高原鼢鼠對D型肉毒毒素的敏感性測定及小區防治試驗

李生慶張同作張西云李志寧劉懷新林龔華

(1.青海畜牧獸醫科學院，西寧，810016；2.中科院西北高原生物研究所，西寧，810001)

高原鼢鼠對D型肉毒毒素的敏感性測定及小區防治試驗

李生慶張同作張西云李志寧劉懷新林龔華2

(1.青海畜牧獸醫科學院，西寧，810016；2.中科院西北高原生物研究所，西寧，810001)

首次采用霍恩氏法測定了野生高原鼢鼠對D型肉毒梭菌毒素的敏感性，并以測得的LD50為依據，在野外開展了不同濃度D型肉毒毒素防治高原鼢鼠的小區防治試驗。通過試驗測得D型肉毒毒素對高原鼢鼠的半數致死量(LD50)為5 840 MLD/mL，(可信線為3 430-9 950 MLD小白鼠/kg體重)，高原鼢鼠對該毒素敏感，其敏感性與高原鼠兔基本一致。小區試驗結果表明D型肉毒顆粒毒餌防治效果最佳，平均防治效果為89.83 %。可以用于大面積高原鼢鼠鼠害防治。

高原鼢鼠；

高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)，因其長年生活于地下，視力嚴重退化，俗稱“瞎老鼠”，藏語稱為“塞隆”。高原鼢鼠是一種活躍在海拔2 800 m～4 300 m的耕地、草灘、森林和陽坡草場上，靠啃食草根、莖為生的高寒草甸草原特有鼠種。其穴洞、鼠道星羅棋布，所到之處草場、森林、退耕還林地多成了不毛之地[1]。據張生合報道，青海省鼢鼠危害面積1.09×104hm2，其中青南和環湖地區危害最嚴重，形成了大面積寸草不生的“黑土”，造成了嚴重的經濟損失[2]。高原鼢鼠不僅掘翻土壤，埋沒牧草，而且地下洞連片成網，坍塌沖失后表土流失，造成新土裸露，形成大片裸地和禿斑地，通過對高原鼢鼠的大力防治，可有效保護草地生態環境，有利于草地生境的恢復和改善，遏制草地進一步退化、沙化、“黑土灘”化，使草地生境趨于良性循環。

利用肉毒毒素進行鼠害防治已成為當前的一種趨勢，肉毒梭菌神經毒素是由肉毒梭狀芽孢桿菌產生的，1 ng/kg即可致死的劇毒毒素蛋白[3]。這種毒素通過抑制神經遞質——乙酰膽堿的釋放，導致肌肉麻痹[4]。其中A-G血清型中，A、B、E、F、G，可導致人的肉毒中毒，C、D型主要引起鳥類和動物的肉毒中毒[5]。D型肉毒毒素滅鼠劑就是利用D型肉毒梭菌所產毒素經過過濾、除菌而成的一種大分子生物毒素蛋白滅鼠劑，具有無殘留，不污染環境，無二次中毒，不傷害鼠類天敵的特點。

多年來，青海省利用D型肉毒毒素在防治高原鼠兔和高原田鼠方面積累了豐富的經驗，防治技術日臻完善，但在高原鼢鼠防治方面，始終未能找到成功的防治方法和技術。本研究為應用D型肉毒滅鼠劑有效地控制高原鼢鼠對農業、林業及畜牧業的危害提供科學的理論依據。

1 材料與方法

1.1 高原鼢鼠對D型肉毒毒素的敏感性測定試驗

1.1.1 試驗藥品

D型肉毒素顆粒毒餌(10萬MLD/g)、 D型肉毒毒素水劑(毒價：1000萬MLD/mL小白鼠靜注，批號：20151003批)，由青海畜牧獸醫科學院提供。

1.1.2 試驗動物

試驗用野生高原鼢鼠捕捉自青海省大通縣野外。在室內馴養1周后使用。

1.1.3 試驗方法

本試驗采用國際通用的霍恩氏法測定高原鼢鼠對D型肉毒毒素的LD50，以每公斤體重灌服2 150 MLD、4 640 MLD、10 000 MLD、21 500 MLD的毒素量設置4個劑量組，每組5只動物，每100 g體重灌服215、464、1 000、2 150 MLD的毒素，飼喂甘藍，觀察10 d，記錄死亡情況。

