微滴數字PCR法對肉制品中牛源和豬源成分的定量分析

苗 麗，張秀平，陳 靜，李 軻，王永杰，白 杰

（1.河南出入境檢驗檢疫局，河南 鄭州 450003；2.河南檢驗檢疫鑒定咨詢中心，河南 鄭州 450003）

微滴數字PCR法對肉制品中牛源和豬源成分的定量分析

苗 麗1，張秀平2，陳 靜2，李 軻2，王永杰2，白 杰2

（1.河南出入境檢驗檢疫局，河南 鄭州 450003；2.河南檢驗檢疫鑒定咨詢中心，河南 鄭州 450003）

為準確檢測肉及肉制品中肉源成分的含量，實驗基于微滴數字聚合酶鏈式反應（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）技術，建立了定量檢測肉及肉制品中牛肉和豬肉含量的方法。由ddPCR結果可知，在一定范圍內生鮮肉質量與DNA含量、DNA含量與DNA拷貝數之間均呈現明顯的線性關系，并以DNA含量為中間值計算出DNA拷貝數（C）與生鮮肉質量之間的換算公式M牛=0.062C-0.943，M豬=0.045C-1.72。應用建立的數字ddPCR方法對已知目標肉種含量的混合肉量進行檢測，結果表明測量值和真實值基本一致，且不受外源物種的干擾。通過對市售量品的檢測，能夠準確檢測出不同量品中牛肉和豬肉的含量，并發現存在摻假現象，說明該檢測方法具有良好的市場應用前景。本實驗建立的ddPCR方法在肉及肉制品中牛肉和豬肉含量的定量檢測方面具有較大的應用潛力，可為肉制品真偽鑒別日常檢測提供有力的科學依據。

微滴數字PCR；肉制品；DNA拷貝數；摻雜使假

苗麗， 張秀平， 陳靜， 等. 微滴數字PCR法對肉制品中牛源和豬源成分的定量分析［J］. 食品科學， 2016， 37（8）: 187-191.

MIAO Li， ZHANG Xiuping， CHEN Jing， et al. Quantitative analysis of bovine and porcine ingredients in meat products by droplet digital PCR［J］. Food Science， 2016， 37（8）: 187-191. （in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201608033. http://www.spkx.net.cn

肉及肉制品的“摻雜使假”是食品加工、流通和餐飲中存在的重要問題，由于價格差異帶來的利益誘惑，驅使一些不法商販和企業在牛、羊等高價肉制品中摻雜一些低廉肉種，用低價肉經過香精處理后冒充高價肉，嚴重侵害消費者權益［1-2］。三聚氰胺、瘦肉精、假牛肉事件以及2013年的馬肉風波［3］等食品問題層出不窮，政府及檢驗檢疫部門應加強對肉及肉制品“摻雜使假”行為的監督，而可靠的定性和定量檢測方法是檢驗的關鍵。

在所有動物源性成分的檢驗技術中，聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）技術廣泛應用于肉及肉制品的定性檢測［4-6］，特別是熒光定量PCR，不但能用于定性檢測［7］，還可以根據反應中的循環數Ct值與初始DNA模板濃度進行相對定量［8-9］。但是由于普通PCR的擴增效率低、定量PCR需建立標準曲線及容易出現假陽性等因素，使得其定量體系需進一步完善［10-11］。

微滴數字PCR（droplet digital PCR，ddPCR）是準確定量核酸的一門新的核酸擴增技術［12-13］。將含有DNA或RNA的PCR反應體系分成約20 000 個微滴，經PCR擴增后，逐個對每個微滴反應進行檢測，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數［14］。由于其不需要建立標準曲線，在低濃度的核酸含量下，也可高度靈敏和準確的對核酸的拷貝數進行絕對定量，使得ddPCR技術廣泛用于基因表達分析［15］、拷貝數變異分析［16-17］、致病菌檢測［18］、轉基因食品檢測［19］等，具有較好的應用前景。

本研究將具有絕對定量特性的ddPCR應用于肉及肉制品中牛肉和豬肉的定量檢測，旨在探索肉的質量與拷貝數之間的關系，通過檢測量品中不同肉種的質量來達到甄別惡意摻假與輕微沾染的目的，為質檢部門打擊不法商販，維護消費者權益，提供有力科學依據。

