基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏的制備及其效果研究

朱雨涵 蔣革 羅鋒 吳艷華 楊澤慶

摘要：[目的]篩選基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏的配方，并觀察其傷口愈合效果。方法]以正交設計法篩選出軟膏最佳配比，并通過眼刺激實驗、愈傷性實驗觀察其毒副作用及傷口愈合效果。[結果]透明質(zhì)酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氫化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸餾水81.7g、NaOH極少量可作為軟膏的配方，通過動物實驗得到無毒、無刺激性軟膏，對傷口愈合有一定功效。[結論]上述配方所制備的基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏性質(zhì)穩(wěn)定，可有效促進傷口愈合，為油茶油的開發(fā)提供科學依據(jù)。

關鍵詞：透明質(zhì)酸;油茶油;軟膏劑

中圖分類號：G642.0 ? ? 文獻標志碼：A ? ? 文章編號：1674-9324（2016）42-0080-03

透明質(zhì)酸（HA）[1]具有良好保濕作用，又是皮膚和其他組織中廣泛存在的天然生物分子，被譽為理想的天然保濕因子，HA通過促進表皮細胞的增殖和分化以及清除氧自由基的作用，可促進受傷部位皮膚再生。

油茶油[1]，又名山茶（籽）油，是從山茶科山茶屬植物普通油茶的成熟種子中提取的純天然高級食用植物油。油茶油中不飽和脂肪酸含量高達80%，富含維生素E、茶多酚和山茶甙等物質(zhì)。在治療刀傷、燙傷、防紫外等方面有良好功效。油茶是我國特有的品種，分布于我國十三四個省，適生范圍廣泛[2-3]。然而茶油的利用還僅僅集中在食用方面，利用率極低。迄今為止，國內(nèi)尚無上市的油茶油外用制劑及相關臨床研究。

本次研究將具有保水及促進藥物吸收作用的HA作為軟膏的基質(zhì)促進皮膚對油茶油的吸收，增大有效作用率，為油茶油多功能性的開發(fā)提供科學依據(jù)，具有重要意義和廣泛應用前景。

一、儀器與材料

1.儀器。電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）;85-2型恒溫磁力攪拌器（上海儀表集團供銷公司）;GL—20G—II型離心機（上海安亭科學儀器廠）;DV215CD型電子天平（美國Ohaus公司）。

2.材料。油茶油（深圳華之貢食品有限公司）、透明質(zhì)酸（新疆阜豐有限公司）、卡波姆（武漢諾輝醫(yī)藥化工有限公司）、PEG-40氫化蓖麻油、精確pH試紙（上海生工生物工程有限公司）、小鼠（大連醫(yī)科大學）。

二、方法與結果

1.輔料的選擇。PEG-40氫化蓖麻油是一種高效增溶劑，可作為乳化劑使軟膏穩(wěn)定均一。卡波姆[4]具有良好的乳化性、增稠性、助懸性和成膜性，對人安全，未見刺激性、過敏性或變應性反應。在pH值和濃度合適時，對眼、鼻均無刺激性，是迄今唯一被認為可作內(nèi)服用的藥品級樹脂，于半固體制劑中使用濃度通常為0.5%—3.0%，可作為軟膏的增稠劑。油茶油本身具有抑菌作用，故本品不需添加防腐劑。

2.實驗方法。

（1）油茶油軟膏劑制備方法。

水相：稱取HA粉末、蒸餾水溶解并70℃預熱30min。

油相：稱取油茶油、PEG-40氫化蓖麻油70℃預熱30min。

將水相緩緩加入油相，邊加邊攪拌，乳化20—30min成軟膏。取卡波姆加入軟膏中繼續(xù)攪拌直至溶解，逐滴加入1%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0—7.4。

（2）耐熱、常溫、耐寒實驗。將制備的軟膏分別置于45℃、20℃、-20℃環(huán)境下，觀察分層、色澤、粘性、質(zhì)地等情況，若產(chǎn)品未出現(xiàn)分層及液化現(xiàn)象，色澤透徹，粘性適中，質(zhì)地細膩均一則為最佳[5]。

（3）離心實驗。將制備的軟膏分裝至15ml離心管5—10ml，置于離心機3000r/min離心20min，觀察油水分層情況，若產(chǎn)品未出現(xiàn)分層、色澤透徹、粘性適中、質(zhì)地細膩均一則為最佳。

3.正交實驗設計篩選主料配比。為尋求軟膏劑主成分的最佳配比，采用正交設計法進行篩選，以尋得最佳范圍的理化指標。

（1）因素與水平的確定。確定考察因素為透明質(zhì)酸（A）、PEG-40氫化蓖麻油（B）、油茶油（C）的處方量，每個因素安排低、中、高3個濃度水平進行優(yōu)選[6]，實驗因素與水平安排見表1。

（2）正交實驗篩選處方比例。以上述確定的3因素3水平按照L9（34）正交表的設計制備9份軟膏樣品。依據(jù)乳劑型軟膏的性狀以及經(jīng)驗，選取考察軟膏的幾項指標，并設定各項的權重。通過耐寒、耐熱、常溫、實驗進行穩(wěn)定性評分，時間設為24h（即溫度對軟膏的影響，各占總評分的25%）;離心穩(wěn)定性評分（占總評分的25%）。綜合評分10分為滿分，其中綜合評分=耐寒穩(wěn)定性評分×25%+耐熱穩(wěn)定性評分×25%+常溫穩(wěn)定性評分×25%+離心穩(wěn)定性評分×25%。正交設計表及結果分析見表2[7]。

