頂空氣相色譜法同時測定比沙可啶原料藥中2種溶劑殘留量

姜建國，孫 婷，郭永輝，韓學靜，苗會娟（河北省藥品檢驗研究院，石家莊 050011）

頂空氣相色譜法同時測定比沙可啶原料藥中2種溶劑殘留量

姜建國＊，孫 婷，郭永輝，韓學靜，苗會娟（河北省藥品檢驗研究院，石家莊 050011）

目的：建立同時測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細管柱，程序升溫，進樣口溫度為220℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，溫度為250℃，載氣為高純氮氣，載氣流速為3.0 ml/min，分流比為1∶10，頂空加熱溫度為70℃，平衡時間為30 min，頂空瓶裝樣量為5 ml，頂空進樣量為1 ml。結果：二氯甲烷和乙酸乙酯檢測質量濃度線性范圍分別為6～120 μg/ml（r=0.999 9）、50～1 000 μg/ml（r=0.999 9）；定量限分別為0.2、1.7 μg，檢測限分別為0.06、0.5 μg；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD≤3%；加樣回收率分別為100.30%～102.00%（RSD=0.63%，n=9）、100.10%～101.30%（RSD=0.44%，n=9）。結論：該方法操作簡便、結果準確，可用于同時測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量。

比沙可啶；頂空氣相色譜法；溶劑殘留量；二氯甲烷；乙酸乙酯

比沙可啶，是德國20世紀50年代末上市且目前仍在臨床上廣泛使用的接觸性緩瀉劑［1-3］。在該原料藥的合成過程中，使用了二氯甲烷和乙酸乙酯［4］，其中乙酸乙酯殘留可導致患者惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、倦睡、昏迷甚至死亡等；二氯甲烷屬于二類殘留溶劑且具有一定的毒性。該原料藥收載于2015年版《中國藥典》（二部）［5］，但該標準并未對二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量作具體要求；且目前尚未見測定比沙可啶原料藥中有機溶劑殘留量的報道。因此，為保證藥品質量和用藥安全，筆者采用頂空氣相色譜法同時測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯的含量。

1 材料

1.1 儀器

Trace1310型氣相色譜儀，包括TriPlusRSH型自動頂空進樣器、氫火焰離子化檢測器（FID）和CHROMLETEON 6色譜工作站（美國Thermo Fisher Scientific公司）；XS105型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；MCM36型百萬分之一電子分析天平（德國Sartorius公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：200 W，頻率：40 kHz）；GWA-UN2-C30型超純水器（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.2 藥品與試劑

比沙可啶原料藥（A公司，編號：201301A；B公司，編號：201302B）；二氯甲烷對照品（批號：M1550000，純度：98%）、乙酸乙酯對照品（批號：209-686-8，純度：99%）均購自美國藥典委員會；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細管柱（30.00 m×0.32 mm，1.80 μm）；程序升溫：初始溫度40℃，保持9 min，以40℃/min升溫至200℃，保持10 min；進樣口溫度：220℃；檢測器：FID；溫度：250℃；載氣：高純氮氣；載氣流速：3.0 ml/min；分流比：1∶10；頂空加熱溫度：70℃；平衡時間：30 min；頂空瓶裝樣量：5 ml；頂空進樣量：1 ml。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取二氯甲烷、乙酸乙酯對照品各300、2 500 mg，置于同一50 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，作為混合對照品貯備液。取上述混合對照品貯備液適量，置于50 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，制得二氯甲烷的質量濃度為60 μg/ml、乙酸乙酯的質量濃度為500 μg/ml的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品適量，精密稱定，置于50 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，即得。

2.2.3 空白對照溶液 取DMF作為空白對照溶液。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各成分均能達到基線分離，分離度＞2.0；理論板數以乙酸乙酯峰計為10 000，保留時間為13.5 min。結果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖A.空白對照；B.混合對照品；C.供試品；1.二氯甲烷；2.乙酸乙酯Fig 1 GC chromatogramsA.blank control；B.nixed reference substance；C.test sample；1.dichloromethane；2.thyl acetate

2.4 線性關系考察

分別精密量取“2.2.1”項下混合對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得二氯甲烷的回歸方程為y=0.036x+0.001（r= 0.999 9）、乙酸乙酯的回歸方程為y=0.855x－0.025（r= 0.999 9）。結果表明，二氯甲烷和乙酸乙酯檢測質量濃度線性范圍分別為6～120、50～1 000 μg/ml。

2.5 定量限與檢測限考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，等倍逐步稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得二氯甲烷和乙酸乙酯的定量限分別為0.2、1.7 μg；當信噪比為3∶1時，得二氯甲烷和乙酸乙酯的檢測限分別為0.06、0.5 μg。

2.6 精密度試驗

精密量取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，二氯甲烷和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為3.0%、2.6%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

精密量取“2.2.2”項下供試品溶液（編號：201301A）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，二氯甲烷和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為3%、2.3%（n=6），表明供試品溶液在室溫下10 h內基本穩定。