1.2 D型肉毒毒素防治高原鼢鼠的小區試驗

1.2.1 小區試驗地點

試驗地位于青海省海南藏族自治州貴南縣塔秀鄉，地處西傾山與黃河之間(E100°13′～101°33′，N35°09′～36°08′)，總面積6 649.7 km2，隸屬于海南藏族自治州，約占全州總面積的14.45%，東與黃南藏族自治州澤庫縣為鄰，南與本州同德縣，西與興海縣和共和縣，北與貴德縣接壤。貴南縣屬高原大陸性氣候，冬長夏短，冬無嚴寒，夏無酷暑，適宜發展草原畜牧業。年平均氣溫為2.3℃，年極端最高氣溫31.8℃，年極端最低氣溫-29.2℃，年降水量為403.8 mm，年平均日照時數為2 907.8 h，年平均蒸發量為1 378.5 mm；氣溫低，日照長，輻射強，降水集中，雨熱同季，但降水不足，蒸發量大，屬典型的高原大陸性氣候；干旱、暴雨、冰雹、沙塵暴等氣象災害頻繁。

1.2.2 樣方設計

試驗設D型生物滅鼠劑A：D型肉毒毒素顆粒毒餌(2萬MLD/g)、B：0.10%D型肉毒毒素青稞毒餌、C：0.15%D型肉毒毒素青稞毒餌、D：0.20%D型肉

圖1 D型肉毒素殺滅高原鼢鼠小區試驗樣方Fig.1 The draft of plot experiment about botulinum toxin type D kill the plateau zokor A：D型肉毒毒素顆粒毒餌(20 000 MLD/g) B：0.10%D型肉毒毒素青稞毒餌 C：0.15%D型肉毒毒素青稞毒餌D：0.20%D型肉毒毒素青稞毒餌 CK：空白對照黑色邊框為50 m寬隔離帶A：Poison bait of Botulinum toxin type D(20 000 MLD/g)B：0.10%Density barley bait of botulinum toxin type D C：0.15%Density barley bait of botulinum toxin type D D：0.20%Density barley bait of botulinum toxin type D CK：blank controlisolation belt

毒毒素青稞毒餌4個梯度及CK：空白對照。每小區面積0.25 hm2(50 m ×50 m)重復3次，組間隨機排列，各濃度組兩兩隔開，并設標志旗。中間設50 m寬的保護行，外圍設50 m寬保護行，在行間及外圍保護帶均以D型肉毒毒素顆粒毒餌進行防治。

1.2.3 試驗區鼠密度調查

以劃定的樣方為單位，試驗開始前，將樣方內所有新堆土堆鏟平，記錄數據；2 d后，再用紅筷子標記新堆土堆數，記錄數據并計算該試驗區內鼠密度概況。

1.2.4 毒餌配制

根據試驗室內D型肉毒滅鼠劑對高原鼢鼠的適口性試驗，在D型肉毒毒素顆粒毒餌的基礎上做適當調整，配制顆粒毒餌，用于高原鼢鼠的現地鼠害防治。

使用前，按濃度梯度將D型肉毒毒素用注射器吸出、注入80 mL自來水中，充分混勻；將青稞倒入塑料小盆中，把混勻的毒素均勻加入到餌料中，邊加邊拌制，使每一粒餌料都沾到毒素，拌制完畢后將毒餌裝入一塑料袋中，悶置12 h后待用(配制見表1)。

表1 不同濃度毒素餌料配制方法

Tab.1 The method of bait mixing with the different density toxin

1.2.5 投藥

采用有效洞投餌法，在標有紅筷子的有效土堆處投放不同濃度的毒餌，根據有效洞探查、將投餌器深入到鼠道內，通過投餌管將餌料投放于有效洞內，每一洞投放餌料10～15粒，投放后用物塊將洞口封閉。投餌時將勞力每人間隔5 m左右排成一行邊走邊投餌，隊伍兩邊各派1人專做標記，以防漏投和重投。在隔離帶同樣施餌，1 d內投完。

1.2.6 統計方法

防治前，采用新鮮土堆插旗計數法計算滅效。

2 試驗結果

2.1 D型肉毒滅鼠劑對高原鼢鼠敏感性測定結果

試驗測得，1003批D型肉毒毒素對高原鼢鼠的灌胃半數致死量LD50為5 840 MLD/kg體重，可信限為3 430～9 950 MLD(小白鼠)/kg體重。

表2 D型肉毒滅鼠劑對高原鼢鼠的灌胃半數致死量LD50測定

Tab.2 The LD50 about botulinum toxin type D to the plateau zokor

2.2 小區防治試驗結果

D型肉毒毒素顆粒毒餌平均滅效為89.93%，0.10%、0.15%、0.20%D型肉毒毒素3個濃度組的平均滅效分別為80.6%、89.13%及87.73%，而對照組平均滅效為32.7%。小區試驗結果表明，D型肉毒毒素顆粒毒餌滅效最好，其次為1.5% D型肉毒毒素水劑。

