脂餐負(fù)荷前后ox-LDL和PON1變化及其與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系的研究

杜沙沙，靳春榮，李思進(jìn)，陳 武，梁建芳

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脂餐負(fù)荷前后ox-LDL和PON1變化及其與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系的研究

杜沙沙1，靳春榮2，李思進(jìn)2，陳 武2，梁建芳2

目的 探討動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展中脂餐負(fù)荷對(duì)氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和對(duì)氧磷酶1(PON1)的影響。方法 高脂飼養(yǎng)新西蘭雄兔12周，初始及第4周、8周、12周給予脂餐負(fù)荷，負(fù)荷前后采血測(cè)定血清ox-LDL、PON1水平；同期超聲觀察動(dòng)脈硬化。結(jié)果 血清ox- LDL：空腹水平呈升高趨勢(shì)，4周、8周、12周較初始升高(P<0.05)，8周最高。負(fù)荷后，初始先升后降，2 h最高(P<0.05)，8 h最低；4周、8周先升后降，4周時(shí)2 h末升高顯著(P<0.05)，6 h最低，8周時(shí)2 h升高，8 h降低顯著(P<0.05)；12周先升后降(P>0.05)。血清PON 1：空腹水平呈顯著升高(12周最高，P<0.05)。負(fù)荷后，初始先升后降，4 h顯著升高(P<0.05)，8 h最低；4周、12周呈降低-升高-降低趨勢(shì)(6 h升高、8 h最低，P<0.05)；8周先升后降(P>0.05)。結(jié)論 動(dòng)脈硬化進(jìn)展過(guò)程中，機(jī)體始終處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，脂餐負(fù)荷可能使氧化抗氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)。

動(dòng)脈粥樣硬化；脂餐負(fù)荷；氧化低密度脂蛋白；氧磷酶1

我國(guó)心血管病病人達(dá)2.9億，其患病率逐年上升。動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是心血管病發(fā)生的共同基礎(chǔ)，也是危害人類(lèi)生命的首因。血脂紊亂是AS發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。目前多種假說(shuō)闡述AS發(fā)生發(fā)展，具體機(jī)制尚不清楚。2015年提出“堅(jiān)持百年膽固醇學(xué)說(shuō)不動(dòng)搖”。 氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)使低密度脂蛋白(LDL)構(gòu)象改變，更易進(jìn)入血管壁，從而促進(jìn)AS進(jìn)程，是常用氧化損傷標(biāo)記物。Palavra等[1]發(fā)現(xiàn)ox-LDL可預(yù)測(cè)早期心血管病風(fēng)險(xiǎn)。近年來(lái)，氧磷酶(PON1)的抗氧化作用引起廣泛關(guān)注。本研究通過(guò)高脂喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔，不同期給予脂餐負(fù)荷，分別測(cè)定負(fù)荷前后ox-LDL、PON1濃度，以研究其與AS的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 健康新西蘭雄兔10只，體重2.4 kg～3.0 kg，太原市小店區(qū)科鑫畜牧養(yǎng)殖場(chǎng)提供，分籠飼養(yǎng)，不限飲水。膽固醇由北京索萊寶公司提供，兔ox-LDL、PON1試劑盒購(gòu)于上海西唐生物科技公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型建立 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物高脂(1%膽固醇，10%蛋黃，89%普通飼料)喂養(yǎng)12周，初始及第4周、8周、12周禁食水8 h后給予脂餐負(fù)荷(2%膽固醇，20%蛋黃，78%普通飼料)。

1.2.2 研究指標(biāo)測(cè)定和超聲檢查 全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在研究不同階段，分別于空腹及負(fù)荷后2 h、4 h、6 h、8 h經(jīng)耳緣靜脈采血2 mL，離心(3 000 r/min，15 min)分離血清，-80 ℃保存。研究結(jié)束時(shí)，用ELISA試劑盒測(cè)定血清ox-LDL、PON1水平。靜脈采血同時(shí)應(yīng)用超聲觀察腹主動(dòng)脈硬化情況。

2 結(jié) 果

研究結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)超聲觀察均出現(xiàn)了動(dòng)脈硬化。動(dòng)脈硬化進(jìn)展中，空腹及脂餐負(fù)荷后ox-LDL和PON1變化情況詳見(jiàn)表1、表2。