1　材料與方法

1.1材料

生鮮牛肉、豬肉、鴨肉、雞肉、羊肉、鵝肉、鵪鶉肉、貂肉、狐貍肉等肉量；豬肉松、牛肉松、火腿腸、速凍撒尿牛肉丸等牛肉和豬肉制品、小麥粉、大豆粉、玉米粉等購自鄭州某農貿市場。

1.2試劑

Tris-飽和酚 索萊寶生物科技有限公司；蛋白酶K（20mg/mL） 日本Takara公司；ddPCR Master Mix 美國Bio-Rad公司；組織裂解液（1 mol/L Tris-HCl、0.5 mol/L乙二胺四乙酸、10%十二烷基硫酸鈉）、氯仿-異戊醇（24∶1，V/V）、3 mol/L醋酸鈉溶液均為自配試劑。

1.3儀器與設備

DT500電子天平 江蘇常熟長青儀器廠；Z36HK高速冷凍離心機 德國Hermle公司；NTS-4000AM恒溫振蕩水槽 日本Tokyo Tikakikai公司；BioSpec-nano微量核酸蛋白儀 島津企業管理（中國）有限公司；Quest LabCycler梯度PCR儀 德國Senso公司；QX200 ddPCR微滴生成儀 美國Bio-Rad公司。

1.4方法

1.4.1引物與探針的設計

根據GenBank中公布的牛肉單拷貝β-actin基因序列，通過軟件Meglign對其特異區域進行多序列的比對，針對其保守區域設計牛肉的特異性引物和探針，用FAM熒光染料基團標記牛探針的5’端，非熒光淬滅基團BHQ標記牛探針的3’端，并滿足數字PCR的要求。豬源引物和探針引自文獻［20］，引物和探針均由上海生物工程技術有限公司合成。詳細序列見表1。

表1　ddPCR的引物和探針Table 1 Primer and probe sequences for quantitative ddPCR assays

1.4.2肉量制備

取新鮮肉量的肌肉組織，絞碎后于烤箱中80 ℃烘干72 h，于組織勻漿機中進行勻質處理，作為實驗的標準品，并用于制作模量混合量品，勻質過程中不同肉類分開處理，防止不同動物組織粉末交叉污染。

1.4.3DNA提取

采用苯酚-氯仿法提取基因組DNA［20-21］。向50 mg肉粉里加入700 μL組織裂解液和20 μL蛋白酶K，渦旋振蕩混勻，56 ℃水浴2 h，加入等量飽和酚，上下顛倒混勻，10 000 r/min離心10 min；取上清液，加入1/2體積的飽和酚和1/2體積的氯仿-異戊醇（24∶1，V/V），混勻，10 000 r/min離心10 min；取上清轉移至一干凈的EP管中，加入等量氯仿-異戊醇（24∶1，V/V），10 000 r/min離心10 min；取上清液，加入等體積的氯仿，10 000 r/min離心10 min；取上清液約400 μL，加入2.5 倍體積的無水乙醇及1/10體積的3 mol/L的醋酸鈉溶液，混勻，-20 ℃沉淀2 h后4 ℃ 12 000 r/min離心30 min；棄上清液，加入1mL 75%乙醇溶液，4 ℃、12 000 r/min離心10 min；棄上清液，自然干燥后加入ddH2O 100 μL溶解DNA，采用核酸定量測定儀測定提取肉量的DNA含量，確保提取DNA的OD260nm/OD280nm比值均在1.8～2.0之間，于-20 ℃保存備用。

1.4.4ddPCR反應程序

20 μL反應體系：上下游引物各1.8 μL（900 nmol/L），探針0.5 μL（250 nmol/L），ddPCR Master Mix 10 μL，DNA模板4 μL，其余用無菌水補齊。通過微滴生成儀約生成20 000 個微滴。PCR反應條件：95 ℃ 10 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 1 min，98 ℃ 10 min，40 個循環。最后用微滴分析儀對擴增產物進行分析。

1.4.5引物與探針的特異性

為驗證所建ddPCR方法的特異性，將通過試劑盒測定的牛肉和豬肉陽性量品作為陽性對照，以羊、雞、鴨、鵝、鵪鶉、貂、狐貍肉等常見肉及小麥粉、大豆粉、玉米粉等植物物種等提取的DNA作為模板進行檢測。

