顯著增加。當乙醇體積分數增加到60%時，解吸率達到最大，之后略有降低。故選擇乙醇體積分數為60%。

圖5 不同體積分數乙醇對澀柿樹皮單寧洗脫效果的影響Fig.5 Effect of ethanol concentration on desorption efficiency

2.3 樣品純度分析

采用不同的純化方法純化樣品液，經香草醛-硫酸法顯色測定單寧純度。結果如表2所示，不同純化方法得到的樣品純度各不相同。粗提物經乙酸乙酯萃取后純度約為粗提物的2 倍，經大孔樹脂純化后純度約為粗提物的3 倍。乙酸乙酯萃取后的萃余相經HPD-500型樹脂純化后所得產物的純度約為粗提物的8 倍，乙酸乙酯萃取后的萃取相經HPD-500型樹脂純化后所得產物的純度約為粗提物的10 倍。采用溶劑萃取與大孔樹脂聯用方法得到的澀柿樹皮單寧純度高于文獻[22]柿葉多酚純度。

表2 樣品純度分析結果Table 2 Purity of the crude extract and purified samples

可見，單寧粗提物雜質含量較多，很難經過簡單的某種純化方法達到很好的分離效果，這也正是天然產物分離的難點，如果能解決這一問題，將有利于促進我國中藥現代化進程。

2.4 澀柿樹皮單寧對DPPH自由基的清除效果

考察了單寧酸、不同純度的單寧質量濃度在0.10～1.00 mg/mL時對DPPH自由基的清除率（圖6），在實驗質量濃度范圍內，清除率隨各試樣質量濃度的增加而增大。各試樣均在質量濃度為1.00 mg/mL時有最大清除率，最大清除率分別為69.07%、80.19%、92.96%、94.02%、94.05%；清除DPPH自由基的IC50值分別為0.68、0.52、0.13、0.12、0.11 mg/mL；其中大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經大孔樹脂純化后產物、乙酸乙酯萃取后經大孔樹脂純化后產物在質量濃度為0.5 mg/mL時與等質量濃度的單寧酸對清除DPPH自由基能力幾乎相同，均達到90%以上，表現出較高清除能力。依據IC50值，單寧對DPPH自由基清除能力次序為：乙酸乙酯萃取后經大孔樹脂純化后產物＞乙酸乙酯萃余物經大孔樹脂純化后產物＞大孔樹脂純化物＞乙酸乙酯萃取物＞粗提物，與圖6反映的結果一致。

圖6 不同質量濃度樣品對DPPH自由基的清除率Fig.6 Percentage scavenging of different samples for DPPH radical

2.5 澀柿樹皮單寧對·OH的清除效果

考察了單寧酸、不同純度的單寧質量濃度在0.10～0.90 mg/mL時對·OH的清除率，結果見圖7。在實驗質量濃度范圍內，清除率隨各試樣質量濃度的增加而增大。各試樣均在質量濃度為0.90 mg/mL時有最大清除率，最大清除率分別為43.04%、73.99%、83.00%、94.68%、96.23%，其中大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經大孔樹脂純化后產物、乙酸乙酯萃取后經大孔樹脂純化后產物均比同等質量濃度的單寧酸對清除·OH能力強。

圖7 不同質量濃度樣品對·OH的清除率Fig.7 Percentage scavenging of different samples for ·OH

綜上可知，不同純度的澀柿樹皮單寧的DPPH自由基和 ·OH清除能力差異較大。雖然DPPH自由基和 ·OH清除率數據略有區別，但是總體趨勢一致，即大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經大孔樹脂純化后產物、乙酸乙酯萃取后經大孔樹脂純化后產物的抗氧化活性較強，粗提物和乙酸乙酯萃取物較弱。造成DPPH自由基和·OH清除率差異的原因可能是兩者的反應條件與機理不同[23]。另外，本實驗中澀柿樹皮單寧的DPPH自由基和·OH清除率高于文獻[24]中柿葉多酚對這兩種自由基的清除率，略低于文獻[25]柿果不同部位單寧對這兩種自由基的清除率，原因可能是澀柿樹皮單寧含量高于柿葉單寧含量，低于柿果單寧含量。

3 結 論

以澀柿樹皮粗提物為原料，考察各種大孔樹脂對單寧的動態吸附效率，篩選出了對澀柿樹皮單寧純化效果較好的大孔樹脂為HPD-500，其吸附率為70.95%，解吸率為95.66%，HPD-500樹脂動態純化的較適工藝參數為：上柱流速1.5 mL/min，上樣質量濃度1.2 mg/mL，洗脫流速1.5 mL/min，洗脫劑的乙醇體積分數60%。