結論：結合上述D型肉毒毒素滅鼠劑對高原鼢鼠半數致死量(LD50)的測定以及小區防治試驗，采用D型肉毒毒素顆粒毒餌(20 000 MLD/g)或采用0.15%濃度D型肉毒毒素拌制青稞毒餌，其滅鼠效果最佳，可用于大面積高原鼢鼠的鼠害防治。

3 討論與分析

3.1 高原鼢鼠、高原鼠兔(Ochotonacurzoniae)及高原田鼠(Neodonirene)是青藏高原農牧區危害最為嚴重的3種害獸，據統計，僅青海省鼠害每年可消耗草地鮮草量108.49億kg，因挖掘洞坑損耗的鮮草量4.56億kg，按每公斤鮮草0.1元計價，每年僅新鮮牧草一項直接經濟損失就是11.3億多元[6]。因此，無論是從生態系統安全還是從畜牧業經濟角度上講，鼠害問題都是青藏高原發展的關鍵問題。而目前，在利用D型肉毒毒素防治高原鼠兔、高原田鼠方面已經做了大量的試驗研究，試驗結果表明，利用D型肉毒毒素生物滅鼠劑防治上述害鼠既能保證較高的滅效(平均在90%以上)，又能避免環境污染、二次中毒等弊端。因此，本試驗采用霍恩氏法測定了D型肉毒毒素對高原鼢鼠的灌胃半數致死量(LD50)，有試驗結果得知其LD50為5 840 MLD/kg體重，其敏感性與高原鼠兔基本相當(高原鼠兔LD50為5 010 MLD/kg體重)，因此本試驗首先從理論上證明了D型肉毒毒素作為防治高原鼢鼠具有一定的可行性。

表3 不同濃度D型肉毒滅鼠劑對高原鼢鼠的滅殺效果(0.25 hm2)

Tab.3 The effect of different density botulinum toxin type D killing the plateau zokor(0.25 hm2)

注：A為顆粒毒餌，B為0.10%濃度組，C為0.15%濃度組，D為0.02%濃度組，CK為空白對照

Note：A：Poison bait，B：0.10%Density group，C：0.15%Density group，D：0.20%Density group，CK：Blank control

3.2 高原鼢鼠是一種嚙齒類野生動物，其野外捕捉及試驗室馴養十分困難，我們通過本次試驗中高原鼢鼠的現場抓捕并結合高原鼢鼠的相關習性，專門研制了一種高原鼢鼠野外活體捕捉定位儀，該儀器大大地提高了活體高原鼢鼠的抓捕效率，節約人力，保證了試驗用鼠的按時供給，該設備正在申請國家實用新型專利，并已受理。另外，高原鼢鼠在試驗室馴養過程中，建議在飼養籠內防治一定厚度的較濕潤的泥土，不僅保證了高原鼢鼠的生活環境沒有太大的改變，而且高原鼢鼠在泥土中不斷拱土，也能提高其運動活力。馴養期間，我們還利用本試驗室自制的顆粒餌料進行飼喂，適口性良好，大大改善了高原鼢鼠的營養狀況，在很大程度上降低了高原鼢鼠的自然死亡率，保證了試驗數據的精確性。

3.3 據唐忠民等的研究報道[7]，一年中，高原鼢鼠有兩個活動盛期，4～6月為第一活動盛期，主要為尋求配偶、交配、產仔和哺乳行為。第二活動盛期為9～10月底，用于建窩修巢儲備越冬食物。兩個活動盛期即為危害盛期，推土造丘和啃食牧草對草原形成劇烈破壞，因此，對于高原鼢鼠的防治時間一定要選在高原鼢鼠活動頻繁的季節，即4 月中下旬～5 月10 日前的交配高峰期和越冬前貯備食物的秋季-初冬時期。這兩個時期高原鼢鼠活動時間長、范圍廣，是滅治高原鼢鼠的最佳時期。特別是交配高峰期時的滅治，基本上人為地切斷了高原鼢鼠的繁殖鏈，對高原鼢鼠防治起到事半功倍的作用。張同作等研究表明[8]，春季時候，高原鼢鼠經過一個冬季的消耗，其洞內貯存的食物已消耗殆盡，其體能極大的下降。因此在春季土地解凍之后，它迅速而頻繁地出外取食，借以補充體能并得以迅速恢復。而這個時候它所能夠攝取的食物非常有限，這就迫使高原鼢鼠必須通過更頻繁的活動和更長距離的移動來達成目的，因此，它被滅殺的幾率就更大。另外，因為春季正值高原鼢鼠繁殖高峰期，它們追逐異性、交配等一系列的繁殖行為必然增加它們的活動量，因而導致它們被滅殺。而在秋季時節，高原鼢鼠的繁殖活動已全部結束，體能也得到最大限度的恢復和發展，此時外界食物豐富，它們的活動必然減少，因此被殺滅的幾率大大下降。在實際生產中，防治高原鼢鼠的季節應以春季為先，此次小區防治試驗我們選擇于5月上旬進行藥物投放，滅鼠效果較理想。