1.4.6肉量質量與拷貝數換算公式的確定

1.4.6.1肉量質量與DNA含量的關系

分別稱量10 個質量梯度的牛肉和豬肉（含量依次從5～50 mg）量品，提取基因組DNA，運用核酸定量測定儀測定DNA含量。每個梯度重復3 次。相關系數R2的計算用Excel自動生成。

1.4.6.2DNA含量與拷貝數的關系

將提取的牛肉和豬肉的DNA進行系列稀釋后，分別以10 個DNA質量濃度梯度（25～250ng/μL）進行ddPCR的檢測，分析DNA含量與拷貝數之間的關系。每個梯度重復3 次。相關系數R2的計算用Excel自動生成。

1.4.7ddPCR的抗干擾實驗

為驗證所建ddPCR方法的抗干擾性，以總質量為50 mg，分別稱量10 個質量分數（10%～100%）的牛肉粉與豬肉粉制成兩兩混合量品；同時分別在牛肉粉與豬肉粉最低含量（10%）時添加不同質量分數的其他肉種，制成多肉量混合量品。按1.4.3節的方法提取混合肉量DNA，進行10 倍稀釋后，取4 μL進行ddPCR檢測，進行抗干擾實驗。

1.4.8市售量品的檢測

分別從某市場中購買牛肉和豬肉制品（豬肉松、速凍肉包、火腿腸、速凍撒尿牛肉丸等），用建立的ddPCR方法對肉制品中牛源和豬源成分的質量進行檢測，進一步驗證所建方法的準確性和實際應用能力。

1.5數據分析

所有結果采用SPSS 17.0進行統計學分析，利用Excel進行圖表編輯。

2　結果與分析

2.1引物和探針特異性

為驗證本實驗選用的牛肉和豬肉引物和探針的特異性，選擇常見肉量及部分植物物種作為DNA模板進行ddPCR檢測，結果顯示選取的引物和探針對其他肉量及植物物種均無交叉反應，表明引物和探針的特異性良好，能夠用于牛肉和豬肉含量的檢測。

2.2DNA提取及含量的測定

為摸索不同肉量質量與DNA含量的關系，提取牛肉和豬肉各10 個質量梯度（質量依次從5～50 mg）量品的DNA，運用核酸定量測定儀檢測提取肉量的DNA含量。通過3 次批間重復，結果顯示肉的質量與其所測定的DNA含量之間有明顯的線性關系。牛肉和豬肉的相關系數R2分別是0.995 9（圖1）和0.997 7（圖2），表明肉的質量在5～50 mg范圍內與DNA含量有明顯的線性關系，即y牛=11.406x+13.602和y豬=11.957x-3.160 7，其中x代表肉的質量/mg；y代表所測得的DNA含量/（ng/μL）。

圖1　牛肉的質量與DNA含量的關系Fig.1 Linear relationship between meat quantity and nucleic acid content of beef

圖2　豬肉的質量與DNA含量的關系Fig.2 Linear relationship between meat quantity and nucleic acid content of pork

2.3DNA含量與DNA拷貝數的關系

為摸索DNA含量與DNA拷貝數之間的關系，在ddPCR檢測最高核酸質量濃度范圍內，將提取的牛肉和豬肉DNA進行10 個梯度的系列稀釋（25～250 ng/μL），取4 μL模板進行ddPCR的檢測。結果顯示在ddPCR檢測過程中，每個量品的微滴生成均在15 000以上，滿足了絕對定量的要求，且DNA含量與其所生成的DNA拷貝數之間有明顯的線性關系。牛肉和豬肉的相關系數R2分別是0.999 0（圖3）和0.999 2（圖4），表明核酸的含量在100～1 000 ng范圍內與拷貝數呈明顯的線性關性，即y牛=3.526 2x-4.008 2和y豬=4.626 4x+43.857，其中x代表所加模板DNA總量/ng；y代表所測得的DNA拷貝數/（copies/μL）。

圖3　牛肉DNA含量與DNA拷貝數的關系Fig.3 Linear relationship between nucleic acid content and DNA copy number of beef

圖4　豬肉DNA含量與DNA拷貝數的關系Fig.4 Linear relationship between nucleic acid content and DNA copy number of pork

