HPLC法測定地膚子中蘆丁和槲皮素的含量

肖作奇 文曉柯 歐陽波 黃 懿田 霞 潘 濤

湖南省婦幼保健院藥學部，湖南長沙410008

HPLC法測定地膚子中蘆丁和槲皮素的含量

肖作奇 文曉柯 歐陽波 黃 懿田 霞 潘 濤

湖南省婦幼保健院藥學部，湖南長沙410008

目的建立測定地膚子藥材中蘆丁和槲皮素含量的方法。方法采用高效液相色譜法結合二極管陣列檢測器，選用Agi1ent TC-C18色譜柱，流動相為乙腈-0.2%磷酸（梯度洗脫），檢測地膚子中蘆丁和槲皮素的含量。結果蘆丁和槲皮素的線性范圍分別為0.0017～0.0532 mg/mL和0.0011～0.0340 mg/mL，平均加樣回收率分別為98.5%、97.88%（RSD=1.57%、1.87%）。蘆丁和槲皮素的平均含量分別為0.0592、0.0215 mg/g。結論該方法簡單易行，穩定性和重復性好，可用于地膚子中蘆丁和槲皮素的含量測定。

地膚子曰高效液相色譜曰含量測定曰蘆丁曰槲皮素

地膚子具有清熱利濕、祛風止癢等功效，用于小便澀痛、皮膚瘙癢等癥［1］，還具有抗炎、抗病原微生物、抗蟲等作用［2-7］，多用于濕疹等皮膚病的治療。化學成分研究結果表明，其主要有效成分為皂苷和黃酮［8-11］。現階段，對地膚子的質量控制主要是地膚子皂苷Ⅰc的含量測定［1］，但對黃酮含量的測定方法無報道。本研究采用HPLC對不同產地的地膚子中的蘆丁和槲皮素的含量進行測定，為進一步控制地膚子質量提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子分析天平（Mett1er To1edo，d=0.01 mg），超聲清洗器（上海科導），高效液相色譜儀（島津，LC-20A型），色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，Agi1ent TC-C18）。

1.2 藥品和試劑

水（娃哈哈純凈水），乙腈、甲醇（Tedia，色譜純），其他試劑均為分析純。對照品購自上海詩丹德生物技術有限公司（蘆丁，批號：3920，純度99.3%；槲皮素，批號：3467，純度98.6%）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Agi1ent TC-C18色譜柱，流動相A為乙腈，B為0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫程序見表1，DAD檢測波長200～400 nm，總流速1.0 mL/min，進樣量10 μL，柱溫25℃。

表1 梯度洗脫程序

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備取地膚子過40目篩粉末2.0 g，稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇20 mL，密封，稱重，浸泡30 min，超聲處理30 min，取出后放至室溫后再次稱定重量，加80%乙醇補足損失重量，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.2.2 對照品溶液制備精密稱取蘆丁和槲皮素對照品各適量，分別置于25 mL容量瓶中，加色譜甲醇溶解并定容，搖勻，即得蘆丁和槲皮素對照品貯備溶液。同法配制混合對照品溶液，使每毫升溶液中含蘆丁0.0133 mg、槲皮素0.0085 mg。

2.3 系統適用性試驗

取“2.2”項下溶液，按照“2.1”項下色譜條件進行HPLC分析。結果見圖1。蘆丁和槲皮素理論塔板數均大于5000、分離度大于1.5、拖尾因子在0.95～1.05之間，符合含量測定要求。

圖1 地膚子和混合對照品HPLC圖（λ=370 nm）

2.4 線性關系考察

配制系列濃度的對照品溶液進行HPLC測定，進樣量10 μL，得到蘆丁和槲皮素的線性方程回歸方程分別為：Y=2.256×107X-1108，r2=0.9999，線性范圍為0.0017～0.0532 mg/mL；Y=6.783×106X-808.2，r2=0.9996，線性范圍為0.0011～0.0340 mg/mL。

