不同稀釋劑對獺兔精液保存和授精效果的影響研究

朱文淵李海濤

（1.濟寧市畜牧獸醫局，山東濟寧 272037；2.曲阜市畜牧獸醫局，山東曲阜 273100）

不同稀釋劑對獺兔精液保存和授精效果的影響研究

朱文淵1李海濤2

（1.濟寧市畜牧獸醫局，山東濟寧 272037；2.曲阜市畜牧獸醫局，山東曲阜 273100）

采用單因素隨機分組設計研究了4種稀釋劑配比對獺兔精子存活時間、精子活力變化及授精效果的影響。結果表明∶生理鹽水組（NS組）精子存活時間最長為33.3±1.0h，極顯著高于果糖-檸檬酸鈉組（Fru-SC組）（23.3±0.6h）、葡萄糖-檸檬酸鈉組（G-SC組）（22.3±0.6h）和蔗糖-檸檬酸鈉組（Suc-SC組）（21.2±0.8h），Fos-SC組和G-SC組無顯著差異，Fos-SC組極顯著高于Suc-SC組；精子活力隨保存時間增加均呈下降趨勢，且在12h以內4組均能滿足授精要求。授精試驗表明∶保存4h以內，4種稀釋劑對獺兔受孕率（70～74%）和產仔率（6.17±1.40～6.44±1.42）均無顯著影響。

獺兔；精液；稀釋劑；存活時間；精子活力；受孕率；產仔數

獺兔為皮肉兼用品種，具有較高的經濟價值。自2013年以來，獺兔價格下行，市場低迷，但優質兔皮仍供不應求。我國是獺兔養殖大國，但養殖水平不高，種質資源退化嚴重。在歐洲，養兔普遍采用育種公司提供優質鮮精，養殖戶人工授精的方式繁殖［1］。人工授精技術的應用可使優質種公兔的利用率提高10倍以上，能加速優質兔群的選育，降低生產成本，并避免各類疾病的垂直傳播。當前，我國獺兔的飼養方式主要為庭院養殖，規模小、養殖水平低，繁殖多為本交，僅在部分規?；B殖場逐步采用人工授精。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器和試劑

顯微鏡（鳳凰XSP-35-1600X）、生物培養箱（上海新苗SPX150）、手提式高壓滅菌器（新豐XFS-280）、百分之一電子天平（梅特勒）、兔用采精器、輸精槍等。

無水檸檬酸鈉、檸檬酸、蔗糖、果糖、葡萄糖均為分析純，促排卵3號（LHRH-A，寧波三生藥業），孕馬血清（PMSG，寧波三生藥業），生理鹽水，青霉素，鏈霉素等。

1.2 試驗動物

選取約12月齡健康美系獺兔種公兔20只，經產2～3胎健康母兔200只做為試驗動物，均由曲阜市佳利獺兔養殖合作社種兔場提供。

1.3 稀釋液配制

試劑配制所用玻璃器皿、去離子水均在121℃高壓滅菌20min，試劑稱量使用百分之一天平，準確至0.01g。按表1配制稀釋液，每100ml稀釋液中含青、鏈霉素各10IU，2～4號稀釋液滴加少量檸檬酸調節pH值到6.5。1到4號稀釋液滲透濃度分別為：308mmol/L、400mmol/L、400mmol/L、305mmol/L。配制好后35℃保存備用。

1.4 試驗設計

使用假陰道式采精器采集精液，正常精液應為乳白色，無異物，鏡檢呈云霧狀翻騰，活力在0.7以上。將合格的精液混勻，過4層紗布，鏡檢活力應在0.7以上。

精子活力隨時間變化規律和存活時間測定：混精用各組稀釋液按1：5的比例稀釋混勻，每組各取3份，每份2mL置于滅菌的青霉素小瓶中，于4℃冰箱內保存，于稀釋后4h、12h、24h、48h分別檢查一次精力活力，并記錄存活時間。

表1 不同稀釋液配制表

授精試驗：采用單因素隨機分組設計，每組母兔50只。母兔注射25單位PMSG同期發情，注射后2～5h達到發情高峰。用35℃平衡的各組稀釋液按1：5的比例稀釋混精，每只母兔輸精0.5ml，同時注射0.5單位LHRH-A超排，整個過程在精液稀釋后4h內完成。統計受孕率和產仔率。