2.4肉量質量與拷貝數換算公式的確定結果

根據肉量的質量與所提取DNA含量之間的線性關系，及DNA含量與所測定DNA拷貝數之間的線性關系，選擇DNA含量作為中間值，計算肉量的質量與拷貝數之間的關系，從而達到通過測定DNA拷貝數來計算原始肉量質量的目的。牛肉質量與DNA拷貝數之間的關系式：M牛=0.062C-0.943；豬肉質量與DNA拷貝數之間的關系式：M豬=0.045C-1.72，其中C代表每微升的DNA拷貝數/（copies/μL）；M代表肉量的質量/mg。

2.5已知質量混合肉量的數字PCR抗干擾實驗結果

表2　已知質量的多種混合肉樣的ddPCR定量分析Table 2 Results of quantification of samples with known concentration

為驗證實驗方法的準確性，分別對已知目標肉量質量分數的混合量品提取DNA，進行10 倍稀釋后，取4 μL進行ddPCR檢測，將DAN拷貝數值代入肉量質量與拷貝數關系式中計算肉量質量。結果顯示測得的數值與真實肉量基本一致，并且不受外源肉量的干擾（表2），表明所建立的ddPCR方法可以應用于不同肉制品中牛源和豬源成分的定量檢測。

2.6市售量品的檢測結果

表3　市售樣品的ddPCR定量分析Table 3 Results of quantification of samples from local supermarket %

使用本研究建立的ddPCR方法，對市售肉制品中的牛源和豬源成分進行檢測，結果如表3所示，其中兒童牛肉松和兒童豬肉松中牛肉和豬肉含量約為30%，經ddPCR測定后牛肉和豬肉的含量分別為27.8%和26.6%；速凍撒尿牛肉丸成分包含豬肉、雞肉和牛肉，經檢測牛肉含量僅為2.41%，相對含量較少。對牛肉卷的檢測發現，牛肉含量占2.5%，而豬肉含量占36%，這表明市售肉制品存在摻假現象。通過一系列的市售食品的定量檢測，驗證了建立的牛肉和豬肉定量ddPCR檢測體系的實際應用能力，可以用來甄別無意沾染與故意摻假以及衡量肉制品的摻假程度。

3　討 論

食品安全、質量和原料組成成分等問題已經越來越多的受到公眾的關注［22-23］，而傳統的依靠感官與經驗鑒別的手段已遠不能滿足對市售肉制品摻假現象進行控制和監管的需要，建立有效地測定肉源成分的檢測方法是諸多研究人員研究的熱點。

定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸含量［9，24-25］，而ddPCR能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始量品的絕對定量［12，14］。因此特別適用于檢測依靠Ct值不能很好分辨、以及目的核酸含量較低的量品。

本研究通過ddPCR分析了牛肉和豬肉量品的質量與拷貝數的關系，發現肉質量與DNA含量、DNA含量與DNA拷貝數之間均具有明顯的線性關系，建立了肉質量與DNA拷貝數之間的換算公式，證明了ddPCR技術可以應用于肉及肉制品中種源成分的定量分析。這對于市售量品中某種肉源成分的無意沾染或有意添加可以進行準確的判斷，由于檢測過程不需要構建標準曲線，直接增加了檢測效率，使得肉制品中摻假行為能夠快速準確的檢出。

本研究建立的檢測體系主要著眼于市售肉及肉制品，鑒于其成分復雜，肉種多量，本研究制備了已知目標肉種質量分數的混合肉量來檢驗所建體系的抗干擾能力，結果顯示本研究建立的牛源和豬源的檢測體系無論在兩兩混合還是多肉量混合的情況下，抗干擾能力都很強，與實際質量相差不大。

為進一步驗證所建方法的實際應用能力，選取含有目標肉種的市售加工食品進行檢測。牛肉和豬肉ddPCR檢測體系都能夠特異性地檢出各種肉制品中的目標肉種的含量。通過兩種檢測體系的聯用，還可以進一步發現是否摻雜標簽未注明肉類，如本研究發現某品牌牛肉卷中牛肉含量占2.5%，而豬肉含量占36%，說明牛肉卷中摻雜有大量的豬肉成分，證明市場上確實存在用低價肉冒充高價肉的摻假現象。

綜上所述，本研究所建立的ddPCR檢測體系彌補了傳統檢測方法的缺陷，更加快速、準確、靈敏，且可以進行絕對定量，可滿足當前食品中種源性成分摻假的定量檢測，尤其是應用于清真食品檢測，以及保護對某種肉（牛、豬）成分過敏者，為質檢部門打擊不法商販的食品摻假、造假行為，維護消費者合法利益提供有力的科學依據。

［1］ 李巧玲， 劉景艷. 市場鮮豬肉摻假狀況的調查監測［J］. 食品科學，2004， 25（10）: 273-276. DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2004.10.068.