極差R的大小反映了考察的3個因素對配方質(zhì)量的影響程度，由表3的結果得知，3個因素對配方影響程度為A>C>B。得出最優(yōu)實驗結果為A3B2C3，即透明質(zhì)酸0.01 g/ml，油茶油0.15 g/ml，PEG-40氫化蓖麻油0.005 g/ml。由于此處理結果未出現(xiàn)于上述實驗中，故設計驗證實驗以確定該處理結果的正確性。經(jīng)證實含HA（透明質(zhì)酸）1% g/ml，PEG-40氫化蓖麻油0.5% g/ml和油茶油15% g/ml為最優(yōu)實驗組。結果見表3。

4.配比微調(diào)優(yōu)化處方。

（1）乳化劑用量。為確定透明質(zhì)酸和油茶油含量，將乳化劑PEG-40氫化蓖麻油中濃度（0.5%）范圍內(nèi)設置5個梯度：0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%并按1—5依次編號。通過耐寒、耐熱、常溫、實驗進行穩(wěn)定性評分確定其最佳配比為0.7%。結果見表4。

（2）輔料添加。考慮到透明質(zhì)酸高濃度時不利于藥品透皮吸收，且價格較為昂貴，為增強軟膏效果，縮減高昂的成本，將透明質(zhì)酸成分量減至0.5%，使用卡波姆增稠穩(wěn)定。設置6個濃度梯度：0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%，通過耐寒、耐熱、常溫、實驗進行穩(wěn)定性評分確定其最佳配比為2.0%。結果見表5。

綜上述實驗結果，確定軟膏的配方為透明質(zhì)酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氫化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸餾水81.7g、NaOH極少量。

5.油茶油軟膏的質(zhì)量檢查。

（1）穩(wěn)定性實驗。取上述配方所得軟膏樣品在45℃、20℃、-20℃環(huán)境下分別放置10d，20d，30d，通過耐寒、耐熱、常溫實驗進行穩(wěn)定性評分并測定pH值（取適量蒸餾水，加入足量軟膏至飽和，使用精密pH試紙測定）[8]。穩(wěn)定性實驗結果見表6。

（2）軟膏的眼刺激性實驗。選擇健康成年小鼠6只（眼睛已做檢查），雌雄各半，輕輕拉開小鼠一側眼睛的下眼瞼，將受試物0.05mL（1滴）滴入結膜囊中，使上、下眼瞼被動閉合1s，以防止受試物丟失。另一側眼睛不處理作自身對照。1h、12h、24h后分別用強光照射并用放大鏡進行觀察。結果小鼠視線無異常，由此可知，軟膏溫和無刺激。

（3）軟膏效果實驗。選擇健康成年小鼠6只，雌雄各半，分開飼養(yǎng)，將小鼠背部脊柱兩側毛脫去面積各約1㎡，消毒，再用注射針頭將去毛消毒皮膚劃破，以有滲血為度。給藥一側傷口，另一側不處理作自身對照。12h給藥一次，持續(xù)10d，每天拍照觀察兩側傷口恢復情況[9-13]。結果證明軟膏有良好的愈傷功效。

三、討論

實驗結果表明，以透明質(zhì)酸0.5g、油茶油15g、PEG-40氫化蓖麻油0.7g、卡波姆2g、蒸餾水81.4g、NaOH極少量制備的油茶油軟膏穩(wěn)定性高，有抑菌愈傷功效，天然無刺激性、涂抹膚感油性適中，色澤好，因此可以采用此配方制備基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油軟膏制劑。但對其透皮吸收功能以及祛疤等功效需要進一步地深入研究。

本制劑成分天然單純，制備工藝簡單，所使用成分均有益于人體。以透明質(zhì)酸為基質(zhì)更使膏體及皮膚保濕細膩，本實驗制備的基于透明質(zhì)酸基質(zhì)油茶油乳劑型軟膏天然保濕，愈傷祛疤，為進一步開發(fā)油茶油的應用奠定了基礎。

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Study on Preparation and Effect of Oil Tea Ointment Based on Hyaluronic Acid

ZHU Yu-han，JIANG Ge，LUO Feng，WU Yan-hua，YANG Ze-qing

（College of life science and technology，Dalian University，Dalian，Liaoning 116622，China）

Abstract：[Objective]The formula of oil tea ointment based on hyaluronic acid matrix was screened，and observe the wound healing effect.[method] the optimal ratio of ointment was selected by orthogonal design method，and the effect of toxicity and wound healing was observed by eye irritation test.[results] hyaluronic acid 0.5g，camellia oil 15g，PEG-40 hydrogenated castor oil 0.7g，card 2g Bohm，distilled water 81.7g，NaOH very little can be as a paste formulation.Through animal experiments to be non-toxic，non irritating ointment，the wound healing has a certain effect.[Conclusion] the preparation of the above formula based on hyaluronic acid matrix oil ointment is stable，can effectively promote wound healing，and provides a scientific basis for the development of camellia oil.

Key words：hyaluronic acid;camellia oil;ointment