分離、純化得到了不同純度的澀柿樹皮單寧，并分析了不同純度的澀柿樹皮單寧抗氧化活性。結果表明，不同純化方法得到單寧樣品純度差異較大，說明單寧類物質是個極復雜的混合物，很難通過簡單的純化方法得到高純度單寧。不同純度的澀柿樹皮單寧對DPPH自由基和·OH均有一定的清除作用，各單寧樣品的自由基清除能力呈現出明顯的劑量依賴性。總體上看，大孔樹脂純化物、乙酸乙酯萃余物經大孔樹脂純化后產物、乙酸乙酯萃取物經大孔樹脂純化后產物的抗氧化活性較強，值得進一步提純與研究。

[1] 王仁梓. 柿[M]. 北京: 中國林業出版社, 1982: 1-20.

[2] 傅建敏, 梁晉軍, 周道順. 柿葉有效成分研究綜述[J]. 中南林業科技大學學報, 2013(11): 66-72. DOI:10.3969/j.issn.1673-923X.2013.11.013.

[3] WU P W, HWANG L S. Determination of soluble persimmon tannin by high performance chromatography gel permeation chromatography[J]. Food Research International, 2002, 35: 793-800. DOI:10.1016/S0963-9969(02)00076-5.

[4] GU Haifeng, LI Chunmei, XU Yujuan. Structural features and antioxidant activity of tannin from persimmon pulp[J]. Food Research International, 2008, 41(2): 208-217. DOI:10.1016/ j.foodres.2007.11.011.

[5] 張寶善, 伍曉紅, 陳錦屏. 柿單寧研究進展[J]. 陜西師范大學學報(自然科學版), 2008(1): 99-105. DOI:10.15983/j.cnki.jsnu.2008.01.017.

[6] LIU Zhongli, WANG Panfen, LIU Youcheng. Studies on Bioantioxidants (V): inhibition of autoxidation of linoleic acid by vitamin C and lipophilic vitamin C derivatives in micelles[J]. Science in China: Series B, 1992, 35(11): 1307-1314.

[7] SHELA G, GUSTAW W K, ELZBIETA B, et al. The influence of persimmon peel and persimmon pulp on the lipid metabolism and antioxidant activity of rats fed cholesterol[J]. Nutritional Biochemistry, 1998, 9: 223-227. DOI:10.1016/S0955-2863（98）00003-5.

[8] UCHIDA S, OZAKI M, AKASHI T, et al. Effects of (－)-epigallocatechin-3-O-gallate(green tea tannin)on the life span of strokeprone spontaneously hypertensive rats[J]. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology, 1995, 22: 302-303. DOI:10.1111/ j.1440-1681.1995.tb02928.x.

[9] AHN H S, JEON T L, LEE J Y, et al. Antioxidative activity of persimmon and grape seed extract: in vitro and in vivo[J]. Nutrition Research, 2002, 22: 1265-1273. DOI:10.1016/S0271-5317（02）00429-3.

[10] HAN J, KANG S, CHOUE R. Free radical scavenging effect of Diospyros kaki, Laminaria japonica and Undaria pinnatifida[J]. Fitoterapia, 2002, 73(7/8): 710-712. DOI:10.1016/S0367-326X（02）00236-8.

[11] GORINSTEIN S, ZEMSER M, WEISZ M, et al. Fluorometric analysis of phenolics in persimmons[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 1994, 58: 1087-1092. DOI:10.1271/bbb.58.1087.

[12] KATSUBET T, TABATAH H, OHTA Y, et al. Screening for antioxidant activity in edible plant products: comparison of lowdensity lipoprotein oxidation assay, DPPH radical scavenging assay, and Folin-Ciocalteu assay[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2004, 52(8): 2391-2396. DOI:10.1021/jf035372g.

[13] 顧海峰, 李春美, 徐玉娟, 等. 柿子單寧的制備及其抗氧化活性研究[J]. 農業工程學報, 2007, 23(5): 241-245. DOI:10.3321/ j.issn:1002-6819.2007.05.047.

[14] 陳薈蕓. 肉桂單寧提取分離純化及抗氧化活性研究[D]. 南寧: 廣西大學, 2014.

[15] 潔麗, 楊中漢, 袁珂. 新型凝膠樹脂及大孔吸附樹脂在中草藥成分分離純化中的應用[J]. 中藥材, 2005, 28(3): 239-242. DOI:10.3321/ j.issn:1001-4454.2005.03.035.

[16] 楊依姍, 李春美, 陳美紅. 香草醛/硫酸法測定柿子單寧含量條件的優化[J]. 食品科技, 2010, 35(12): 267-271. DOI:10.13684/j.cnki. spkj.2010.12.049.