［2］ LóPEZ-CALLEJA I， GONZáLEZ I， FAJARDO V. Quantitative detection of goats' milk in sheep's milk by real-time PCR［J］. Food Control， 2007， 8（11）: 1466-1473. DOI:10.1016/j.foodcont.2006.11.006.

［3］ OMAHONY P J. Finding horse meat in beef products-a global problem［J］. QJM-International Journal of Medicine， 2013， 106（6）: 595-597. DOI:10.1093/qjmed/hct087.

［4］ 高琳， 徐幸蓮， 周光宏. PCR技術用于食品中原料肉物種鑒別的研究進展［J］. 肉類研究， 2006， 20（10）: 19-21. DOI:10.3969/ j.issn.1001-8123.2006.10.008.

［5］ STROMMENGER B， KETTLITZ C， WERNER G， et al. Multiplex PCR assay for simultaneous detection of nine clinically relevant antibiotic resistance genes in Staphylococcus aureus［J］. Journal Clinical Microbiology， 2003， 41: 4089-4094. DOI:10.1128/JCM.41.9.4089-4094.2003.

［6］ KOPPEL R， JURG R， JURG R. Multiplex real-time PCR for the detection and quantification of DNA from beef， pork， horse and sheep［J］. European Food Research and Technology， 2011， 232（6）: 151-155. DOI:10.1007/s00217-010-1371-y.

［7］ 李林， 陳繼明， 王志亮. Real-time PCR和常規PCR方法快速鑒定肉骨粉中的牛源性成分［J］. 中國預防獸醫學報， 2005， 27（1）: 50-54. DOI:10.3969/j.issn.1008-0589.2005.01.013.

［8］ CALVO J H， OSTA R， ZARAGOZA P. Quantitative PCR detection of pork in raw and heated ground beef and pate［J］. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2002， 50（19）: 5265-5267. DOI:10.1021/ jf0201576.

［9］ ALI M E， HASHIM U， MUSTAFA S， et al. Analysis of pork adulteration in commercial meatballs targeting porcine-specific mitochondrial cytochrome b gene by TaqMan probe real-time polymerase chain reaction［J］. Meat Science， 2012， 91（4）: 454-459. DOI:10.1016/j.meatsci.2012.02.031.

［10］ PEKIN D， SKHIRI Y， BARET J C， et al. Quantitative and sensitive detection of rare mutations using droplet-based microfluidics［J］. Lab on a Chip， 2011， 11: 2156-2166. DOI:10.1039/C1LC20128J.

［11］ JOTHIKUMAR P， HILL V， NARAYANAN J. Design of FRETTaqMan probes for multiplex real-time PCR using an internal positive control［J］. Biotechniques， 2009， 46（7）: 519-524. DOI:10.2144/000113127.

［12］ HINDSON B J， NESS K D， MASQUELIER D A， et al. Highthroughput droplet digital PCR system for absolute quantitation of DNA copy number［J］. Analytical Chemistry， 2011， 83: 8604-8610. DOI:10.1021/ac202028g.

［13］ SANDERS R， HUGGETT J F， BUSHELL C A， et al. Evaluation of digital PCR for absolute DNA quantification［J］. Analytical Chemistry，2011， 83: 6474-6484. DOI:10.1371/journal.pone.0075296.

［14］ MASSANELLA M， SINGHANIA A， BELIAKOVA B N， et al. Differential gene expression in HIV-infected individuals following ART［J］. Antiviral Research， 2013， 100（2）: 420-428. DOI:10.1016/ j.antiviral.2013.07.017.

［15］ BHAT S， POLANOWSKI A M， DOUBLE M C， et al. The effect of input DNA copy number on genotype call and characterising SNP markers in the humpback whale genome using a nanofluidic array［J］. PLoS ONE， 2012， 7（6）: 1-6. DOI:10.1371/journal.pone.0039181.

