利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環的血管舒張效應及其機制研究

李俊葓+馬玉健+夏艷

【摘要】目的 研究利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環的血管舒張效應及其作用機制。方法 選取SD雄性大鼠68只，分離其胸主動脈環，根據是否去內皮分為內皮完整組40例和去內皮組28例，內皮完整組按隨機數字法再分為格列苯脲干預亞組20例和左旋硝基精氨酸甲酯干預亞組20例，格列苯脲干預亞組接受非特異性ATP敏感性鉀通道抑制劑格列苯脲的預處理，左旋硝基精氨酸甲酯干預亞組接受一氧化氮合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯的預處理，觀察利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環血管舒張效應。結果 濃度為1*10-5mol/L的利拉魯肽對內皮完整組和去內皮組大鼠胸主動脈環均有舒張作用，但對內皮完整組大鼠胸主動脈環舒張作用更強（P<0.05）；利拉魯肽對格列苯脲預處理后胸主動脈環血管舒張幅度與未處理時相比，差異無統計學意義（P>0.05）；利拉魯肽對左旋硝基精氨酸甲酯預處理后胸主動脈環血管舒張幅度與未處理時相比，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環血管具有確切的舒張效應，其機制與血管內皮釋放的一氧化氮有關。

【關鍵詞】大鼠；血管舒張效應；利拉魯肽；胸主動脈環

【中圖分類號】R965 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2016.15..02

糖尿病是一種內分泌系統疾病，既往大量研究[1-2]證實，其可增加心血管類疾病的發生風險，因此控制血糖不僅對糖尿病本身至關重要，亦對預防心血管類疾病具有重要意義。2010年美國食品藥品監督管理局批準將人胰高血糖素樣肽-1類似物利拉魯肽用于治療糖尿病[3]。既往研究[4]指出，利拉魯肽對心血管系統具有一定的保護作用，但其潛在的作用機制尚未闡明。本研究通過分組對比，研究利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環的血管舒張效應及其作用機制，如下報道。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

乙酰膽堿；左旋硝基精氨酸甲酯；去甲腎上素；利拉魯肽；Krebs-Henseleit液（11 mol/L PH=7.4的葡萄糖、25 mol/L KH2PO4、14.7 mol/L KCL、2.5 mol/L CaCL2、118 mol/L NaCL、1.2 mol/L MgCL2、25 mol/LNaHCO3）；超級恒溫浴鍋；計算機生物信號分析系統。

1.2 實驗動物與分組

選取SD雄性大鼠68只，體重230～272 g，平均體重（251±22）g，購于中國食品藥品檢定研究院，分離其胸主動脈環，根據是否去內皮分為內皮完整組40例和去內皮組28例，內皮完整組按隨機數字法再分為格列苯脲干預亞組20例和左旋硝基精氨酸甲酯干預亞組20例，格列苯脲干預亞組接受非特異性ATP敏感性鉀通道抑制劑格列苯脲的預處理，左旋硝基精氨酸甲酯干預亞組接受一氧化氮合成酶抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯的預處理。利拉魯肽分別作用于預處理過的去甲腎上素預收縮的胸主動脈環。

1.3 胸主動脈環制備方法

迅速分離大鼠胸主動脈，置于Krebs-Henseleit液中，修剪成4 mm左右的血管環，并輔以不銹鋼微型掛鉤和細鋼絲，將血管環橫向懸掛于Krebs-Henseleit液浴槽中，在37℃溫度下，持續通入5%二氧化碳和95%氧氣混合氣體，調節靜息張力使其為2 g，使用生物機能實驗系統記錄大鼠胸主動脈環張力變化。為誘發血管環最大收縮幅度，使用濃度為1*10-6mol/L的去甲狀腺素預收縮2次，待前后2次最大收縮幅度差低于5%，加入濃度為1*10-6mol/L的去甲狀腺素收縮，觀察血管環張力變化，若其到達最大舒張幅度，依次加入濃度為1*10-7mol/L、1*10-6mol/L、1*10-5mol/L的乙酰膽堿，觀察血管的舒張情況。去內皮實驗：修剪胸主動脈環并固定，輔以尺寸相適的棉棒擦過管腔，連續進行2次，再使用濃度為1*10-6mol/L的去甲狀腺素刺激，待前后2次最大收縮幅度差低于5%，加入濃度為1*10-5mol/L的乙酰膽堿，舒張幅度低于收縮幅度的5%時可進行下一步實驗，說明內皮已去除完全。