1.5 數據處理

使用SPSS19.0對試驗結果進行單因素方差分析，顯著性檢驗采用LSD法和Duncan法。使用卡方分析對受孕率進行顯著性檢驗。

2 結果分析

2.1 不同稀釋劑對精子活力和存活時間的影響

如表2所示，4類稀釋液對精子存活時間的影響存在極顯著差異。NS組精子存活時間最長，極顯著高于其它3組（P＜0.01）。Fru-SC組和G-SC組精子存活時間無顯著差異（P＞0.05），Fru-SC組精子存活時間極顯著高于Sur-SC組（P＜0.01），G-SC組和Sur-SC組稀釋液之間存活時間無顯著差異（P＞0.05）。各組稀釋液精子活力隨時間均呈下降趨勢，但在12h以內，精子活力均大于0.6，能滿足人工授精的要求。

表2 不同稀釋劑對精力活力變化和存活時間的影響 n=3

2.2 不同稀釋劑對受孕率和產仔數的影響

不同稀釋劑對獺兔人工授精受孕率和平均產仔數的影響如表3所示。各組的受孕率在70～74%之間，和該場年平均受孕率72%左右持平。Fru-SC組平均產仔數最高達到6.44只，NS組6.17只的平均產仔數最低，但均高于該廠年平均窩產仔數6只的水平。各組稀釋液之間受孕率和平均產仔數均無顯著性差異（P＞0.05）。

表3 不同稀釋劑對受孕率和產仔數的影響

3 討論

（1）張兆旺（2001）研究表明，使用8種不同的稀釋劑配方，平均精子生存指數均在等滲濃度附近（300mmol/L）最高［2］。在偏高滲的環境中精子可以保持流線型的正常形態，且對精子存活時間、生存指數均無顯著影響［2］。精子在偏酸性環境下，活動力降低，可較長時間保持授精能力［3］。檸檬酸鈉可以起到抗精子凝集和緩沖pH值的作用；蔗糖具有保護生物膜，維持精子正常生理形態的功能。果糖和葡萄糖均是精子可利用的營養物質。因此，本試驗中所使用的4中稀釋劑為等滲或微高滲，并調節pH值到6.5，在此基礎上研究不同成分對精液保存時間、活力等各項指標的影響。本試驗結果表明，保存12h以內精子活力下降緩慢，各組稀釋液均能滿足人工授精的要求。存活時間NS組最長極顯著高于其它3組，此結果和張兆旺（2001）［2］在雞上的研究結果一致，究其原因可能是鈉離子對精子的興奮作用有關。兩種單糖的添加對精子存活時間無顯著影響，這表明在適宜緩沖條件下，因精子利用單糖而導致pH值下降的損傷可以消除。蔗糖在稀釋劑中主要起維持精子正常形態的作用，對提高存活時間并未表現出作用，這也可能是由于各組間緩沖濃度的不同造成的。

（2）授精試驗結果顯示，各組間受孕率無顯著性差異，且均高于70%，這和孫亞紅（2011）在長毛兔上的實驗結果基本一致［4］，也和該場年平均受孕率72%左右持平。平均產仔數NS組最低，這可能是由于在NS保存過程中會造成精子畸形率過高導致，因此，NS組較高的精子存活時間可能并無應用價值。Sur-SC組在存活時間上略低，在保存12h以內精子活力與其它各組無顯著差異，且受孕率和平均產仔數和其它各組均無顯著性差異，鑒于蔗糖對細胞膜的保護作用，由此推斷在精子保存時間延長的時候可能會有較好的授精效果。

4 結論

在本試驗條件下可以得出以下結論：4℃保存條件下，使用4種稀釋液精子存活時間由長到短依次為生理鹽水組、果糖-檸檬酸鈉組、葡萄糖-檸檬酸鈉組和蔗糖-檸檬酸鈉組；隨保存時間的延長，各組稀釋液精子活力呈下降趨勢，在12h以內均能滿足人工授精的要求。使用各組稀釋液，精子保存時間在4h以內進行授精試驗并不影響獺兔的受孕率和產仔率。生理鹽水獲取簡便，在精子短期保存的條件下（4h以內）建議選用生理鹽水做為精子稀釋劑。

［1］ 秦應和，李福昌，余志菊，等.歐洲三國兔業考察報告［J］.草食與畜牧，2010，（11）：56-60.

［2］ 張兆旺.稀釋液溶質和滲透壓對精子體外存活及形態的影響［J］.中國家禽，2001，23（8）：50-52.

［3］ 穆秀名，吳淑琴，王凈，等.不同稀釋液對塞北兔精液保存效果的影響［J］.黑龍江動物繁殖，2011，19（2）：11-13.

［4］ 孫亞紅，聶文貴，裴學，等.不同季、不同稀釋液對長毛兔人工授精對比試驗［J］.黑龍江畜牧獸醫，2011，（1）：62-63.