一例豬偽狂犬病和葡萄球菌混合感染的診斷

杜海燕韓俊偉

（1.新鄉市動物疫病預防控制中心，河南新鄉 453000；2.新鄉市動物衛生監督所，河南新鄉 453000）

一例豬偽狂犬病和葡萄球菌混合感染的診斷

杜海燕1韓俊偉2

（1.新鄉市動物疫病預防控制中心，河南新鄉 453000；2.新鄉市動物衛生監督所，河南新鄉 453000）

豬偽狂犬病是偽狂犬病毒引起的急性傳染病，其主要特征為病豬體溫升高，仔豬多出現神經障礙，妊娠母豬出現流產、死胎等癥狀，病豬于局部皮膚呈現持續性的劇烈瘙癢。而豬葡萄球菌病是由豬葡萄球菌引起豬的細菌性疾病，以斷奶仔豬多發，有明顯的接觸性傳染性，無明顯季節性，與環境因素關系密切。上述兩種病地域分布廣泛，對養豬業危害嚴重。2016年2月，我實驗室收到某豬場送檢病豬，并進行實驗室診斷，確診為豬偽狂犬與葡萄球菌混合感染，具體情況如下。

豬偽狂犬病；混合感染；實驗診斷

1 流行病學調查

某養豬戶存欄生豬200頭，飼養母豬16頭，2016年1月，相繼有5頭母豬生產，共產仔豬72頭，其中弱豬5頭，死胎9頭，仔豬出生后7日齡左右開始發病，體溫升至41℃，病豬消瘦、脫水、體質較弱，精神沉郁，吃奶少或不吃，拉黃白色、黃色或灰色糞便；部分病豬耳部、眼睛周圍、腹部出現紅斑，然后形成微黃水泡破潰，覆蓋在皮膚上一層棕灰色結痂。有些病豬出現轉圈、運動失調等癥狀，病程較短，共發病36頭，死亡14頭。該豬場多方面進行治療，但無明顯效果。

2 剖檢變化

送檢病死豬剖檢觀察，頜下淋巴結、腹股溝淋巴結等外周淋巴結腫大、出血，肝臟表面點狀出有黃白色壞死點，腎臟點狀出血，脾、胃、肺、腸道大量出血并有氣體，心臟充血并且積液增多，腦膜充血水腫。

3 實驗室診斷

3.1 細菌分離鑒定

采集送檢病死豬的肝臟、脾臟、腎臟及淋巴結進行細菌分離培養。病料接種于鮮血瓊脂平板后，放置培養箱中，37℃培養24h，在鮮血培養基上長出透明、圓形、微小、溶血的菌落，經革蘭氏染色、鏡檢，為革蘭氏陽性球菌，挑取單個優勢菌落進行純培養，并用純培養物作生化試驗，初步確定為葡萄球菌。

3.2 藥物敏感試驗

取上述細菌純培養物，均勻涂于鮮血瓊脂培養基上，對上述細菌純培養物進行抗生素敏感試驗，結果見表。

3.3 豬偽狂犬病毒核酸檢測

3.3.1 DNA提取 分別取病豬的腦組織（樣品1）、淋巴結組織（樣品2）和脾臟組織（樣品3）研磨，反復凍融3次，8000rpm離心10min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.3.2 PCR擴增 采用PCR-熒光探針法對待檢樣品進行PCR擴增。每個樣本反應體系PRV qPCR MIX 20μl，Taq酶系1μl，待測樣品4μl，同時設陽性和陰性質控品。標記熒光基團種類：報告基團FAM，淬滅基團為TAMRA。擴增條件：94℃-2min；94℃30s，55℃45s（采集熒光），40個循環。

3.3.3 結果分析 反應結束后，使用手動調整閾值使陰性質控品Ct值在40以上，Ct值小于35個循環的為陽性；Ct值在35～40個循環之間的需要重復試驗，重復試驗之后，如果Ct值仍然在35～40個循環之間，判斷為陽性，沒有熒光值增長為陰性。質控標準：陰性質控品：Ct值顯示UNDET或者Ct40，即結果為陰性；陽性質控品：CT值小于30，且呈標準S型擴增曲線。結果見下圖。

豬偽狂犬病毒核酸熒光PCR檢測結果

分離細菌藥物敏感性試驗結果

對送檢病料的豬偽狂犬病毒核酸檢測結果由圖可見：陽性對照Ct值為16.21，陰性對照Ct值為UNDET，待檢樣品腦組織（樣1）Ct值為28.03，淋巴組織（樣2）Ct值為31.12，脾臟組織（樣3）Ct值為32.00，結果表明所檢測樣品中豬偽狂犬病毒核酸為陽性，說明該病死豬群存在豬偽狂犬病毒的感染。

4 結果與分析

通過流行病學、臨床癥狀、病理剖檢變化、實驗室檢查等試驗結果，初步確診為病死豬可能感染了豬偽狂犬病病毒，繼發葡萄球菌感染所致。建議該豬場對發病豬或疑似病豬及時進行隔離或淘汰；使用豬偽狂犬病弱毒疫苗對豬群進行強化免疫，用豬基因干擾素按要求對病豬進行肌肉注射；建立健全豬群免疫監測制度，定期進行免疫抗體監測，并依據抗體監測結果，適時免疫和采取其他相應措施，防止疫病發生。嚴格控制葡萄球菌繼發感染，選用該菌敏感性高的藥物（如腸道康、舒坦西林和東方瀉立停）進行治療，輪換使用敏感藥物，使用1%高錳酸鉀溶液清洗病豬患部，再涂上龍膽紫，2次/d，連用3d。同時，做好豬群進行補液、補糖等對癥治療。要加強豬群飼養管理，建立獸醫衛生防疫制度，在預防接種的同時，要結合搞好豬場環境衛生、嚴格消毒等綜合防治措施，避免疫病的發生。

［1］ 馮俊亮，劉玉民，付永增.豬偽狂犬病與葡萄球菌病混合感染的診治［J］.湖北畜牧獸醫，2010，（4）：36-36.

杜海燕（1983-），女，助理獸醫師，主要從事動物疫病診斷與防治工作，現工作于新疆市動物疫病預防控制中心。