[17] 謝云濤, 馬國平, 何玉鳳, 等. BPR-硫脲催化光度法對羥基自由基的檢測及清除作用[J]. 化學通報, 2006, 69(6): 458-461. DOI:10.3969/ j.issn.0441-3776.2006.06.021.

[18] 丁宗慶, 李小玲. 溴甲酚紫光度法測定水果的抗氧化活性[J]. 食品研究與開發, 2008, 29(3): 54-57. DOI:10.3969/ j.issn.1005-6521.2008.03.017.

[19] 張德莉, 羅光富, 陳燕, 等. 溴甲酚綠測定Fenton產生的羥基自由基[J].三峽大學學報(自然科學版), 2005, 27(5): 449-452. DOI:10.3969/ j.issn.1672-948X.2005.05.018.

[20] 趙國建, 李桂峰, 董周永, 等. 石榴籽中多酚的提取及其抗氧化作用研究[J]. 西北植物學報, 2008, 28(12): 2532-2537. DOI:10.3321/ j.issn:1000-4025.2008.12.027.

［21］ CAO Xi， WANG Chuan， PEI Hua， et al. Separation and identification of polyphenols in apple pomace by high-speed counter-current chromatography and high-performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography, 2009, 1216: 4268-4274. DOI:10.1016/j.chroma.2009.01.046.

[22] 王超華. 柿葉中酚類物質的提取、純化及初步鑒定研究[D]. 長沙:湖南農業大學, 2010.

[23] 張東娣, 康文藝, 劉瑜新, 等. 開封產3 種白色菊花提取物的抗氧化活性[J]. 精細化工, 2009, 26(5): 464-467. DOI:10.13550/ j.jxhg.2009.05.024.

[24] 趙豐麗, 張云鴿, 龐冠蘭. 柿葉多酚測定條件及其抗氧化活性的研究[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2012(11): 173-176. DOI:10.3969/ j.issn.1005-9903.2012.11.051.

[25] 陳美紅, 李春美, 楊依姍. 柿子不同部位單寧提取物清除自由基作用的比較研究[J]. 食品科技, 2009, 34(8): 120-123. DOI:10.11974/ nyyjs.20150501031.

Purification and Antioxidant Activity of Tannin from Persimmon Tree Bark

YANG Qiongqiong, LI Dong, QU Lian, ZHANG Qiang, LIU Xiongmin*
(School of Chemistry and Chemical Engineering, Guangxi University, Nanning 530004, China)

Tannin in persimmon tree bark was ultrasonically extracted. The crude extract was purified by organic solvent extraction and macroporous resin adsorption. The free radical scavenging activity of tannin samples with different purities was studied using two different systems. The extraction yield of tannin in the crude extract was 5.6%. The optimum conditions for purifying the crude extract with HPD-500 macroporous resin were as follows: a sample containing 1.2 mg/mL tannin was loaded onto the column at a flow rate of 1.5 mL/min and eluted with 60% ethanol at a flow rate of 1.5 mL/min. The purity of the crude extract was 5.6%, which was increased to 19.4% after macroporous resin purification. After ethyl acetate extraction of the crude extract, the extract phase was purified to a purity of 11.5%. After further purification by macroporous resin adsorption， the purity of the raffinate and extract phases was increased to 47.4% and 53.3%, respectively. The crude extract and the resulting purified samples exhibited maximum percentage （69.07%, 92.96%, 80.19%, 94.02% and 94.05%, respectively) of DPPH radical scavenging activity at 1 mg/mL with an IC50value of 0.68, 0.13, 0.52, 0.12 and 0.11 mg/mL, respectively. The maximum percentage scavenging (43.04%, 83.00%, 73.99%, 94.68% and 96.23%, respectively) of ·OH by the tannin samples with different purities at 0.9 mg/mL was obtained.

tannin； purification； antioxidant activity

10.7506/spkx1002-6630-201607010

TS209

A

1002-6630（2016）07-0050-06

楊瓊瓊, 李東, 屈戀, 等. 澀柿樹皮單寧的純化及抗氧化活性[J]. 食品科學, 2016, 37(7): 50-55. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607010. http://www.spkx.net.cn

YANG Qiongqiong, LI Dong, QU Lian, et al. Purification and antioxidant activity of tannin from persimmon tree bark[J]. Food Science, 2016, 37(7): 50-55. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607010. http://www.spkx.net.cn

2015-05-08

廣西科學研究與技術開發項目（桂科攻 1099061-2；桂科攻 12118008-2）

楊瓊瓊（1989—），女，碩士研究生，研究方向為天然產物的提取分離純化及活性。E-mail：m15578000363@163.com

*通信作者：劉雄民（1969—），男，教授，博士，研究方向為天然產物的提取分離純化及活性。E-mail：xmliu1@gxu.edu.cn