表1 動(dòng)脈硬化過(guò)程中空腹及脂餐負(fù)荷后ox-LDL變化(±s) mU/L

表2 動(dòng)脈硬化過(guò)程中空腹及脂餐負(fù)荷后PON 1變化(±s) ng/mL

3 討 論

餐后高脂血癥是心血管事件的一個(gè)強(qiáng)有力危險(xiǎn)因素，餐后脂質(zhì)水平可誘導(dǎo)增強(qiáng)氧化應(yīng)激，從而參與動(dòng)脈粥樣硬化形成[2]。氧化應(yīng)激參與AS發(fā)生發(fā)展的基本過(guò)程，餐后狀態(tài)增加機(jī)體氧化損傷的易感性。富含多不飽和脂肪酸的LDL極易被氧化修飾，形成ox-LDL，使LDL的生物活性發(fā)生改變，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴(lài)性細(xì)胞毒性[3]、化學(xué)趨向性和免疫原性，參與AS發(fā)生發(fā)展的眾多過(guò)程。血清ox-LDL水平可反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度。Violi等[4]認(rèn)為：在攝入不加10 g橄欖油的地中海飲食2 h后，血清ox-LDL水平顯著升高；攝入麥當(dāng)勞餐者血清ox-LDL較基線(xiàn)水平顯著增加[5]。本研究中，動(dòng)脈硬化不同階段ox-LDL水平升高，提示AS過(guò)程中氧化反應(yīng)增加，負(fù)荷后2 h血清ox-LDL水平較高，與上述研究相似。

PON1是一種與高密度脂蛋白相關(guān)的酯酶，具有內(nèi)酯酶、芳香酯酶活性。PON1可通過(guò)抑制LDL的氧化修飾及巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用。冠心病病人血清PON1活性降低[6]，有學(xué)者建議將PON1作為心血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。Kim等發(fā)現(xiàn)：血清PON1活性隨膳食中膽固醇的攝入量增加而升高[7]。本研究發(fā)現(xiàn)：動(dòng)脈硬化進(jìn)展過(guò)程中血清PON1水平逐漸升高，與上述研究結(jié)果相符。

膳食膽固醇的攝入可能影響apoA1，改變血清PON1的活性。高脂飲食初始給予脂餐負(fù)荷，血清PON1活性升高，可能與膽固醇攝入增加有關(guān)。Ayub 等[8]認(rèn)為心肌梗死病人在癥狀出現(xiàn)2 h后血清PON1活性開(kāi)始降低。本研究中，動(dòng)脈硬化不同階段，脂餐負(fù)荷2 h后血清PON1活性下降，血清ox-LDL水平升高，與上述結(jié)果一致，提示脂餐負(fù)荷后機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，且可能因?yàn)镻ON1抑制體內(nèi)LDL的進(jìn)一步氧化[9]而被消耗，PON1進(jìn)一步降低；此后血清PON1開(kāi)始升高，PON1芳香酯活性增加，這可能與餐后PON1內(nèi)酯酶活性下降、PON1內(nèi)酯酶和芳香酯活性轉(zhuǎn)變有關(guān)[10]，提示可選擇其他種類(lèi)的PON1作為餐后狀態(tài)的標(biāo)記。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)：AS進(jìn)展中空腹血清ox-LDL、PON1均呈增高趨勢(shì)，且脂餐負(fù)荷后ox-LDL升高，PON1下降，提示高脂飲食過(guò)程中，機(jī)體始終處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，脂餐負(fù)荷使氧化抗氧化反應(yīng)加強(qiáng)。

關(guān)于動(dòng)脈硬化進(jìn)程中脂餐負(fù)荷對(duì)氧化應(yīng)激標(biāo)記物的影響和具體機(jī)制，本次研究受實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量及研究期限所限，尚需繼續(xù)深入研究。

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(本文編輯郭懷印)

山西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2014011040-6)

1.山西醫(yī)科大學(xué)研究生(太原030001)；2.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院

靳春榮，E-mail：519349183@qq.com

R543.5 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.19.012

1672-1349(2016)19-2246-02

2016-03-05)

引用信息：杜沙沙，靳春榮，李思進(jìn)，等.脂餐負(fù)荷前后ox-LDL和PON1變化及其與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系的研究[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2016，14(19)：2246-2247.