2.8 重復性試驗

取樣品（編號：201301A）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，二氯甲烷和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為2.3%、2.1%（n=6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品（編號：201301A）適量，共9份，每份約500 mg，置于50 ml量瓶中，分別加入低、中、高質量的二氯甲烷和乙酸乙酯對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n=9）Tab 1 Results of recovery tests（n=9）

2.10 樣品中殘留溶劑測定

取2批樣品各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量。結果，2批樣品（編號：201301A、201302B）乙酸乙酯中的殘留量分別為0.2%、0.3%（n=3）；1批樣品（編號：201301A）二氯甲烷的殘留量為0.03%（n=3），而另外1批樣品則未檢出。

3 討論

3.1 氣相色譜方法的選擇

二氯甲烷和乙酸乙酯均為中、低沸點的有機揮發性溶劑［6-11］。頂空氣相色譜法的原理是通過加熱裝置將樣品中可揮發組分烘出收集，使用該方法測定時可避免揮發性成分的損失，又可降低提取物引起的噪聲；與液-液萃取和固相萃取相比，靈敏度更高、分析速度更快，可消除樣品基質的潛在干擾。因此，本試驗選擇頂空氣相色譜法進行二氯甲烷和乙酸乙酯殘留量的測定。

3.2 提取溶劑的選擇

由于比沙可啶不溶于水［5］，且采用頂空氣相色譜法測定樣品時，一般使用二甲亞砜和DMF作為提取溶劑［12］。結果，二甲亞砜作為提取溶劑時，樣品在二甲亞砜中的溶解性較差且對其他峰干擾較大；DMF作為提取溶劑時，二氯甲烷和乙酸乙酯在DMF中的溶解性較好，且DMF沸點高，對其他峰的干擾較小。因此，筆者采用DMF作為本試驗的提取溶劑。

綜上所述，本方法操作簡便、結果準確，可用于同時測定比沙可啶原料藥中二氯甲烷和乙酸乙酯的殘留量。

［1］王卉，杜春波，沈立，等.RP-HPLC法測定比沙可啶片劑含量及有關物質［J］.藥學進展，2005，29（12）：565.

［2］張奕華，侯秀清，黃賜福.比沙可啶合成工藝研究［J］.中國藥師，1999，2（1）：7.

［3］李穎，劉世寬，郝志剛.結腸定位給藥制劑：比沙可啶速釋片的研制［J］.山東醫藥工業.2000，19（3）：7.

［4］張軍輝，劉英華，李金嶺，等.比沙可啶的合成工藝研究［J］.精細化工中間體，2012，42（2）：30.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部［S］.2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：74.

［6］祝波，趙魯青，陳安珍，等.頂空采樣-毛細管氣相色譜法分析格列美脲原料藥中的溶劑殘留［J］.色譜，2009，27（6）：755.

［7］孫悅，王衛，唐素芳.頂空氣相色譜法測定鹽酸帕羅西汀中殘留的有機溶劑及基質效應考察［J］.藥物分析雜志，2010，30（5）：963.

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［9］汪斌，鄭璐，姚仲青，等.頂空氣相色譜法測定胡黃連苷Ⅱ原料藥中7種有機溶劑殘留量［J］.中國藥房，2015，26（27）：3 859.

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［11］吳朝華，王秀梅，顧保明，等.頂空毛細管氣相色譜法測定鹽酸丁卡因原料藥中的殘留溶劑［J］.藥物分析雜志，2011，31（6）：1 188.

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（編輯：劉 柳）

Simultaneous Residual Determination of Two Organic Solvents in Bisacodyl Raw Material by Head-space GC

JIANG Jianguo，SUN Ting，GUO Yonghui，HAN Xuejing，MIAO Huijuan（Hebei Institute for Drug Control，Shijiazhuang 050011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for simultaneous residual determination of dichloromethane and ethyl acetate in bisacodyl raw material.METHODS：Head-space GC was performed on the capillary column of 6%cyanopropyl phenyl-94%dimethyl polysiloxane（DB-624）by temperature programming，the temperature of injector was 220℃，detector was flame ionization detector with temperature of 250℃，carrier gas was high purity nitrogen with the flow rate of 3.0 ml/min，split ration was 1∶10，headspace heating temperature was 70℃，equilibration time was 30 min，volume of headspace vial was 5 ml，and the injection volume was 1 ml.RESULTS：The linear range was 6-120 μg/ml for dichloromethane（r=0.999 9）and 50-1 000 μg/ml for ethyl acetate（r=0.999 9）；the limit of quantitation was 0.2，1.7 μg，limit of detection was 0.06，0.5 μg；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were no higher than 3%；recoveries were 100.30%-102.00%（RSD=0.63%，n=9）and 100.10%-101.30%（RSD=0.44%，n=9）.CONCLUSIONS：The method is simple and accurate，and can be used for the simultaneous residual determination of dichloromethane and ethyl acetate in bisacodyl raw material.

Bisacodyl；Head-space GC；Residual determination；Dichloromethane；Ethyl acetate

R917

A

1001-0408（2016）30-4297-03

2016-01-11

2016-08-18）

＊主任藥師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0311-85212009。E-mail：122547652@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.30.39