［16］ 姜羽， 胡佳瑩， 楊立桃. 利用微滴數字PCR分析轉基因生物外源基因拷貝數［J］. 農業生物技術學報， 2014， 22（10）: 1298-1305. DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2014.10.013.

［17］ BRUNETTO G S， MASSOUD R， LEIBOVITCH E C， et al. Digital droplet PCR （ddPCR） for the precise quantification of human T-lymphotropic virus 1 proviral loads in peripheral blood and cerebrospinal fluid of HAM/TSP patients and identification of viralmutations［J］. Journal of Neurovirology， 2014， 20（4）: 341-351. DOI:10.1007/s13365-014-0249-3.

［18］ 董蓮華， 張玲， 姜君， 等. 大腸桿菌O157:H7微滴數字PCR定量方法的建立［J］. 分析化學， 2015， 43（3）: 319-324. DOI:10.11895/ j.issn.0253-3820.140569.

［19］ MORISSET D， STEBIH D， MILAVEC M， et al. Quantitative analysis of food and feed samples with droplet digital PCR［J］. PLoS ONE，2013， 8（5）: 1-9. DOI:10.1371/Journal.pone.0062583.

［20］ CAI Yicun， LI Xiang， Lü Rong， et al. Quantitative analysis of pork and chicken products by droplet digital PCR［J］. BioMed Research International， 2014， 2014: 810209. DOI:10.1155/2014/810209.

［21］ SANTELLA R M. Approaches to DNA/RNA extraction and whole genome amplification［J］. Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention， 2006，15（9）: 1585-1587. DOI:10.1158/1055-9965.EPI-06-0631.

［22］ 李家鵬， 喬曉玲， 田寒友， 等. 食品和飼料中動物源性成分檢測技術研究進展［J］. 食品科學， 2011， 32（9）: 340-347.

［23］ 何偉玲， 黃明， 張弛. 食品中肉類成分種屬鑒別技術研究進展［J］. 食品科學， 2012， 33（3）: 304-307.

［24］ 張弛， 邱皓璞， 張筠. 實時熒光定量PCR檢測肉制品中鴨源性成分［J］.食品科學， 2013， 34（18）: 154-157. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201318031.

［25］ 趙新， 王勇， 蘭青闊， 等. 熒光定量PCR方法鑒別肉制品中羊源性成分［J］. 食品工業科技， 2015， 36（1）: 299-302. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2015.01.054.

Quantitative Analysis of Bovine and Porcine Ingredients in Meat Products by Droplet Digital PCR

MIAO Li1， ZHANG Xiuping2， CHEN Jing2， LI Ke2， WANG Yongjie2， BAI Jie2
（1. Henan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau， Zhengzhou 450003， China；2. Identification Consulting Center of Henan Inspection and Quarantine， Zhengzhou 450003， China）

A highly precise quantitative method based on the droplet digital polymerase chain reaction （ddPCR） technique was developed to detect bovine and porcine ingredients in meat products. By using the ddPCR method， we found good linear relationships between the raw meat weight and DNA content and between the DNA content and DNA copy number. Using the DNA content as an intermediate value， we established the following formulae for calculating the weight of the original raw meat from the specific DNA copy number: Mbeef= 0.062C - 0.943，Mpork= 0.045C - 1.72. By examining the mixed meat samples of known compositions， we found that the final quantitative results for the mixed samples were similar to the true raw meat weights， free from interference from exogenous species. Analysis of commercial samples showed that the ddPCR quantification system enables determination of the proportions of bovine and porcine ingredients in meat products with good practicability. Quantitative analysis indicates that ddPCR is highly precise in quantifying beef and pork in meat products and therefore has the potential to be used in routine analysis and meat adulteration of various species.

droplet digital polymerase chain reaction； meat products； DNA copy number； meat adulteration

10.7506/spkx1002-6630-201608033

TS207.3

A

1002-6630（2016）08-0187-05

10.7506/spkx1002-6630-201608033. http://www.spkx.net.cn

2015-07-10

國家質檢總局科技計劃項目（2014IK089）

苗麗（1971—），女，高級獸醫師，碩士，研究方向為分子生物學及食品微生物學。E-mail：ml5628@163.com

引文格式：