3.4 高原鼢鼠相較于高原鼠兔及高原田鼠，最大的特點在于它常年生活在地表之下，無法準確判斷其具體的生活區域，那么利肉毒毒素滅鼠劑進行高原鼢鼠的大面積鼠害防治，防效高低的關鍵是能否準確的找到有效的鼠道，并將毒餌投放于害鼠活動的洞道內，這樣才能保證害鼠采食到毒餌。因此，一般是根據新鮮土丘與新鮮土丘之間的連線來判斷高原鼢鼠的鼠道走向，在此連線的土堆附近，可用投餌探棒進行鼠道探查，探棒深入土層5～10 cm后，阻力若突然減少，即為洞道，可投放毒餌。在進行鼢鼠活體抓捕時，也可用鐵鏟鏟開洞道，觀察洞道上高原鼢鼠挖掘時，鼻吻拱土留下的半月形的吻印，吻印深的一方或洞道壁草根指向的一方就是高原鼢鼠離開主巢，外出活動的方向，只要把抓捕器安放在這個方向的洞道口，外出活動后回巢的高原鼢鼠即被捕捉。

[1] 劉立鍇.淺談青海省高原鼢鼠防治[J].青海草業，2013，22(2)：36-38.

[2] 張生合，任程，陳國民，等.青海省草地鼠害防治及今后設想[J].青海草業，2001，10(2)：22-24.

[3] Lamanna C.The most poisonous poison[J].Science，1959，130(130)：763-772.

[4] Habermann E，Dreyer F.Clostridial neurotoxins：handling and action at the cellular and molecular level [J].Current Topics in Microbiology & Immunology，1986，129(4)：93-179.

[5] Takeda M，Tsukamoto K，Kohda T，et al.Characterization of the neurotoxin produced by isolates associated with avian botulism [J].Avian Diseases，2005(49)：376-381.

[6] 趙琴，王菊梅，宋維琴.青藏高原草場鼠害防治新技術[J].中小企業管理與科技，2012(15)：196-197.

[7] 唐忠民，劉承毅.高原鼢鼠的最適生境及其活動規律研究與防治策略[J].草業與畜牧，2014(1)：16-17.

[8] 張同作，雷曉水，崔慶虎，等.兩種新型方法防治高原鼢鼠的比較研究[J].西北林學院學報，2007，22(1)：102-105，108.

Sensitivity Analysis of Plateau Zokor Myospalax baileyi toD-type Botulinum Toxin

Li Shengqing1Zhang Tongzuo2Zhang Xiyun1Li Zhining1Liu Huaixin1Lin Gonghua2

(1.Qinghai Academy of Veterinary and Animal Science，Xining，810016，China；2.Northwest Plateau Institute of Biology，Chinese Academy of Science，Xining，810001，China)

We adopted the Horn method to determine the sensitivity of wild plateau zokorMyospalaxbaileyito the D-type botulinum toxin.Then based on measured LD50，we carried out a control experiment using different concentrations of D-type botulinum toxin to kill the plateau zokor.We determined the the median lethal dose(LD50)of D-type botulinum toxin for plateau zokor was 5 840 MLD/mL，(credible limits is 3 430-9 950 / MLD kg weight).Plateau zokor proved sensitive to the poison，and the sensitivity was similar to that of plateau pikaOchotonacurzoniae.Plot experiment results showed that the pellet of D-type botulinum toxin was most effective with average effect of 89.8%.This method can be used for controlling damage caused by plateau zokor in large areas.

Plateau zokor；

稿件運行過程

2015-10-28

修回日期：2015-11-04

發表日期：2016-02-10

Q958.2

A

2310-1490(2016)01-20-05

敏感性；

D型肉毒毒素；

小區試驗

Sensitivity；

Botulinum toxin type D；

Plot experiment

李生慶，男，36歲，在讀博士，副研究員；主要從事高原動物疫病診斷與防治及D型肉毒滅鼠劑的研制與應用工作。