2.5 精密度試驗

取“2.2.2”項下所制備的對照品溶液，適當稀釋，按“2.1”項下條件分別重復進樣6次，進樣量10 μL，測得蘆丁峰面積RSD=0.6%，槲皮素峰面積RSD= 0.7%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一批次地膚子粉末，按“2.2.1”項下方法平行制備，分別按“2.1”項下條件進行HPLC分析，進樣量10 μL，結果測得蘆丁峰面積RSD=1.9%，槲皮素峰面積RSD=1.5%，表明方法重復性良好。

2.7穩定性試驗

取地膚子粉末，按“2.2.1”項下方法平行制備，按“2.1”項下條件分別于0、2、4、8、12、24 h進行HPLC分析，進樣量10 μL，結果測得蘆丁峰面積RSD=1.8%，槲皮素峰面積RSD=1.6%，表明供試品在24 h內穩定性良好。

2.8 加樣回收率試驗

按表2取樣，進樣量10 μL，記錄峰面積，計算蘆丁和槲皮素的加樣回收率，結果見表2，結果符合含量測定要求。

表2 加樣回收率試驗

2.9 樣品含量測定

精密稱取不同產地和批號的地膚子樣品粉末各2.0 g，進行HPLC分析，進樣量10 μL，記錄峰面積，計算蘆丁和槲皮素含量。見表3。

表3 含量測定結果

3 討論

本研究考察了不同提取溶劑對地膚子中蘆丁和槲皮素提取的影響，發現80%乙醇溶液具有最高的提取率。同時，優化了超聲提取時間，發現30 min能將蘆丁和槲皮素提取完全。200～300 nm之間色譜圖中其他組分對蘆丁和槲皮素的測定干擾嚴重；300～400 nm之間，370 nm的HPLC圖譜無干擾，所以選擇370 nm為檢測波長。

中藥及其復方制劑由于其作用機制復雜、有效成分不明確，常常對其一種化學成分進行檢測難以有效控制其質量［12-14］。現代研究表明黃酮為中藥中主要有效成分，黃酮類成分也是地膚子中的潛在主要藥效成分［15-20］，對其中主要黃酮成分進行含量測定具有重要意義，本研究為地膚子質量標準深化提供科學依據。

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Simultaneous determination of rutin and quercetin in kochiae fructus by HPLC

XIAO ZuoqiWEN XiaokeOUYANG BoHUANG YiTIAN XiaPAN Tao
Department of Pharmacy，Hu′nan Provincia1 Materna1 and Chi1d Hea1th Care Hospita1，Hu′nan Province，Changsha 410008，China

Objective To estab1ish a method for simu1taneous determination of rutin and quercetin in kochiae fructus. Methods High performance 1iquid chromatography was performed on the co1umn of Agi1ent TC-C18co1umn with diode array detector.The mobi1e phase was acetonitri1e-0.2%phosphoric acid so1ution（gradient e1ution）.The compositions of quantitative ana1ysis were rutin and quercetin.Results The 1inear range of rutin and quercetin was 0.0017-0.0532 mg/mL and 0.0011-0.0340 mg/mL respective1y.The average recoveries were 98.5%and 97.88%with RSD of 1.57%and 1.87%respective1y.The average content of rutin and quercetin was 0.0592 mg/g and 0.0215 mg/g respective1y.Con鄄clusion This method is suitab1e for the content determination of rutin and quercetin in kochiae fructus with we11 stabi1ity and reproducibi1ity.

Kochiae fructus；HPLC；Content determination；Rutin；Quercetin

R914.1

A

1674-4721（2016）07（c）-0148-03

2016-04-08本文編輯：趙魯楓）

湖南省中醫藥管理局科研項目（201671）。

肖作奇（1987.12-），男，博士，主要從事中藥物質基礎及質量控制研究。

文曉柯（1963.12-），男，碩士，主任藥師；研究方向：中藥研究與開發。