1.4 觀察指標

測定大鼠胸主動脈環舒張功能，檢驗內皮完整性后，使用Krebs-Henseleit液對胸主動脈環進行3次清洗，使用濃度為1*10-6mol/L的去甲狀腺素誘發其達最大程度收縮，依次加入濃度為1*10-8mol/L、1*10-7mol/L、1*10-6mol/L、1*10-5mol/L的利拉魯肽，以加入利拉魯肽后的血管張力幅度與去甲腎上腺素誘發的最大收縮幅度間的張力反映血管張力的變化。

1.5 統計學方法

采用SPSS18.0統計學軟件進行數據處理，計量資料以x±s”表示，采用t檢驗，計數資料以例數（n），百分數（%）表示，采用x2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 利拉魯肽對去甲狀腺素預收縮胸主動脈環的作用

濃度為1*10-5mol/L的利拉魯肽對內皮完整組和去內皮組大鼠胸主動脈環均有舒張作用，但對內皮完整組大鼠胸主動脈環舒張作用更強（P<0.05）。

2.2 利拉魯肽對預處理的去甲狀腺素誘導收縮的胸主動脈環的舒張作用

未經處理時，利拉魯肽對大鼠胸主動脈環血管舒張幅度為17%。利拉魯肽對格列苯脲干預亞組大鼠胸主動脈環血管舒張幅度為14%，利拉魯肽對格列苯脲預處理后胸主動脈環血管舒張幅度與未處理時相比，差異無統計學意義（P>0.05）；利拉魯肽對左旋硝基精氨酸甲酯干預亞組大鼠胸主動脈環血管舒張幅度為4%，利拉魯肽對左旋硝基精氨酸甲酯預處理后胸主動脈環血管舒張幅度與未處理時相比，差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討 論

本研究中加入左旋硝基精氨酸甲酯后利拉魯肽對大鼠胸主動脈環血管舒張幅度為4%，未經左旋硝基精氨酸甲酯預處理時，利拉魯肽對大鼠胸主動脈環血管舒張幅度為17%，說明左旋硝基精氨酸甲酯可抑制利拉魯肽對血管的舒張作用。一氧化氮合成酶可催化L-精氨酸轉變為一氧化氮，再轉運至血管平滑肌，故一氧化氮合成酶抑制劑可阻斷一氧化氮的血管舒張作用[5]。

本研究觀察了非特異性ATP敏感性鉀通道抑制劑格列苯脲的預處理前后血管的舒張效應，結果顯示利拉魯肽對格列苯脲干預亞組大鼠胸主動脈環血管舒張幅度為14%，未經格列苯脲預處理時，利拉魯肽對大鼠胸主動脈環血管舒張幅度為17%，格列苯脲預處理后胸主動脈環血管舒張幅度低于未經處理時，差異無統計學意義（P>0.05），說明非特異性ATP敏感性鉀通道未參與血管舒張作用。同時本研究是將利拉魯肽作用于去甲腎上腺素預收縮的血管環，而去甲腎上腺素的收縮機制與血管平滑肌上的α腎上腺素受體有關，其可使鈣離子內流，ROC通道開放，進而出現血管收縮反應，整個過程中鈣離子通道亦可能參與利拉魯肽的血管舒張效應中，關于其真實性有待進一步考究。

綜上所述，利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環血管具有確切的舒張效應，其機制與血管內皮釋放的一氧化氮有關。

參考文獻

[1] 李國娟，陳 宏，董艷華，等.利拉魯肽對促動脈粥樣硬化飲食喂養大鼠大動脈的保護作用及對肝臟PGC-1α表達的影響[J].華中科技大學學報（醫學版），2014，43（06）：653-657.

[2] 李 寧，王 雄.利拉魯肽對離體大鼠胸主動脈環的血管舒張效應及其機制研究[J].中國循環雜志，2015，30（01）：50-53.

[3] 李昊天，趙興長，孫 平，等.利拉魯肽對大鼠急性脊髓損傷后神經細胞自噬與運動功能恢復的作用[J].解放軍醫學院學報，2015.36（05）：492-496，501.

[4] 楊 力，郭南京，蔡德鴻，等.利拉魯肽對IGT-OLETF大鼠血清糖基化終末產物及炎癥指標的影響[J].解放軍醫學雜志，2013.38（02）：116-119.

[5] 白 蓮，李春君，邢云芝，等.利拉魯肽激活糖尿病大鼠腎臟內皮源性一氧化氮合酶活性降低尿白蛋白排泄的研究[J].中國糖尿病雜志，2014，22（09）：846-849.

本文編輯：徐 陌